Célula-matriz Extracelular en FPI

1. CÉLULA-MATRIZ EXTRACELULAR
EN FPI
Vanesa Vicens Zygmunt

2. Mediadores
antifibróticos
Mediadores
profibróticos
TGF-β1, IGF-1,
ET-1, PDGF,
TIMPs, KGF,
HGF, ROS,
Th1/Th2
PGE2, MMPs
MEC
Fibroblastos/
Miofibroblastos
MA
CEA II
MI
CEA II
FISIOPATOLOGÍA
El microambiente pro-fibrótico de la MEC contribuiría a los cambios fenotípicos
y de función celular --- perpetuación del proceso.
Vicens-Zygmunt, V.

3. Caracterizar el perfil proteico de la MEC en pulmones de
pacientes con FPI.
OBJETIVOS
Desarrollar una matriz 3D in vitro que mimetice las
condiciones biomecánicas del pulmón FPI, que permita el
cultivo celular en su interior.

4. CARACTERIZACIÓN PROTEICA DE LA MEC EN FPI
RNA
Transcript
Reversa
MICROARRAYS MEC
(84 prots)
cDNA
7 normal
17 FPI
qPCR
WB
IHQ
Expresión
génica
Localización de proteïnas
Confirmación de proteïnas

5. 20 proteínas están
sobreexpresadas en
pulmón fibrótico
6 proteínas están
infraexpresadas en
pulmón fibrótico
DNA-MICROARRAYS
Estany S, et al. BMC Pulm Med. 2014;14:120

6. Rt-PCR
col1a1
col1a2
col3a1
unitatsarbitràries(racBA)
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
Ntx
FPI
*
* p<0,01
Colágeno I y III
M
M
P1
M
M
P2
M
M
P7
M
M
P9
M
M
P12
M
M
P13
unitatsarbitraries(racBA)
0
20
40
60
80
100
Ntx
FPI
*
*
*
**
* p<0,01
Metaloproteinasas
col4a2
Lam
a3
unitatsarbitraries(racBA)
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
Ntx
FPI
*
*
* p<0,01
Proteínas de membrana basal
Responsables de la
degradación de la
MEC, de la mbna basal
y del remodelado
tisular.
Confieren
resistencia al
estiramiento
Anclaje celular
a la membrana
basal
Estany S, et al. BMC Pulm Med. 2014;14:120

7. RESULTADOS
Rt-PCR
TN
C
V
C
A
N
unitatsarbitràries(racBA)
0
1
2
3
4
5
Ntx
FPI
*
*
* p<0,01
Proteínas del intersticio pulmonar
Favorecen la
diferenciación celular,
adhesión y migración.
TNC VCAN
TNC
Actin
Control FPI
Control FPI
TNC/actin
Unidadesarbitrarias(racBA)
WB

8. Inmunohistoquímica

9. DESARROLLO DE UNA MEC 3D
Grupo
carbonil
Grupo
amino
Azúcar reducido:
Glucosa/Ribosa
Proteína
horas días
(Colágeno)
Productos de Amadori
Semanas, meses, añosirreversible
(CHOH)4
CH2OH
Base de
Schiff
Advanced Glication End-products (AGEs)
reversible irreversible
AGE cross-links
COLÁGENO TIPO I con
FIBROBLASTOS en su INTERIOR
GLICACIÓN NO-ENZIMÁTICA

10. DESARROLLO DE UNA MEC 3D
COLÁGENO TIPO I con
FIBROBLASTOS en su INTERIOR
GLICACIÓN NO-ENZIMÁTICA

11. PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D

12. PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D
Estructuras de las fibras de Colágeno I

13. PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D
Formación de AGEs

14. PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D
Dureza

15. VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D
VIABILIDAD FIBROBLASTOS

16. VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D

17. VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D
video

18. CAMBIO EN EL FENOTIPO CELULAR

19. PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS DE MATRIZ (TNC)
EN CULTIVO 3D

20. MUCHAS GRACIAS!
Equipo ufip
Estany S, Vicens-Zygmunt V, Llatjós R, Montes A, Penin R, Escobar I, Xaubet A, Santos S, Manresa F,
Dorca J, Molina-Molina M. Lung fibrotic tenascin-C upregulation is associated with other
extracellular matrix proteins and induced by TGFβ1. BMC Pulm Med. 2014;14:120.
Vicens-Zygmunt V, Estany S, Colom A, Montes-Worboys A, Machahua C, Sanabria AJ, Llatjos R, Escobar
I, Manresa F, Dorca J, Molina-Molina M. Fibroblast viability and phenotypic changes within glycated
stiffened three-dimensional collagen matrices. Respir Res. 2015;16:82.
Proyecto financiado por: ISCIII-FIS, SEPAR, SOCAP, FUCAP