Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven como telaraña venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se desplaza un punto negro intermitente (el ojo).

1. Ensayos de las vias de
inoculación del huevo
fértil
Practica no. 6

2. Objetivos
 Determinar la viabilidad del embrión al ovoscopio .
 Dominar las técnicas comúnmente utilizadas para la
inoculación de huevos fértiles de ave.
 Diferenciar las estructuras embrionarias observando la
organización de los tejidos fuera de su cutícula.

3.  Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven
como telaraña
venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se
desplaza un punto negro intermitente (el ojo).

4.  Al morir, los vasos se desintegran y este
yace fijo al polo superior del huevo.
 A medida que aumenta de tamaño
disminuye el volumen de los líquidos
extraembrionarios

5. Se emplean huevos con 5 a 14 días de incubación,
según la vía de inoculación:
Membrana corioalantoidea
Cavidades alantoidea y amniótica
Saco vitelino
Intracerebral
Endovenosa.
UTILIDAD: Es una fuente de tejido vivo conveniente y fácil de manipular que se
utiliza en la propagación, titulación e identificación de virus, así como en la preparación
de algunas vacunas virales.

6. MIXOVIRUS
-Influenza
-Parotiditis
POXVIRUS
Viruela
HERPESVIRUS
Herpes
simplex

7. Huevo fértil

8. Material
 Huevos fértiles de ave de 10 días de
inoculación (+/- 1 día), calidad ALPES.
 Ovoscopio y pinzas de disección
 Recipiente para recibir desechos
 Charola porta embriones
 Perforadores, bulbos y lápiz.
 Jeringas de insulina
 Agujas de 20 x 38 mm.
 Colorantes

9. CONFIRMACIÓN DE LA VIABILIDAD DEL EMBRIÓN
 Transluminar cada embrión colocando el
extremo romo en la ventana del ovoscopio.
Un embrión no viable puede reconocerse a
través de:
Desprendimiento de la membrana
corioalantoidea de la parte interna de la
cutícula.
Falta de irrigación.
Falta de movimiento.
Cualquier coloración de verde a negra que
indica por lo general contaminación bacteriana.

11. VIAS DE INOCULACION

13. a Transluminar el huevo fértil con
ayuda del ovoscopio.
b Marcar un punto o cruz de 2 a 3
mm. por arriba del límite de la
cámara de aire del lado contrario
al embrión y en una zona
escasamente irrigada.
c Perforar la marca señalada.
d Con una jeringa que porte aguja
de insulina o tuberculina, inocular
en ángulo de 45 grados con
respecto al huevo fértil de ave.

15. Localizar la parte más alta del embrión
sobre la cámara de aire y marcar con un
punto o cruz.
b Marcar otro punto o guía que indicara
la localización del embrión.
c Perforar la marca señalada
d Introducir una aguja de 20 x 38mm
recta con ligera inclinación opuesta a la
localización del embrión

17. Localizar la parte más alta de la cámara de aire
y marcar un punto o cruz (*).
b Marcar otro punto en la parte media opuesta
a la localización del embrión en un área con la
menor irrigación posible.
c Perforar ambas marcas.
d Succionar con un bulbo de goma a través del
punto marcado en la primera posición (*),
creando así una cámara de aire falsa en la parte
media del embrión.
e Inocular empleando jeringas con aguja de
insulina o tuberculina en el lugar que se
desarrolló la cámara de aire falsa.

19. MEMBRANA VIRUS TIPO DE
EMBRIÓN
CANTIDAD DE
INOCULACIÓN
SIGNOS DE
CRECIMIENTO
Saco vitelino Herpes simple
Neumonía y
Rickettsias
Se emplean
embriones de
5 – 8 días
0.2 – 1 ml Muerte
Cariolantoíes Herpes simple
Poxvirus
Sarcoma de Rous
Varicela
Virus de
Laringotraqueitis
aviar
Enfermedad de
Beyer
Se emplean
embriones de 10 –
12 días
0.1 – 0.5 ml Muerte
Pústulas
Pústulas
Focos o pústulas
fácilmente visibles
Alantoides Influenza
New Castle
Virus de la
bronquitis
infecciosa
Se emplean
embriones de
9 – 12 días
0.1 – 0.2 ml Hemoglutinación
Amniótica Parotiditis
Virus de la Gripe
7 – 15 días 0.1 – 0.2 ml Muerte
Intravenosa Virus de la
Leucemia
10 - 15 días 0.02 - 0.05 ml. Pústulas
Intracerebral Virus del herpes
Rabia
8 – 14 días 0.01 – 0.02 ml Alteraciones
cerebrales

20. VENTAJAS DESVENTAJAS
 Control preciso y fino del medio ambiente
(fácil manipulación)
 Caracterización y homogeneidad de la
muestra
 Economía
 No es necesario el espacio ni el cuidado
que requieren los animales.
 Mantenimiento de los cultivos celulares.
 Se pueden cuantificar aveces al correlacionar el
numero de pustulas con la dilución viral
inoculada. (Herpes y vaccinia).
 Se emplea para preparar vacunas (influenza,
fiebre amarilla)
 Aislamiento para diagnostico (viruela, herpes,
influenza)
 Hacer ensayos de nuevos agentes virales
 técnica sensible
 calidad y costos
 Inestabilidad
 Apreciación difícil durante los tres
primeros días de edad del embrión