El documento describe los principios y métodos de la fijación de tejidos para su análisis microscópico. La fijación química fija las células en un estado físico y químico que resiste cambios morfológicos y descomposición. El formaldehído es el fijador más común debido a su bajo costo, fácil preparación y capacidad para conservar la morfología celular. Otros fijadores como glutaraldehído y tetróxido de osmio se usan para microscop

1. ¿Qué es la Fijación?
• Laboratorio de histología y citología
• Células del tejido se fijan en un estado
químico y físico
• Resistir cualquier cambio morfológico,
distorsión o descomposición

2. FIJADOR IDEAL
Prevención de la autólisis
y descomposición
Mantener el volumen
y la forma de la célula
Acción rápida
Tinciones de alta
calidad
Barato No Tóxico

3. CAMBIOS DEL TEJIDO DURANTE LA FIJACIÓN
Endurecimiento del
tejido
Cambios de densidad
óptica por fijación
Cambia la consistencia
del tejido.
Núcleos pueden parecer
condensados e
hipercromáticos.
Cambios de volumen Interferencia de la
tinción
Tetróxido de Osmio
provoca la hinchazón de
las células.
Tetróxido de Osmio
inhibe la tinción H&E
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4. Tipos
de
Fijación

5. NATURALEZA DE LA FIJACIÓN
Fijación por
inmersión:
Toda la muestra es
sumergida.
Fijación por
recubrimiento:
Fijación por
vapor:
Habitual en muestras
de citología.
Vapor de una sustancia
química para fijar un
frotis.

6. NATURALEZA DE LA FIJACIÓN
Fijación por perfusión
Liofilización
El fijador se infunde en el
sistema arterial del animal.
El tejido se corta y se congela a
temperaturas muy bajas.

7. Precauciones para la fijación
• Libre de exceso de sangre.
• Cortes finos entre 3-5 mm de espesor.
• Líquido fijador debe ser 20 veces superior
al volumen del tejido.
• Frasco con cierre de tapa rosca.

8. MECANISMO
DE
ACCIÓN

9. Factores pueden afectar a la fijación
Concentración de
iones de hidrógeno
(pH):
• pH neutro
• pH entre 6 y 8
• Ninguna distorsión
morfológica
• La alta acidez o
alcalinidad interfiere en
la fijación
• Se añade una solución
tampón para mantener
el pH del fijador.
• Fosfato, bicarbonato,
Tris y acetato.
Temperatura:
• Ambiente - 0 y 45 °C.
• Tiempo de fijación
puede reducirse a
temperaturas más
altas (60- 65 °C).
• Las enzimas se
conservan mejor a una
temperatura más baja
• Histoquímica de las
enzimas son
adecuados 0-4 °C.
Duración de la fijación:
• La velocidad de
penetración es de 1
mm/h.
• Fija el tejido en 24
horas.
• Fijación prolongada
puede causar pérdida
de lípidos, proteínas y
reducción de la
actividad enzimática
• Provocar el
endurecimiento del
tejido.

10. Factores pueden afectar a la fijación
Osmolaridad de la
solución fijadora:
• Hipertónica=
contracción celular
• Hipotónica=
hinchazóncelular
• Se pueden añadir
electrolitos, sacarosa
para mantener la
osmolaridad.
• Ligeramente
hipertónico uso
rutinario
Concentración:
• Muy baja = prolonga
el tiempo de fijación
• Más alta provoca una
fijación rápida.
• Mayor
concentración=
endurecimiento del
tejido, su contracción
y cambios
artefactuales.
• La concentración
óptima es del 10%.
Agitación:
• Aumenta la velocidad
de penetración y,
• Lenta= no tener
efecto en la fijación,
• Rápida= efecto
perjudicial.

11. Fijadores utilizados en el laboratorio
Formaldehído
-Concentración del 37-40%.
-Formalina.
-Se utiliza un 10%
-Penetra 1 mm/h
- 24 horas para la fijación de
un tejido de 1 cm3.
- Volumen de formol: 20
veces el volumen del tejido.
Sumergido
-No debe estar en contacto
con el recipiente
.
Eliminación del formol del
tejido: La reticulación de
los aminoácidos y las
proteínas es lento, lavar el
tejido durante 24 horas, se
elimina el 50% del formol.
Precaución: Irritante para
los ojos y la piel y tóxico
por inhalación.
Elemento cancerígeno.

12. Ventajas
El índice de penetración de la formalina es alto.
Morfología celular bien conservada en formol.
Barato.
Estable.
Fácil de hacer la solución.
La formalina es una fijación eficaz para la tinción

13. Desventajas
Fijación lenta. La reacción de la
formalina con
el tejido es
reversible
El tejido muy
vascular puede
tener gránulos
de color
marrón oscuro
La exposición
a la piel
puede
provocar
dermatitis.
Falla para preservar los
mucopolisacáridos
ácidos.
La inhalación
crónica puede
provocar
bronquitis

14. Preparación de diferentes
soluciones de formol
A. Formalina neutra al 10%:
• Formaldehído, 40%: 100,0 ml
• Agua destilada: 900,0 ml
• Dihidrógeno fosfato de sodio: 4,0 g
• Hidrogenofosfato disódico: 6,5 g
B. Preparación de la solución salina al 10%:
• Formaldehído, 40%: 100,0 ml
• :Cloruro de sodio 9 g
• Agua destilada: 900,0 ml
C. Fijador formal de etanol:
• 95% de alcohol etílico: 20 ml
• Formaldehído, 40%: 10 ml

15. Glutaraldehído
• Fijador para la microscopía electrónica-preserva la ultraestructura.
• La fijación se produce debido a la extensa reticulación de las proteínas.
• El poder de penetración es escaso
• No reacciona con lípidos o hidratos de carbono
• Debe utilizarse en combinación con el otro fijador.
Ventajas:
- Menos contracción celular
-Mejpr conservación de las proteínas
-Buena reticulación con el colágeno.
-Menos irritante.
Desventajas
-La penetración es escasa y el tejido menos
de 0,5 mm de grosor.
-Menos estable.
-No hay fijación de lípidos.
-Costoso

16. Tetróxido
de
osmio
Fijación en microscopía electrónica.
Reacciona las moléculas lipídicas
La penetración es escasa, con cantidad proteínas y carbohidratos
Ventajas:
-Conserva los orgánulos citoplasmáticos, cuerpos de Golgi y
mitocondrias
-No endurece el tejido.
Desventajas:
- Debe utilizarse en combinación con otro fijador.
-Puede reaccionar con el grupo de la ribosa y provocar la aglutinación
del ADN.
-Inflamación de los tejidos.
-Es tóxico y se volatiliza a temperatura ambiente.
-Caro.
-Debe almacenarse en un vial de vidrio, alejado de la luz solar.

17. Metil y alcohol etílico Acetona
Deshidratantes,
Se emplean
principalmente como
fijadores de frotis
citológico
Mercurio y Fijadores
que contienen sal
Líquido de Zenker
Estudio de las enzimas y la
inmuno-citoquímica. Es un
La acetona fría se utiliza a 4 °C
para la fijación.
Fijador de acción rápida, una sustancia.
Los fijadores que contienen mercurio
pueden corroer el metal, por lo que el
fijador debe guardarse en un recipiente de
cristal.
Es un buen fijador para la
cromatina nuclear y el
colágeno.

18. • Contiene ácido pícrico.
• Es un excelente fijador del glucógeno y tejido conectivo.
• La penetración tisular es alta, y fija las biopsias de tejidos
pequeños en 3-4 horas.
• No es adecuado para el estudio cuantitativo del ADN, provoca
la hidrólisis del ácido nucleico.
Desventajas:
Produce una mancha amarilla en el tejido.
Eliminación del color amarillo: Sumergiendo el tejido en carbonato
de litio en alcohol al 70%
Líquido de Bouin

20. Artefactos en la Fijación
A. PIGMENTO DE FORMALINA
• Pigmento color marrón-
negro por la reacción de
la formalina con los
derivados de la
hemoglobina.

22. B. PIGMENTOS DE MERCURIO:
• Depósito
irrecuperable de
color marrón
oscuro.

23. C. MANCHAS DIFUSAS
• Detalles nucleares
y citoplasmáticos
están oscurecidos

24. D. FIJACIÓN PROLONGADA
• Separación de los
tejidos y espacios
vacíos.

26. Bibliografia
Dey, P. (2018). Basic and advanced
laboratory techniques in
histopathology and cytology. Springer
Singapore.