El ELISA es una técnica de inmunodetección que utiliza un antígeno o anticuerpo marcado con una enzima. Existen varios tipos de ELISA como el directo, indirecto y sándwich, los cuales difieren en si se marca el antígeno o anticuerpo con la enzima. Los pasos generales incluyen fijar el antígeno o anticuerpo al soporte, agregar la muestra, unir el antígeno o anticuerpo específico, lavar para eliminar lo no unido, agregar el anticuerpo o antígeno marcado con
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
Twitter.com/@bryanpriegop
INTRODUCCIÓN
La velocidad de sedimentación globular (VSG) es una propiedad física de la sangre. Si se dispone de un tubo de sangre con anticoagulante y se deja en reposo se observa que después de un cierto tiempo las células se sedimentan formando 2 fases bien de limitadas que corresponden al plasma y a las células constituidas prácticamente en su totalidad por hematíes. La VSG es equivalente a la longitud del recorrido descendente de la parte superior de la columna de hematíes en un intervalo determinado de tiempo y varios factores contribuyen a este valor.
FUNDAMENTO
El test de velocidad de sedimentación globular (VSG) mide la sedimentación de eritrocitos en su plasma nativo.
VSG es un test no específico que puede ser utilizado para detectar un amplio rango de enfermedades y para monitorear el curso evolutivo de ciertas enfermedades crónicas como los procesos inflamatorios crónicos (artritis reumatoidea, polimialgia reumática y tuberculosis) o la respuesta a la terapia, por ejemplo con citostáticos (enfermedad de Hodgkin, linfomas y mieloma múltiple). Sin embargo en ocasiones cuadros tan graves como neoplasias y la cirrosis pueden presentar una VSG normal. Constituye uno de los tests más utilizados como screening en el laboratorio clínico. Se trata de un método sencillo para realizar y que requiere equipamiento simple.
OBJETIVO
o Que el estudiante realice el procedimiento de cómo se procesa la velocidad de sedimento globular.
o Que el estudiante conozca e investigue por que se realiza este tipo de prueba en el laboratorio clínico.
o Que el estudiante aprenda a realizar la lectura del VSG.
MATERIALES UTILIZADOS EN LA PRÁCTICA
Sangre total (extracción venosa)
Solución anticoagulante
Pipeta de eritrosedimentación (pipeta de Westergreen)
Soporte que inmovilice la pipeta en posición vertical.
Cronómetro
Aguja
Ligadura
Alcohol
Algodón
INDUMENTARIA
Mandilón
Guantes
INSTRUCTIVO PARA LA OBTENCIÓN DE SANGRE PERIFÉRICA POR PUNCIÓN VENOSA
1. Durante la toma de muestra deben guardarse las más estrictas normas de higiene.
2. El material descartable a usar se abrirá sólo al momento de su utilización y, una vez manipulado, no podrá guardarse nuevamente aun cuando se lo considere nuevo.
3. Una vez realizada la toma de muestra, descartar inmediatamente los materiales usados en recipientes para ese fin.
4. Al momento de hacer la extracción colocarse los guantes desechables, los cuales se mantendrán puestos durante todo el procedimiento.
5. Antes de iniciar la toma de muestra, tener TODO el material preparado.
6. Elegir una vena bien visible en el antebrazo, localizándola visualmente y por palpación.
Colocar el lazo y volver a palpar la vena, indicarle al paciente que abra y cierre el puño para facilitar la extracción.
7. Una vez identificada la vena, limpiar el área circundante con algodón empapado en alcohol. Dejar secar.
Parte 3.2 del Módulo VI del Diplomado en Hematología y Banco de Sangre.
Ponente: Mblgo. José Chafloque Chafloque
Fecha: 25 de Octubre de 2015. Trujillo - Perú.
La prueba ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica utilizada para detectar la presencia de anticuerpos o antígenos en una muestra biológica. Se basa en la unión de un anticuerpo específico a un antígeno, seguido de la unión de una enzima a dicho anticuerpo. La reacción enzimática produce un cambio de color que indica la presencia del anticuerpo o antígeno de interés.
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
Twitter.com/@bryanpriegop
INTRODUCCIÓN
La velocidad de sedimentación globular (VSG) es una propiedad física de la sangre. Si se dispone de un tubo de sangre con anticoagulante y se deja en reposo se observa que después de un cierto tiempo las células se sedimentan formando 2 fases bien de limitadas que corresponden al plasma y a las células constituidas prácticamente en su totalidad por hematíes. La VSG es equivalente a la longitud del recorrido descendente de la parte superior de la columna de hematíes en un intervalo determinado de tiempo y varios factores contribuyen a este valor.
FUNDAMENTO
El test de velocidad de sedimentación globular (VSG) mide la sedimentación de eritrocitos en su plasma nativo.
VSG es un test no específico que puede ser utilizado para detectar un amplio rango de enfermedades y para monitorear el curso evolutivo de ciertas enfermedades crónicas como los procesos inflamatorios crónicos (artritis reumatoidea, polimialgia reumática y tuberculosis) o la respuesta a la terapia, por ejemplo con citostáticos (enfermedad de Hodgkin, linfomas y mieloma múltiple). Sin embargo en ocasiones cuadros tan graves como neoplasias y la cirrosis pueden presentar una VSG normal. Constituye uno de los tests más utilizados como screening en el laboratorio clínico. Se trata de un método sencillo para realizar y que requiere equipamiento simple.
OBJETIVO
o Que el estudiante realice el procedimiento de cómo se procesa la velocidad de sedimento globular.
o Que el estudiante conozca e investigue por que se realiza este tipo de prueba en el laboratorio clínico.
o Que el estudiante aprenda a realizar la lectura del VSG.
MATERIALES UTILIZADOS EN LA PRÁCTICA
Sangre total (extracción venosa)
Solución anticoagulante
Pipeta de eritrosedimentación (pipeta de Westergreen)
Soporte que inmovilice la pipeta en posición vertical.
Cronómetro
Aguja
Ligadura
Alcohol
Algodón
INDUMENTARIA
Mandilón
Guantes
INSTRUCTIVO PARA LA OBTENCIÓN DE SANGRE PERIFÉRICA POR PUNCIÓN VENOSA
1. Durante la toma de muestra deben guardarse las más estrictas normas de higiene.
2. El material descartable a usar se abrirá sólo al momento de su utilización y, una vez manipulado, no podrá guardarse nuevamente aun cuando se lo considere nuevo.
3. Una vez realizada la toma de muestra, descartar inmediatamente los materiales usados en recipientes para ese fin.
4. Al momento de hacer la extracción colocarse los guantes desechables, los cuales se mantendrán puestos durante todo el procedimiento.
5. Antes de iniciar la toma de muestra, tener TODO el material preparado.
6. Elegir una vena bien visible en el antebrazo, localizándola visualmente y por palpación.
Colocar el lazo y volver a palpar la vena, indicarle al paciente que abra y cierre el puño para facilitar la extracción.
7. Una vez identificada la vena, limpiar el área circundante con algodón empapado en alcohol. Dejar secar.
Parte 3.2 del Módulo VI del Diplomado en Hematología y Banco de Sangre.
Ponente: Mblgo. José Chafloque Chafloque
Fecha: 25 de Octubre de 2015. Trujillo - Perú.
La prueba ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica utilizada para detectar la presencia de anticuerpos o antígenos en una muestra biológica. Se basa en la unión de un anticuerpo específico a un antígeno, seguido de la unión de una enzima a dicho anticuerpo. La reacción enzimática produce un cambio de color que indica la presencia del anticuerpo o antígeno de interés.
Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo.
Instrucciones del procedimiento para la oferta y la gestión conjunta del proceso de admisión a los centros públicos de primer ciclo de educación infantil de Pamplona para el curso 2024-2025.
Today is Pentecost. Who is it that is here in front of you? (Wang Omma.) Jesus Christ and the substantial Holy Spirit, the only Begotten Daughter, Wang Omma, are both here. I am here because of Jesus's hope. Having no recourse but to go to the cross, he promised to return. Christianity began with the apostles, with their resurrection through the Holy Spirit at Pentecost.
Hoy es Pentecostés. ¿Quién es el que está aquí frente a vosotros? (Wang Omma.) Jesucristo y el Espíritu Santo sustancial, la única Hija Unigénita, Wang Omma, están ambos aquí. Estoy aquí por la esperanza de Jesús. No teniendo más remedio que ir a la cruz, prometió regresar. El cristianismo comenzó con los apóstoles, con su resurrección por medio del Espíritu Santo en Pentecostés.
ROMPECABEZAS DE ECUACIONES DE PRIMER GRADO OLIMPIADA DE PARÍS 2024. Por JAVIE...JAVIER SOLIS NOYOLA
El Mtro. JAVIER SOLIS NOYOLA crea y desarrolla el “ROMPECABEZAS DE ECUACIONES DE 1ER. GRADO OLIMPIADA DE PARÍS 2024”. Esta actividad de aprendizaje propone retos de cálculo algebraico mediante ecuaciones de 1er. grado, y viso-espacialidad, lo cual dará la oportunidad de formar un rompecabezas. La intención didáctica de esta actividad de aprendizaje es, promover los pensamientos lógicos (convergente) y creativo (divergente o lateral), mediante modelos mentales de: atención, memoria, imaginación, percepción (Geométrica y conceptual), perspicacia, inferencia, viso-espacialidad. Esta actividad de aprendizaje es de enfoques lúdico y transversal, ya que integra diversas áreas del conocimiento, entre ellas: matemático, artístico, lenguaje, historia, y las neurociencias.
Fase 1, Lenguaje algebraico y pensamiento funcional
Fundamentos y tipos de elisa
1. Fundamentos y Tipos de ELISA
Autor: Cultek, S.L.U
El ELISA es una técnica que se basa en el uso de un antígeno o un anticuerpo
marcado con una enzima; al estar uno estos componentes marcado y fijado a un soporte,
se interrumpe la reacción antígeno-anticuerpo, posteriormente se le agrega un sustrato
especifico sobre la enzima que producirá un color determinado observable a simple
vista o cuantificable por un espectrofotómetro o analizar la reacción antígeno
anticuerpo. Existen diversos tipos de ELISA los que se marca el anticuerpo: directo,
indirecto, sándwich: Doble, Heterólogo.
En cuanto a los pasos generales de un ELISA primero se tapizada el antígeno o
anticuerpo, luego se agrega la muestra problema con la mezcla de antígenos o
anticuerpos, se une el antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno ya
tapizado, lavado para eliminar el exceso no unido. Adición del anticuerpo secundario
marcado con la enzima , unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo
,lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no adherida , adición del
substrato, unión del substrato a la enzima, para luego obtener la coloración color
ELISA directo: En este se fija el antígeno al soporte, se lava para eliminar los
no fijados, luego se adicionan los anticuerpos marcados con la enzima para que reacción
con el antígeno y que solubilizado el complejo, se lava para eliminar anticuerpos que no
reaccionaron y se agrega un sustrato específico para la enzima, al final se observa la
coloración. ELISA indirecto: En este la diferencia viene dad que a nivel que el elemento
marcado por la enzima es un anti-anticuerpo que va a reaccionar con el anticuerpo, que
reacciono junto al antígeno previamente fijado; finalmente agrega un sustrato
específico para la enzima, se lava y se observa la coloración.
ELISA sándwich doble: Se fija al soporte el anticuerpo específicos del antígeno
en el suero problema, posteriormente se añade el suero problema y los antígenos de
fijan a los anticuerpo, luego se lava para eliminar elementos no fijados, posteriormente
se añaden anticuerpos conjugados con una enzima(de diferente epítopo a los
previamente fijados) estos reaccionan con los antígenos de la muestra problema que se
encuentran fijados a los otros anticuerpos, se lava la muestra y se añade un sustrato a la
enzima marcadora y se observa el color visual o por colorimetría, en cuanto al ELISA
2. sándwich triple la diferencia viene dada por que los segundos anticuerpos que se
colocan no son marcados con la enzima, si no que luego se coloca anti-anticuerpos
conjugados con la enzima que reaccionaran con los anticuerpo que se colocaron luego,
posteriormente se lava y se coloca el sustrato especifico para la enzima.
ELISA Competitivo: Fijación de anticuerpos específicos al soporte anticuerpos,
adición en concentración conocida de una mezcla de antígenos del anticuerpo utilizado
en el paso anterior, marcados con una enzima y antígenos desconocidos (objeto de
estudio).Al mismo tiempo, añadir únicamente antígenos del anticuerpo usado en el paso
anterior, marcados con una enzima, lavar. Agregar un substrato sobre el que sea capaz
de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea. Lectura visual o
colorimétrica del producto final coloreado de ambas pruebas y comparar los resultados.
Si las lecturas de ambas pruebas son iguales, el antígeno a estudio no tiene nada que
ver con los anticuerpos empleados en el soporte. Si hay diferencia en las lecturas de
ambos pocillos, el antígeno objeto de estudio, está relacionado con el anticuerpo
empleado para tapizar el soporte y la diferencia de absorbancia o densidad óptica, es
proporcional a la concentración del antígeno problema.
Métodos específicos
Para lograr el tapizado de antígenos y anticuerpos de diluye el antígeno o
anticuerpo en tampón carbonato (pH 9,6) y se incuba luego durante 3h a 37°C o 16h a
4°C, también de puede incubar a 40-50°C en tampón fosfato (PBS) o en agua fisiológica
tamponada pH 7,2-7,4. En cuanto a la solución de lavado se elaborara una solución
salina con Tween 20 como agente tensioactivo8, 5gr. De igual forma se debe conjugar
la enzima, esta debe de poder unirse fácilmente a antígenos y anticuerpos, un substrato
cromogénico o fluorogénico conveniente. Las enzimas más utilizadas son las fosfatas
alcalina, peroxidasa de rábano y ß-galactosidasa.
3. Métodos de lectura de resultados
Colorimetría: En estos ensayos se obtiene un producto de reacción coloreado que
absorbe luz, siendo la densidad óptica (DO) del mismo proporcional a la cantidad de
producto medido. Para todos los ensayos enzimáticos, la etapa final es la adición del
substrato enzimático, este es escogido por su rendimiento en la reacción enzimática.
Para ensayos colorimétricos, la tasa de desarrollo de color es proporcional, dentro de un
cierto rango, a la cantidad de conjugado enzimático presente.
Fluorescencia: La fluorescencia es una variación de la colorimetría en este un
producto de reacción emite fluorescencia cuando es excitado a una determinada
longitud de onda, siendo las unidades relativas de fluorescencia (fotones de luz
emitidos) proporcionales a la cantidad de producto analizado. En comparación con los
métodos colorimétricos, los ensayos de fluorescencia son ligeramente más sensibles y,
sufren a cambios de pH, temperatura, restos de detergente en el lavado y concentración
iónica. Lo que lo hace mas funcional es que amplia el rango de medida en cuanto al
obtenido en los ensayos colorimétricos.
Luminiscencia: En este proceso la enzima actúa sobre un sustrato generando un
producto capaz de emitir fotones en lugar de generar un color visible, este proceso se
define como la capacidad de emitir luz por parte una sustancia esta puede ser mediante
una reacción química (quimioluminiscencia), mediante una longitud de onda
(fotoluminiscencia= florescencia) o mediante un producto al ser degradado
(bioluminiscencia).
Para poder interpretar los resultados, se puede observar el color a simple vista,
pero el ojo humano no es capaz de notar la variación de 0,1 de densidad óptica, por eso
se usa el espectrofotómetro para poder así cuantificar los resultados. Es importante
resaltar que las soluciones ELISA es un método de inmunodetección que se utiliza para
detectar diversas patologías animales y vegetales.