Este documento describe un experimento para determinar la concentración de glucosa en la sangre (glicemia) mediante espectrofotometría. Se prepararon 4 tubos con diferentes soluciones y se midió su absorbancia. Los resultados mostraron que tanto el suero normal como el patológico tenían niveles de glucosa dentro del rango normal. El método permitió medir de manera efectiva la glicemia.

1. “Determinación de la
concentración de glucosa
sanguínea (glicemia)”
Paloma Carus; Silvana Donoso; Dayane Rivera; María José Astorga
Fecha: 22 mayo 2012
La glicemia es la medida de la cantidad de glucosa (azúcar) en la sangre.
Mediante una técnica llamada “Química seca”, es posible monitorear
permanentemente la glicemia capilar en pacientes que lo requieran, por
lo cual, mediante indicadores de riesgo tendremos una señal de aviso
muchas veces antes de la manifestación de una enfermedad.

2. INTRODUCCIÓN
¿Cómo determinar la concentración de glucosa en la sangre (glicemia)?
Pregunta que se nos planteó al comenzar nuestro informe, para esto
realizaremos la técnica de espectrofotometría la cual consiste en una
determinación de las concentraciones de un compuesto en solución, que
en este caso sería la concentración de glicemia en la sangre, para esto
utilizamos 4 tubos a los cuales se les agregará distintos soluciones, las
cuales abordaremos con mayor profundidad al desarrollar nuestro
informe. Para comenzar es importante saber ¿qué es la glicemia? y ¿qué
función cumple en nuestro organismo?
La glicemia se define como el valor de los niveles de azúcar presentes en
la sangre (se mide en miligramos por decilitro (mg/dl)); estos azúcares son
los que ingerimos en los alimentos y los que son absorbidos por el
organismo. Teniendo un valor normal de ésta que fluctúa entre los 76 –
110mg/dl. Alteraciones de este rango puede llevar a predecir indicios de
diabetes mellitus.
Con los distintos componentes que tendremos en nuestros tubos
observaremos la glicemia en suero normal y patológico después de
cierto tiempo junto con la técnica de espectrofotometría pudiendo
explicar y determinar lo ocurrido en cada tubo.

3. MATERIALES Y MÉTODOS
Para comenzar tenemos que tener en cuenta los materiales que
utilizamos en nuestro trabajo:
Espectrofotómetro ajustado a 510 nm.
Cubetas de plástico de 1,5 ml.
Material volumétrico (micropipetas de 100 ul, tubos de ensayo).
Muestras de suero.
Kit para la determinación enzimática de glucosa sérica.
Timer o cronómetro.
¿Cómo fue realizado?
Primero adquirimos los cuatro tubos de ensayo que utilizaríamos y los
rotulamos con distintos números para poder así evitar cualquier tipo de
confusiones; se procedió a puncionar con una lanceta la yema de un dedo
para obtener una pequeña muestra de sangre la cual se utilizaría
colocándola en una tira reactiva la cual indica la cantidad de glucosa que
contiene la sangre y pudiendo llegar así a determinar la concentración de
glucosa en suero normal y patológico. Entonces al primer tubo le
agregamos 10µl de agua (H₂O); al segundo tubo 10 µl de solución
estándar; al tercer tubo 10µl de suero normal y el cuarto tubo 10µl de
suero patológico. Además a cada uno de estos tubos luego se les
incorporó 1ml de reactivo. Vale recordar que dicho reactivo es el
denominado complejo enzimático (GOD-PAP).
Dicho método permite la cuantificación de la glucosa sérica mediante las
siguientes reacciones enzimáticas:

4. 
 Previamente incubamos los tubos 10 minutos a temperatura
ambiente.
 Las muestras que poseíamos a temperatura ambiente se
procedieron a cargar en cubetas de plástico de 1,5ml para llevarlas al
espectrofotómetro previamente ajustado a 510 nm.
 Una vez entregado el % de absorbancia analizaremos y
discutiremos los resultados obtenidos.

5. RESULTADOS
1) Preparamos los 4 tubos con las concentraciones respectivas :
Tubo 1 tubo 2 tubo3 tubo4
Tabla 1:
Tubo Tubo Tubo Tubo
blanco estándar suero suero
normal patológico
H₂O 10µl -------- -------- --------
Estándar
glucosa -------- 10µl -------- --------
(100mg/dl)
Suero -------- -------- 10µl --------
normal
Suero
patológico -------- -------- -------- 10µl
Reactivo 1ml 1ml 1ml 1ml

6. 2) Incubamos los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente y
introducimos al espectrofotómetro previamente ajustado a 510nm
dando como resultado las siguientes observancias:
Tubo T% Absorbancia
1 82,7 0,083
2 42,7 0,370
3 45,3 0,344
4 46,2 0,336
 Cálculo de concentración:
Glicemia (mg/dL) = ∆ Absorbancia de la muestra x 100
∆ Absorbancia del Estándar
 Donde:
∆ Absorbancia de la muestra: Abs. de cada tubo – Abs. tubo blanco
∆ Absorbencia del Estándar: Abs. tubo estándar – Abs. tubo blanco

7.  Tubo 1:
Glicemia (mg/dL) = (0)x 100= 0 mg/dL
0,287
 Tubo 2:
Glicemia (mg/dL) = (0,287) x 100= 100 mg/dL
0,287
 Tubo 3:
Glicemia (mg/dL) = (0,261) x 100= 90,9 mg/dL
0,287
 Tubo 4:
Glicemia (mg/dL) = (0,253) x 100= 88,2 mg/dL
0,287

8. DISCUSIÓN
-La glicemia se determinó por el método de GOD-PAP (prueba
enzimática colorimétrica por glucosa) a muestras de suero normal y
patológico; arrojando un valor de 90,9mg/dL y 88,2mg/dL
respectivamente. Lo que demuestra q tanto el suero normal como el
patológico se encuentran dentro de un rango normal a lo establecido por
los valores de referencia (76-110 mg/dL) previamente informados.
-Mediante el método de química seca un alumno integrante del grupo
procedió a realizarse el examen que determinaría su glicemia capilar
obteniendo un valor de 91mg/dL, lo cual se considera finalmente como
normal.
-Glicemia es la medida de la cantidad de glucosa (azúcar) presente en
la sangre en mg/dL.
Los valores normales para los métodos descritos en el presente práctico
oscilan entre 70-110 mg/dL.
Entre las patologías relacionadas con la glicemia se encuentran, la
hiperglicemia, la cual se define como un alza de glucosa en la sangre en
más de 180 mg/dL. La causa principal de hiperglicemia es la Diabetes
mellitus, la cual es un desorden metabólico crónico caracterizado por
niveles elevados de glucosa en la sangre, como consecuencia de una
alteración y/o acción de la insulina.
-Respecto al método de análisis utilizado en este práctico es colorimétrico
enzimático el experimento realizado, porque no estamos agregando
exteriormente cualquier molécula o parte de una molécula responsable
por el color del material, es decir, un cromóforo, el cual le da dicha
propiedad. Más bien, mediante reacciones enzimáticas, moléculas que
no poseen la propiedad de absorber luz, logran cumplir la función.
-Hay una diferencia claramente destacable entre el método colorimétrico
enzimático realizado en el práctico anterior “método de Biuret”, al cual le
añadimos sulfato cúprico -CuSO4- (un cromóforo) que le da la propiedad
de absorber luz, y en consecuencia, en este práctico mediante reacciones
enzimáticas, se obtiene una propiedad de absorbancia en la muestra
obtenida.

9. -La concentración de la glucosa (sustrato), en relación al Km de la enzima
es directamente proporcional al producto final detectado (compuesto
coloreado quinoneimina). Así es posible determinar la concentración del
sustrato, mediante la presencia de absorbancia.
-Con relación a la velocidad de reacciones enzimáticas, descrita por la
“cinética de Michaelis-Menten”, nos dice concretamente que a mayor
Concentración de sustrato, se trabaja en la parte superior de la curva, y a
menor concentración de sustrato, se trabaja en la parte inferior. Por otro
lado, y si la concentración de sustrato es infinita se trabaja a una Vmáx.
Por lo tanto, los sitios activos de la enzima están saturados con sustrato a
causa de que se está trabajando a un nivel máximo.
-El producto que absorbe a la longitud de onda y que presenta una
máxima absorbancia de 510nm, es el compuesto coloreado quinoneimina.
-El uso de enzimas como herramientas para la determinación de
sustratos, es con el fin de dar la propiedad de absorber luz a moléculas
que se deseen medir, y una de esas formas es mediante reacciones
enzimáticas que producen cambios bioquímicos de gran importancia en
las moléculas para que presenten una absorbancia debidamente
realizada.
-La base de un cálculo en la concentración de un sustrato (glicemia),
mediante una reacción colorimétrica enzimática, utilizando un estándar
de concentración previamente vista se realiza con el fin de obtener los
valores de la concentración de glucosa de la muestra (glicemia
(mg/dl)).Con lo cual mediante una relación de proporcionalidad se debe
obtener primero la absorbancia de la muestra (de cada tubo) y la
absorbancia del tubo estándar de concentración conocida.

10. CONCLUSIÓN
Para concluir es importante recordar que la glicemia se definía como el
valor de los niveles de azúcares presentes en la sangre, estos azúcares
provienen de los alimentos que ingerimos, particularmente
carbohidratos. Estas concentraciones pueden ser niveladas por diversos
factores como las hormonas. Los hidratos de carbono también serán
utilizados por el organismo como una de las principales fuentes de
energía, demostrando la reacción enzimática a las cuales fue expuesta
nuestra muestra de sangre, para observar la glicemia tanto en suero
patológico como normal.
Como resultado de la técnica de espectrofotometría, la solución de suero
normal presentaba una concentración de absorbancia mayor que las otras
soluciones; además conocemos el método de química seca que permite
mediante el mismo proceso de reacción enzimática obtener valores de
glicemia.
El déficit de glucosa en el organismo puede causar distintas patologías
como es el caso de la Diabetes mellitus, enfermedad crónica que afecta a
gran parte de la población, la cual, consiste en una incapacidad del
páncreas para producir una hormona llamada insulina. Otra patología es
la hiperglucemia que es el aumento de glucosa en la sangre,
encontrándose por sobre de los valores normales 70-110mg/dL y llegando
en ayunas a 126 mg/dL. Entre las causas tenemos, enfermedades
cardíacas, trastornos de nutrición y digestivos, medicación, etc; siendo su
contrario la hipoglucemia, que es la disminución de este azúcar en la
sangre. El método comúnmente realizado que permite conocer
inmediatamente los posibles valores de glicemia, es la técnica de
química seca.

11. BIBLIOGRAFÍA
 http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/glicem
ia.htm
 Guías de trabajos prácticos BIOQUIMICA, Tecnología
Médica 2012
 http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=s0034-
98872006000900009&script=sci_arttext
 http://www.biologia.edu.ar/macromoleculas/azucar.htm
 http://www.bioacademia.com.mx/miembros/tecnologia/00
09.html