La fluorescencia se utiliza para realizar diagnósticos clínicos precisos mediante el marcaje de sustancias como cromosomas, biomoléculas, células cancerígenas y bacterias con fluorocromos que permiten su visualización bajo microscopía de fluorescencia. Algunas aplicaciones incluyen la detección de enfermedades genéticas a través del estudio de cromosomas, el análisis de tejidos y células mediante marcaje con anticuerpos, y pruebas rápidas para la detección de bacter

1. DIAGNÓSTICOS
«BRILLANTES»
USO DE LA
PARA
EL DIAGNÓSTICO
CLÍNICO
Mª Antonia Rodríguez Ríos, 3ºA

2. ÍNDICE
FLUORESCENCIA: ¿qué es?
¿QUÉ SUSTANCIA FLUORESCENTE SE UTILIZA?
DIFERENTES APLICACIONES:
- Visualización de cromosomas
- En química y medicina
-Estudio y detección de cáncer
-Detección de bacterias
BIBLIOGRAFÍA

3. FLUORESCENCIA
Propiedad de algunas sustancias
absorber energía
(radiación
electromagnética)
onda corta (no visible)
emitir parte de esa
energía
radiación de onda
más larga (visible)

4. SUSTANCIAS QUÍMICAS QUE FLUORECEN AL SER EXCITADAS CON
UNA LUZ DE BAJA LONGITUD DE ONDA POR EJ. LUZ ULTRAVIOLETA
¿Qué son?
fluoresceína rodamina
EJEMPLOS
APLICACIONES
FLUOROCROMOS o
FLUORÓFOROS
Visualización detección de
de ciertos cromosomas y bacterias
biomoléculas

5. EN LA VISUALIZACIÓN DE CIERTOS CROMOSOMAS
Técnica citogenética de marcaje de cromosomas
(campo de la genética que comprende
el estudio los cromosomas)
El ADN es tintado o marcado con la sustancia
fluorescente(FLUORÓFOROS)
Éstos pueden unirse a un
cromosoma específico este segmento
(propio del paciente) se llama SONDA
• ¿CÓMO Y PARA QUÉ SE UTILIZAN?

6. 1º La muestra (IN VITRO) se incuba hasta
alcanzar la tª de fusión del ácido nucléico.
2º Gracias a la tª, la sonda de interes
(marcada con el fluorocromo), se une a la
secuencia escogida.
3º Pasado el tiempo de hibridación, las
láminas son lavadas 2 veces con agua destilada
y secadas al medio ambiente. Así se remueve
la sonda que no se unió.
4º Para evitar la pérdidade fluorescencia, se
añade unos compuestos «antifading», que
evita que esto suceda.
5º Detección de la sonda marcada con un
microscopio de epifluorescencia con diferentes
filtros para los diversos espectros de color.
PROCESO

7. • FUNCIONAMIENTO
MICROSCÓPIO DE EPIFLUORESCENCIA

8. ¿QUÉ ENFERMEDADES SE PUEDEN
DIAGNOSTICAR CON ÉSTE MÉTODO?
13- Sindrome de Patau
Los que 18- Síndrome de Edwars
usualmente 21- Síndrome de Down
sufren X- Síndrome de Turner
anomalías Y- Síndrome de Superhombre
son

9. EN BIOQUÍMICA Y MEDICINA
MICROSCOPÍA DE
FLUORESCENCIA
Se marcan con sustancias
fluorescentes (fluorocromos)
permitiendo que encuentren su
antígeno correspondiente (presente
en la muestra), pudiendo detectar de
forma precisa su situación y cantidad.
Por ejemplo…
Si se maracan con
diferentes
fluorocrómos
(Visualizar mediante un
microscopio de fluorescencia)
DETECCIÓN DE
BIOMOLÉCULAS
(propias del indiv.,
in vitro)
Tejidos
Células
Estructuras
subcelulares

10. FLUORESCENCIA INTRINSECA
EN NUESTRO ORGANISMO
sin necesidad de FLUORÓFOROS CAMBIA CUANDO LA MOLÉCULA SE
ENCUENTRA EN UN AMBIENTE ESPECÍFICO
LA BILIRRUBINA
LA PROTOPORFIRINA ZINC
(en las células sanguíneas)
CUANDO LA
PRODUCCIÓN DEL
GRUPO HEMO ES
INHIBIDO POR LA
EXISTENCIA DE
PLOMO O LA
AUSENCIA DE HIERRO
EN LA SANGRE
tiene una fuerte
fluorescencia
PUDIÉNDOSE DECTECTAR LA
HIPERBILIRRUBINEMIA o ictericia
altamente fluorescente
cuando se une a la
ALBÚMINA SÉRICA
(en un sitio específico)
Se observa mediante un
microscopio de fluorescencia

11. ESTUDIO Y DETECCIÓN DE CÁNCER
Debido a un cambio del PH ácido
se convierten en
fluorescentes
por medio de
SONDAS
CÉLULAS
TUMORALES
VIVAS
se asocian a un
anticuerpo
anticancerígeno
distinguiendo
después de entrar en
Propio de los lisosomas
(orgánulo celular)
IMÁGENES
muy precisas
células cancerígenas
vivas destacan sobre las
sanas

12. SU VISIÓN
• Se emplea un microscopio
• fluorescente, como el de
la imagen. El cirujano lo
emplea para diferenciar
el tumor de las demás
células y extirparlo de
manera precisa.

13. DETECCIÓN DE BACTERIAS
Gracias a un sencillo test, gérmenes y bacterias se iluminan, y comienzan a
fluorescer en un tiempo muy corto.
ADNzimas
Moléculas artificiales que sólo
reacciona aun tipo específico
de bacterias (en este caso E.
coli)
segrega un gran número de
sustancias en su entorno
GERMEN PATÓGENO SE MULTIPLICA
(Experimentos realizados con la bacteria E. coli)
Se unen
colorante
fluorescente
comienza a brillar.
COLORANTE

14. ¿Cómo se pueden ver?
A través de luz
ultravioleta podremos
distinguir en la
muestra las bacterias,
ya que éstas se
iluminarán.

15. USOS
CONTROLES DE SANIDAD EN EMPRESAS
ALIMENTARIA O DE LIMPIEZA
Gracias a este invento ya no son necesarios
equipos sofisticados ni tiempos prolongados
para detectar bacterias o microorganismos.

16. BIBLIOGRAFÍA
• http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0121-08072011000300012
• http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_fluoroforos.htm
• http://es.wikipedia.org/wiki/Hibridaci%C3%B3n_fluorescente_in_situ
• http://www.20minutos.es/noticia/434873/0/fluorescencia/diagnostico/cancer/
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• http://es.wikipedia.org/wiki/Fluorescencia#Bioqu.C3.ADmica_y_medicina
• http://www.dw.de/prueba-fluorescente-para-detectar-bacterias/a-14984072
-IMÁGENES:
• http://images.slideplayer.es/2/149345/slides/slide_20.jpg
• http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/55/Fluorescence_microscop.jpg/150px-Fluorescence_microscop.jpg
• http://www.creces.cl/images/articulos/1b11a8-1.jpg
• http://www.cun.es/actualidad/noticias/uso-microscopio-fluorescente-tumor-cerebral-supervivencia
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