Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium bovis (99,95 %)
 Bacilo de Calmette-Guerin o BCG
Mycobacterium africanum (subtipos I y II)
Mycobacterium microti. (roedores)
 Homogeneidad en la secuencia de nucleótidos
 Variaciones en cuanto a poder patógeno,
distribución geográficas, epidemiología, hospedador
preferente, características fenotípicas.
 Morfología variable (bacilar o cocoide)
 Bacterias
 Inmóviles, no poseen flagelos ni cápsula
 No forman esporas
 En algunos casos forman filamentos ramificados
 Poseen una pared celular gruesa con alto contenido lipídico
 Requieren de una fuente de carbono (glicerol) y nitrógeno
(amonio o aminoácidos) y sales minerales
 Temperatura óptima de crecimiento 35-37°C
 Resistentes a ácidos, álcalis, desinfectantes químicos, desecación y congelación
 Sensibles a la luz solar, pasteurización, formaldehído, glutaraldehído, fenol, etanol
al 70%
Epidemiología
 Agente causal de la tuberculosis
 El ser humano es el único reservorio natural
 Segunda causa de muerte después del HIV.
 Se transmite por contacto directo con una
persona infectada mediante aerosoles, micro
lesiones cutáneas, vía gastrointestinal.
 Según la OMS una tercera parte de la población
mundial presenta infección por M. tuberculosis
 Distribución mundial, especial importancia en
países no desarrollados
 Mayor incidencia en África, Sudeste Asiático y
Europa del Este
Epidemiología
Factores que influye en el contagio con un paciente bacilífero:
a) La capacidad contagiante del paciente, relacionada con la cantidad de
bacilos presentes en el esputo, la intensidad y la frecuencia de la tos, la
existencia de cavitación en la radiografía del tórax.
b) Grado de intimidad y duración de la exposición. Hacinamiento
Epidemiología
 Población de riesgo:
 Personas sin viviendas
 Alcohólicos
 Drogadictos
 Reclusos
 Individuos infectados por HIV
 Profesionales sanitarios
Patogenia
Patogenia
 Primera etapa: Establecimiento
 Segunda etapa: Replicación intracelular
 Tercera etapa: Diseminación
 Cuarta etapa: Daño tisular
Patogenia
Patogenia
Patogenia
Manifestaciones clínicas
 La tuberculosis tiene un comienzo insidioso.
Síntomas inespecíficos como malestar general,
adelgazamiento, tos y sudoración nocturna
 El esputo puede ser escaso o
hemoptísico y purulento
 Tuberculosis extrapulmonar por resultado de la diseminación hematógena
Manifestaciones clínicas
Tuberculosis pulmonar y torácica
Síntomas: tos, expectoración, en ocasiones
hemoptoica, dolor torácico, fiebre, sudoración,
astenia, anorexia y pérdida de peso, disnea.
 TB pleural: Dolor torácico, disnea, fiebre. Derrame pleural
 TB ganglionar: Más frecuente en niños
 TB endobronquial: Lesiones localizadas, perforación bronquial
 TB pericárdico: Derrame pericárdico. Insidiosa
Manifestaciones clínicas
Tuberculosis extratorácica
 Menos frecuente
 Pérdida de peso más habitual
 Mayor predisposición en pacientes HIV,
inmunosuprimidos, mujeres raza no caucásica
 Puede coexistir con TB pulmonar
 TB del sistema nervioso central
 Por diseminación hematógena
 Meningitis tuberculosa
 Fatal sin tratamiento
 Síntomas de inicio inespecífico (astenia, anorexia, cefalea)
 Otras formas de TB en el sistema nervioso central: Los
tuberculomas, abscesos cerebrales, la hidrocefalia con
hipertensión intracraneal y los infartos isquémicos
 TB osteoarticular
 La localización vertebral es la más frecuente
 De evolución lenta, sintomatología inespecífica
 Artritis tuberculosa
Manifestaciones clínicas
Tuberculosis extratorácica
 TB urinaria
 Por diseminación hematógena
 Síntomas: polaquiuria, disuria y hematuria
 Fibrosis, hidronefrosis
 TB genital
 Se asocia con TB del tracto urinario
 En el hombre la localización prostática se manifiesta
en forma de molestias locales, polaquiuria, urgencia
miccional o hematospermia. Fístula escrotal
 En las mujeres se localiza en las trompas de falopio y
endometrio. Causa infertilidad
Manifestaciones clínicas
Tuberculosis extratorácica
 TB ganglionar
 Por diseminación hemática o linfática
 Ganglios linfáticos cervicales y supraclavicular
 TB miliar
 Diseminación hematógena a
múltiples órganos
 Cuadro clínico variable
 Puede asociarse con meningitis
tuberculosa
 Aguda y crónica
 Anomalías hematológicas
 TB laríngea
 Es altamente contagiosa, se asocia a TB pulmonar
 TB cutánea
 TB gastrointestinal
Manifestaciones clínicas
Tuberculosis extratorácica
Diagnóstico
1. Indicios radiológicos de enfermedad pulmonar
2. Resultados positivos de la prueba de reactividad cutánea
3. Detección en el laboratorio de micobacterias al
microscopio o en el cultivo
En adulto las 3 características mas importantes son:
Anormalidad en el vértice
posterior de un lóbulo
pulmonar
Infiltrado homogéneo en el
vértice posterior de un lóbulo
pulmonar
Diseminación
broncógena
Diagnóstico
Signos radiológicos
Método estándar utilizado para determinar si una persona esta
infectada por Mycobacterium tuberculosis
Koch obtuvo por filtración durante 6 semanas un liquido negruzco
y espeso o ( tuberculina vieja )
Derivado proteico purificado de Seibert (PPD-S) material
preferido para la prueba cutánea. Técnica de Mantoux
Prueba de la Tuberculina (PPD)
Se inyecta 0,1 ml de
tuberculina en el
antebrazo
La reacción debe revisarse
entre las 48-72 horas
Resultados
6 a 10 mm +
5 mm (dudosa)
4 mm negativo
Si forma induración de 10
mm o mas de diámetro es
positivo
Prueba de la Tuberculina (PPD)
Falsos positivos:
 Vacunación previa con BCG
 Infección por micobacterias no tuberculosa
 Interpretación incorrecta de la reacción
 La utilización de un antígeno equivocado
Falsos negativos:
 Anergia cutánea
 Infección de tuberculosis reciente
 Vacunación reciente con un virus vivo
 Tratamiento con drogas inmunodepresoras
Una induración de 6 mm o mas se considera positiva:
Personas infectadas por VIH
Contacto reciente con otra persona enferma de tuberculosis
Personas inmunodeprimidas
Una induración de 10 mm o mas se considera positiva:
 Usuarios de drogas inyectable
 Bebes, niños y adolecentes expuestos a adultos que
pertenezcan a grupo de alto riesgo
 Personal de salud
Prueba de la Tuberculina (PPD)
Prueba de la Tuberculina (PPD)
Se debe tener en cuenta:
Se hace positiva a las 4 a 6 semanas del comienzo
de la infección, es positiva para toda la vida
Puede transmitirse de una persona tuberculina
positiva a tuberculina negativa
La vacuna BCG produce el viraje tuberculínico y esta
positividad se mantiene entre 4 a 8 años
MUESTRA
ESPUTO
LCR
BIOPSIAS ASPIRADO
GÁSTRICO
DESCONTAMINACIÓN
NaOH 1,2,4%
HOMOGENIZACIÓN
N- acetilcisteina
PROCESAR LAS MUESTRAS TINCIÓN DE
ZIELHL-NEELSEN
CULTIVOS
• Evitar el uso de las torundas o hisopos
• La muestra debe enviarse sin fijadores ni conservantes
• Las muestras se deben recoger en contenedores estériles
• Procesamiento inmediato, de lo contrario refrigerar
• Utilización de medios de descontaminación ( si la muestra lo requiere)
• Utilización de cabinas de bioseguridad
Muestra
 Muestras respiratorias
Esputo
 Debe recogerse en la mañana
 En ayunas
 3 días consecutivos (5-10 ml)
Muestras por técnicas
broncoscópicas
 Enviar 5ml para su estudio
 Procesar lo antes posible
Biopsias respiratorias  1 gr. De tejido
Recolección de muestras
 Líquidos estériles  Recoger el mayor volumen posible (10-15 ml)
 Líquido articular debe recogerse en tubo con
anticoagulante
 No necesitan ser descontaminadas antes del cultivo
 Tejidos
 Enviar al laboratorio con suero fisológico o medio
líquido 7H9 de Middlebrook
 Nunca utilizar formol
Recolección de muestras
 Orina
 Primera hora de la mañana
 Micción espontánea, sonda, punción suprapúbica
 3 a 5 muestras de orina en días consecutivos
 Mismas precauciones que en cualquier urocultivo
Recolección de muestras
TINCIONES
• ZIEHL -NEELSEN
• KINYOUN
Procesamiento de las muestras
Microscopía
• AURAMINA RODAMINA
Examinar el frotis en objetivo de inmersión e informar:
Observación microscópica Informe
No se observaron BAR en 100 campos observados Negativo
Menos de 1 BAR x C. en 100 campos observados +
De 1 a 10 BAR x C. en 50 campos observados ++
Más de 10 BAR x C. en 20 campos observados +++
Al examinar el extendido, si se consiguen de 1 a 4 bacilos
en 100 campos, leer otros 100. si persiste este número,
informar y solicitar otra muestra
Los microorganismos ácido-alcohol resistentes emiten una
fluorescencia amarilla brillante cuando se activan con luz ultravioleta
de onda corta. La coloración de contraste con permanganato de
potasio hace que el fondo de detritos inespecíficos emitan
fluorescencia de color amarillo pálido, que contrasta con el aspecto
amarillo brillante de los bacilos ácido-alcohol resistentes.
Número de bacilos Informe
Cero No se observan BAR
1-2 en todo el frotis Informar la cantidad observada y solicitar la
repetición
1-9 cada 10 campos Escasos o 1 +
1-9 por campo Pocos o 2+
10-90 por campo Abundantes o 3+
>90 por campo 4+
La American Lung Association recomienda el siguiente método para las coloraciones con fucsina,
aplicables también a las coloraciones fluorescentes:
Cultivo de muestras
Medios de Cohen y de Middlebrook
 Permite la detección del crecimiento luego de 10 a 12 días
 Incluye biotina y catalasa para estimular el aislamiento de los bacilos
 Contiene albúmina, verde de malaquita, base de huevo
Cultivo de muestras
 Medios de cultivo no selectivos
• LOWENSTEIN –JENSEN
COLONIAS DE MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS DESPUÉS
DE 8 SEMANAS DE INCUBACIÓN
COLONIAS RUGOSAS
COLOR CREMA SECAS IRREGULARES
Cultivo de muestras
Identificación mediante métodos convencionales
 Temperatura óptima para el crecimiento y velocidad de
crecimiento
 Producción de pigmento
 Acumulación de niacina
 Reducción de nitratos a nitritos
 Hidrólisis de Tween 80°
 Actividad de catalasa
 Actividad de arilsulatasa
 Actividad de ureasa
 Pirazinamidasa
 Captación de hierro
 Inhibición del crecimiento por la hidrazida del ácido
tiofeno-2-carboxílico
 Crecimiento en cloruro de sodio al 5 %
 Crecimiento en agar MacConkey
Cultivo de muestras
MICROORGANISMO NIACINA NITRATO CATALASA TWEEN-80 CAPTACIÓN DE HIERRO ARILSULFATASA UREA
M . TUBERCULOSIS
+ + - V - V
M. KANSASII
- + + + - +
M. AVIUM
- - V - - -
M. FORTUITUM
- + + V + + +
M. CHELONAE V
- V V - + +
V =VARIABLE
Pruebas bioquímicas
• SONDA GENÉTICAS (PCR)
• CULTIVOS RADIOMÉTRICO BACTED TB
MÉTODO ESPECIFICO RÁPIDO SENSIBLE PARA
IDENTIFICAR MICOBACTERIAS
Contiene Middlebrook 7H12
Con antibiótico , las micobacterias metabolizan
el sustrato (acido palmítico) y liberan CO2
Avances en la identificación de micobacterias
Micobacterias tuberculosas

Micobacterias tuberculosas

  • 2.
    Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium bovis(99,95 %)  Bacilo de Calmette-Guerin o BCG Mycobacterium africanum (subtipos I y II) Mycobacterium microti. (roedores)  Homogeneidad en la secuencia de nucleótidos  Variaciones en cuanto a poder patógeno, distribución geográficas, epidemiología, hospedador preferente, características fenotípicas.
  • 3.
     Morfología variable(bacilar o cocoide)  Bacterias  Inmóviles, no poseen flagelos ni cápsula  No forman esporas  En algunos casos forman filamentos ramificados  Poseen una pared celular gruesa con alto contenido lipídico  Requieren de una fuente de carbono (glicerol) y nitrógeno (amonio o aminoácidos) y sales minerales  Temperatura óptima de crecimiento 35-37°C  Resistentes a ácidos, álcalis, desinfectantes químicos, desecación y congelación  Sensibles a la luz solar, pasteurización, formaldehído, glutaraldehído, fenol, etanol al 70%
  • 4.
    Epidemiología  Agente causalde la tuberculosis  El ser humano es el único reservorio natural  Segunda causa de muerte después del HIV.  Se transmite por contacto directo con una persona infectada mediante aerosoles, micro lesiones cutáneas, vía gastrointestinal.  Según la OMS una tercera parte de la población mundial presenta infección por M. tuberculosis  Distribución mundial, especial importancia en países no desarrollados  Mayor incidencia en África, Sudeste Asiático y Europa del Este
  • 5.
    Epidemiología Factores que influyeen el contagio con un paciente bacilífero: a) La capacidad contagiante del paciente, relacionada con la cantidad de bacilos presentes en el esputo, la intensidad y la frecuencia de la tos, la existencia de cavitación en la radiografía del tórax. b) Grado de intimidad y duración de la exposición. Hacinamiento
  • 6.
    Epidemiología  Población deriesgo:  Personas sin viviendas  Alcohólicos  Drogadictos  Reclusos  Individuos infectados por HIV  Profesionales sanitarios
  • 7.
  • 8.
    Patogenia  Primera etapa:Establecimiento  Segunda etapa: Replicación intracelular  Tercera etapa: Diseminación  Cuarta etapa: Daño tisular
  • 9.
  • 10.
  • 11.
  • 12.
    Manifestaciones clínicas  Latuberculosis tiene un comienzo insidioso. Síntomas inespecíficos como malestar general, adelgazamiento, tos y sudoración nocturna  El esputo puede ser escaso o hemoptísico y purulento  Tuberculosis extrapulmonar por resultado de la diseminación hematógena
  • 13.
    Manifestaciones clínicas Tuberculosis pulmonary torácica Síntomas: tos, expectoración, en ocasiones hemoptoica, dolor torácico, fiebre, sudoración, astenia, anorexia y pérdida de peso, disnea.  TB pleural: Dolor torácico, disnea, fiebre. Derrame pleural  TB ganglionar: Más frecuente en niños  TB endobronquial: Lesiones localizadas, perforación bronquial  TB pericárdico: Derrame pericárdico. Insidiosa
  • 14.
    Manifestaciones clínicas Tuberculosis extratorácica Menos frecuente  Pérdida de peso más habitual  Mayor predisposición en pacientes HIV, inmunosuprimidos, mujeres raza no caucásica  Puede coexistir con TB pulmonar
  • 15.
     TB delsistema nervioso central  Por diseminación hematógena  Meningitis tuberculosa  Fatal sin tratamiento  Síntomas de inicio inespecífico (astenia, anorexia, cefalea)  Otras formas de TB en el sistema nervioso central: Los tuberculomas, abscesos cerebrales, la hidrocefalia con hipertensión intracraneal y los infartos isquémicos  TB osteoarticular  La localización vertebral es la más frecuente  De evolución lenta, sintomatología inespecífica  Artritis tuberculosa Manifestaciones clínicas Tuberculosis extratorácica
  • 16.
     TB urinaria Por diseminación hematógena  Síntomas: polaquiuria, disuria y hematuria  Fibrosis, hidronefrosis  TB genital  Se asocia con TB del tracto urinario  En el hombre la localización prostática se manifiesta en forma de molestias locales, polaquiuria, urgencia miccional o hematospermia. Fístula escrotal  En las mujeres se localiza en las trompas de falopio y endometrio. Causa infertilidad Manifestaciones clínicas Tuberculosis extratorácica
  • 17.
     TB ganglionar Por diseminación hemática o linfática  Ganglios linfáticos cervicales y supraclavicular  TB miliar  Diseminación hematógena a múltiples órganos  Cuadro clínico variable  Puede asociarse con meningitis tuberculosa  Aguda y crónica  Anomalías hematológicas  TB laríngea  Es altamente contagiosa, se asocia a TB pulmonar  TB cutánea  TB gastrointestinal Manifestaciones clínicas Tuberculosis extratorácica
  • 18.
    Diagnóstico 1. Indicios radiológicosde enfermedad pulmonar 2. Resultados positivos de la prueba de reactividad cutánea 3. Detección en el laboratorio de micobacterias al microscopio o en el cultivo
  • 19.
    En adulto las3 características mas importantes son: Anormalidad en el vértice posterior de un lóbulo pulmonar Infiltrado homogéneo en el vértice posterior de un lóbulo pulmonar Diseminación broncógena Diagnóstico Signos radiológicos
  • 20.
    Método estándar utilizadopara determinar si una persona esta infectada por Mycobacterium tuberculosis Koch obtuvo por filtración durante 6 semanas un liquido negruzco y espeso o ( tuberculina vieja ) Derivado proteico purificado de Seibert (PPD-S) material preferido para la prueba cutánea. Técnica de Mantoux Prueba de la Tuberculina (PPD)
  • 21.
    Se inyecta 0,1ml de tuberculina en el antebrazo La reacción debe revisarse entre las 48-72 horas Resultados 6 a 10 mm + 5 mm (dudosa) 4 mm negativo Si forma induración de 10 mm o mas de diámetro es positivo Prueba de la Tuberculina (PPD) Falsos positivos:  Vacunación previa con BCG  Infección por micobacterias no tuberculosa  Interpretación incorrecta de la reacción  La utilización de un antígeno equivocado Falsos negativos:  Anergia cutánea  Infección de tuberculosis reciente  Vacunación reciente con un virus vivo  Tratamiento con drogas inmunodepresoras
  • 22.
    Una induración de6 mm o mas se considera positiva: Personas infectadas por VIH Contacto reciente con otra persona enferma de tuberculosis Personas inmunodeprimidas Una induración de 10 mm o mas se considera positiva:  Usuarios de drogas inyectable  Bebes, niños y adolecentes expuestos a adultos que pertenezcan a grupo de alto riesgo  Personal de salud Prueba de la Tuberculina (PPD)
  • 23.
    Prueba de laTuberculina (PPD) Se debe tener en cuenta: Se hace positiva a las 4 a 6 semanas del comienzo de la infección, es positiva para toda la vida Puede transmitirse de una persona tuberculina positiva a tuberculina negativa La vacuna BCG produce el viraje tuberculínico y esta positividad se mantiene entre 4 a 8 años
  • 25.
    MUESTRA ESPUTO LCR BIOPSIAS ASPIRADO GÁSTRICO DESCONTAMINACIÓN NaOH 1,2,4% HOMOGENIZACIÓN N-acetilcisteina PROCESAR LAS MUESTRAS TINCIÓN DE ZIELHL-NEELSEN CULTIVOS
  • 26.
    • Evitar eluso de las torundas o hisopos • La muestra debe enviarse sin fijadores ni conservantes • Las muestras se deben recoger en contenedores estériles • Procesamiento inmediato, de lo contrario refrigerar • Utilización de medios de descontaminación ( si la muestra lo requiere) • Utilización de cabinas de bioseguridad Muestra
  • 27.
     Muestras respiratorias Esputo Debe recogerse en la mañana  En ayunas  3 días consecutivos (5-10 ml) Muestras por técnicas broncoscópicas  Enviar 5ml para su estudio  Procesar lo antes posible Biopsias respiratorias  1 gr. De tejido Recolección de muestras
  • 28.
     Líquidos estériles Recoger el mayor volumen posible (10-15 ml)  Líquido articular debe recogerse en tubo con anticoagulante  No necesitan ser descontaminadas antes del cultivo  Tejidos  Enviar al laboratorio con suero fisológico o medio líquido 7H9 de Middlebrook  Nunca utilizar formol Recolección de muestras
  • 29.
     Orina  Primerahora de la mañana  Micción espontánea, sonda, punción suprapúbica  3 a 5 muestras de orina en días consecutivos  Mismas precauciones que en cualquier urocultivo Recolección de muestras
  • 30.
    TINCIONES • ZIEHL -NEELSEN •KINYOUN Procesamiento de las muestras Microscopía • AURAMINA RODAMINA
  • 31.
    Examinar el frotisen objetivo de inmersión e informar: Observación microscópica Informe No se observaron BAR en 100 campos observados Negativo Menos de 1 BAR x C. en 100 campos observados + De 1 a 10 BAR x C. en 50 campos observados ++ Más de 10 BAR x C. en 20 campos observados +++ Al examinar el extendido, si se consiguen de 1 a 4 bacilos en 100 campos, leer otros 100. si persiste este número, informar y solicitar otra muestra
  • 32.
    Los microorganismos ácido-alcoholresistentes emiten una fluorescencia amarilla brillante cuando se activan con luz ultravioleta de onda corta. La coloración de contraste con permanganato de potasio hace que el fondo de detritos inespecíficos emitan fluorescencia de color amarillo pálido, que contrasta con el aspecto amarillo brillante de los bacilos ácido-alcohol resistentes.
  • 33.
    Número de bacilosInforme Cero No se observan BAR 1-2 en todo el frotis Informar la cantidad observada y solicitar la repetición 1-9 cada 10 campos Escasos o 1 + 1-9 por campo Pocos o 2+ 10-90 por campo Abundantes o 3+ >90 por campo 4+ La American Lung Association recomienda el siguiente método para las coloraciones con fucsina, aplicables también a las coloraciones fluorescentes:
  • 34.
    Cultivo de muestras Mediosde Cohen y de Middlebrook  Permite la detección del crecimiento luego de 10 a 12 días  Incluye biotina y catalasa para estimular el aislamiento de los bacilos  Contiene albúmina, verde de malaquita, base de huevo
  • 35.
    Cultivo de muestras Medios de cultivo no selectivos
  • 36.
    • LOWENSTEIN –JENSEN COLONIASDE MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS DESPUÉS DE 8 SEMANAS DE INCUBACIÓN COLONIAS RUGOSAS COLOR CREMA SECAS IRREGULARES Cultivo de muestras
  • 37.
    Identificación mediante métodosconvencionales  Temperatura óptima para el crecimiento y velocidad de crecimiento  Producción de pigmento  Acumulación de niacina  Reducción de nitratos a nitritos  Hidrólisis de Tween 80°  Actividad de catalasa  Actividad de arilsulatasa  Actividad de ureasa  Pirazinamidasa  Captación de hierro  Inhibición del crecimiento por la hidrazida del ácido tiofeno-2-carboxílico  Crecimiento en cloruro de sodio al 5 %  Crecimiento en agar MacConkey Cultivo de muestras
  • 38.
    MICROORGANISMO NIACINA NITRATOCATALASA TWEEN-80 CAPTACIÓN DE HIERRO ARILSULFATASA UREA M . TUBERCULOSIS + + - V - V M. KANSASII - + + + - + M. AVIUM - - V - - - M. FORTUITUM - + + V + + + M. CHELONAE V - V V - + + V =VARIABLE Pruebas bioquímicas
  • 39.
    • SONDA GENÉTICAS(PCR) • CULTIVOS RADIOMÉTRICO BACTED TB MÉTODO ESPECIFICO RÁPIDO SENSIBLE PARA IDENTIFICAR MICOBACTERIAS Contiene Middlebrook 7H12 Con antibiótico , las micobacterias metabolizan el sustrato (acido palmítico) y liberan CO2 Avances en la identificación de micobacterias

Notas del editor

  • #4 Simc, Murray, paper micobacteria texto
  • #5 Murray y Mandell, paper micobacteria texto
  • #6 Seimc m tuberculosis. Leer Mandell Los convivientes con pacientes bacilíferos tienen un mayor riesgo a infectarse que las personas con relación esporádica o casual.
  • #7 Murray y mandell
  • #8 Paper microbiología texto
  • #9 Paper microbiología texto
  • #14 Seimc tuberculosis
  • #15 Seimc m tuberculosis Luego leer tuberculosis miliar del mandell
  • #16 3186.
  • #18 Mandell TB miliar 3187
  • #21 PPD derivado proteico purificado(Purified Protein Derivate) se obtiene al precipitar proteínas de M. tuberculosis con ácido tricloroacético o con sulfato de amonio de un filtrado de cultivo en medio sintético esterilizado y concentrado.
  • #33 Coloración fluorescente: Auramina O; Auramina-rodamina. Principio. Los microorganismos ácido-alcohol resistentes emiten una fluorescencia amarilla brillante cuando se activan con luz ultravioleta de onda corta. La coloración de contraste con permanganato de potasio hace que el fondo de detritos inespecíficos emitan fluorescencia de color amarillo pálido, que contrasta con el aspecto amarillo brillante de los bacilos ácido-alcohol resistentes. Muestra. Los frotis se preparan directamente del material clínico o de una suspensión de microorganismos provenientes de colonias desarrolladas en un medio de cultivo primario. En cada serie de coloraciones se incluye un frotis control positivo y uno negativo para micobacterias. Los frotis control se observan antes de leer el frotis del paciente, para confirmar que el control positivo contiene micobacterias fluorescentes y que el negativo no tiene células fluorescentes. Limitaciones del procedimiento. Otros microorganismos distintos de las micobacterias, como las especies de Rhodococcus y de Nocardia, Legionella micdadei y los quistes de Cryptosporidium y de especies de Isospora pueden tener grados variables de ácido-alcohol resistencia. A menudo esto puede ser sugerido por diferencias en la morfología. La mayoría de las especies no emiten fluorescencia en los frotis coloreados con fluorocromos y se recomienda un procedimiento con carbolfucsina.
  • #34 La American Lung Association recomienda el siguiente método para las coloraciones con fucsina, aplicables también a las coloraciones fluorescentes: Número de bacilos. 1. 0 2. 1-2 en todo el frotis 3. 1-9 cada 10 campos 4. 1-9 por campo 5. 10-90 por campo 6. >90 por campo Informe. 1. No se observan BAAR 2. Informar la cantidad observada y solicitar la repetición. 3. Escasos o 1 + 4. Pocos o 2+ 5. Abundantes o 3+ 6. 4+