Técnicas histo e IF
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Técnicas frecuentes de diagnostico para patologias de la cavidad bucal. Concretamente se analizan el pénfigo, penfigoide y el liquen plano. Explicaciòn de la biopsia y de la inmunofluorescencia.
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- 1. Técnicas histopatológicas e inmunohistoquímicas Luca Garasto Marco Lenzi Federico Villani
- 2. ESTRUCTURA DELTRABAJO 1) Biopsia: que es y su diferentes tipologías. 2) En que consiste la inmunofluorescencia directa? 3) Describe los hallazgos de inmunofluorescencia directa en LPO, pénfigo y penfigoide. 4) Bibliografía
- 3. BIOPSIA EN ODONTOLOGIA BIOPSIA: QUE ES Y SU DIFERENTE TIPOLOGIAS
- 4. PORQUE ES IMPORTANTE HACER BIOPSIAS? Lesiones con morfología clínica o radiológica semejante Proporciona diagnostico DEFINITIVO, Informaciones sobre el PRONOSTICO de la lesión, Da pautas sobre el TRATAMIENTO ESPECIFICO a seguir PROCEDIMIENTO QUIRURGICO Extirpación de un fragmento de tejido lesionado para remitirlo al anatomo - patólogo.
- 5. indicaciones Lesiones sospechosas de malignidad Lesiones precancerosas Ulceraciones sin causa evidente Lesiones que no mejoran > 2 semanas Lesiones de etiología no clara Las que interfieren con funciones orales DX enfermedades muco-cutáneas con afectación de mucosa oral contraindicaciones Alteraciones leves del desarrollo Lesiones que responden a TT especifico Sospecha de melanoma SOLO EXCISIONAL Lesión vascular solo EXCISIONAL y SOLO en HOSPITAL Glándulas salivales mayores Paciente con patología sistémica importante Si esta cerca estructuras anatómicas complicadas 1)Penfigo 2)penfigoide 3) liquen plano Riesgo diseminació n Riesgo sangrado Riesgo n. facial
- 6. Tipos de biopsia contenido • Solido • liquido finalidad • Diagnostica • Terapéutica • experimental Tipo muestra • Incisional • Excisional -PARCIAL de la lesión. -Se toman muchas de puntos distintos de la lesión -Se incluye tejido sano lateralmente y en profundidad - Extirpación COMPLETA - En lesiones pequeñas - Se incluyen 2-3 mm tejido sano alrededor
- 7. Materialempleado Bisturí frio Punch Punción aspiración Bisturí eléctrico Laser Procesadomuestra En fresco Metacrilato Congelación En parafina Localización Mucosa Submucosa Gl. Salivales Ósea Ganglios linfáticos Piel
- 8. Características de la lesión Momento clínico de la toma Directa Indirecta Preoperatoria Intraoperatoria Postoperatoria
- 9. INMUNOFLUORESCENCIA La inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcación, en una biopsia tomada, que hace uso de anticuerpos unidos químicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada molécula. Técnica de inmuno ensayo [unión Ag-Ac(F)]. Prueba complementaria en estudio anatomopatologico Técnica Inmunohistoquimica que se divide en : a. DIRECTA b. INDIRECTA
- 10. INMUNOFLUORESCENCIA Técnica de inmuno ensayo [unión Ag-Ac(F)] 1) Inmunofluorescencia 2) Precipitación 3) Aglutinación 4) Citometría de flujo 5) ELISA
- 11. INMUNOFLUORESCENCIA Prueba complementaria en estudio anatomopatológico 1) Inmunofluorescencia 2) Tinciones: Hematoxilina e Eosina, Fucsina, Rojo Congo, PAS, ... 3) Tecnica molecular: PCR
- 12. INMUNOFLUORESCENCIA Se diferencia de otras técnicas inmunohistoquimicas en que aquí la marca unida al anticuerpo es una molécula fluorescente tal como el isotiocianato de fluoresceína o rodamina. El anticuerpo marcado se hace reaccionar contra un preparado biológico y luego se expone la muestra así tratada a una fuente de luz de onda corta (ultravioleta o azul) seleccionada por medio de un monocromador Técnica inmunohistoquimica (IMH) que se divide en: INDIRECTADIRECTA
- 14. INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA DIRECTA 1) Más rápida 2) Menos sensible a interferencias debidas a reactividad cruzada de los anticuerpos o a reacciones no específicas 3) Alta especificidad y sensibilidad 4) Menor coste INDIRECTA 1) Mismo conjugado con fluorocromos diferentes 2) Sensibilidad y coloración mayor
- 15. INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA APLICACIÓNES: 1) Detección de moléculas del complemento 2) Cuantificación Ig 3) Diagnostico enfermedades cutáneas 4) Diagnostico de neoplasia 5) Detección de virus, bacterias, hongos, …
- 17. INMUNOFLUORESCENCIA.LPO El liquen plano es una enfermedad mucocutanea de etiología desconocida. Requiere un diagnostico tanto clínico como histológico. Afecta piel, mucosa oral y otras mucosas. 3 formas clínicas: reticular, erosivo y atrófico. IFD: positividad en membrana basal con fibrinógeno.
- 18. INMUNOFLUORESCENCIA.LPO Histológicamente se caracteriza principalmente por: vacuolización marcada de la capa basal, y un infiltrado inflamatorio en banda en la unión dermo- epidermica. Inmunofluorescencia del liquen plano existencia de depósitos globulares de IgM y menos frecuentemente otras inmunoglobulinas en la unión dermo-epidérmica.
- 20. INMUNOFLUORESCENCIA. PENFIGO El pénfigo es un enfermedad autoinmune cuya lesión elemental es una ampolla. El diagnostico requiere histología e inmunofluorescencia. Mediante inmunofluorescencia: IgG, C3 En la membrana de queratinocitos (espacios intracelular) Raramente: IgM
- 22. INMUNOFLUORESCENCIA. PENFIGOIDE El penfigoide es un grupo de enfermedades inflamatorias crónicas autoinmunes. Se manifiestan como ampollas subepiteliales. Dos tipos: Bulloso y PMM (más frecuente). IFD en membrana basal: IgG y C3 ( IgA, IgM).
- 24. BIBLIOGRAFIA Libro: Scully C., Flint S.R., Bagán J.V., Porter S.R., Moos K.F. Oral and Maxillofacial Diseases. Fourth Edition. Informa Healthcare, 2010 Libro: Cawson R.A., Odell E.W. Fundamentos de Medicina y Patología Oral. Octava Edición. Elsevier Churchill Livingstone, 2009 http://www.uv.es/derma/CLindex/CLliquen/CLliquen.html http://www.actasdermo.org/es/penfigo/articulo/13078495/ http://scielo.isciii.es/pdf/odonto/v25n2/original2.pdf
Notas del editor
- Aunque normalmente somos capaces de llegar a un diagnostico mediante los signos y síntomas de una patología, muchas veces nos encontramos frente a lesiones con morfología clínica o radiológica muy similar, con lo cual es imprescindible realizar una biopsia para llegar a un diagnostico definitivo. La biopsia también nos proporciona informaciones útiles para establecer el pronostico y el tratamiento de la lesión. La biopsia de hecho se define como un procedimiento quirúrgico que se lleva a cabo mediante la extirpación de una parte de lesión para remitirlo al anatomopatologo que lo analizarà.
- Es un procedimiento muy indicado en las siguientes situaciones clínicas: lesiones con sospecha de malignidad, lesiones precancerosas, ulceraciones sin una causa evidente, lesiones que cuando se elimina la causa que la produce (que creemos que la produzca) no mejora ni remite en 2 semanas, lesiones cuya etiología no esta clara, las lesiones que interfieren con las funciones orales del paciente. La biopsia ESTA MUY INDICADA PARA EL DIAGNOTICO DE ENFERMEDADES MUCOCUTANEAS QUE AFECTAN A LA MUCOSA (como por ejemplo pénfigo, penfigoide y liquen plano). Al revés la biopsia no se tendrá que utilizar en caso de alteraciones leves del desarrollo (es decir cuando la patología no genera un desarrollo excesivo; por ejemplo lengua geográfica), en lesiones que responden a un tratamiento especifico. En caso de sospecha de melanoma solo se hara biopsia excisional porque la incisional puede producir diseminación de las células dañinas, en caso de lesión vascular solo se hara excisional y en medio hospitalario para evitar un excesivo sangrado, en las glándulas salivales mayores NO se realiza ningún tipo de biopsia por el riesgo de dañar al nervio facial. Tampoco se realiza biopsia en pacientes con importante patología sistémica ni si la lesión esta muy cerca a estructuras anatómicas importantes( nervios, arterias…)
- Existen diferentes tipos de biopsia según como los catalogamos. Según el tipo de muestra la biopsia puede ser INCISIONAL o EXCISIONAL. La incisional consiste en la extirpación PARCIAL de la lesión, tomando varias muestras de la misma lesión, en distintas áreas de la lesión misma. Se incluye tejido sano tanto en los bordes como en profundidad. Normalmene se utiliza en lesiones muy extensas. La biopsia excisional es la extirpación total de la lesión y normalmente esta indicado en lesiones pequeñas o en aquellos casos (como hemos dicho antes) donde la insicional esta contraindicada. Se toma la muestra con tejido sano alrededor de mas o menos 2-3 mm. Según la finalidad con la que tomamos la muestra la biopsia puede ser diagnostica terapéutica o experimental; según el contenido de la lesión la biopsia es liquida o solida.
- Según el material empleado para la toma de la muestra tenemos las técnicas con: bisturí frio, punch, puncion aspiración, bisturí eléctrico, laser. Según como se procesa la muestra tenemos estas posibilidades: en fresco, en metacrilato, por congelación o en parafina. Según la localización de la lesión tenemos biopsias de mucosa, de submucosa, de gl. Salivales, osea, de ganglios linfáticos o de la piel.
- Según las características de la lesión tenemos biopsia directa o indirecta. Finalmente según el momento clínico en el cual se toma la muestra la biopsia puede ser pre, intra o post operatoria.