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Mencione y explique la morfología, estructura
antigénica y fisiología de Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium tuberculosis (bacilo de
Koch)
 Forma: bacilar, ligeramente curvada
 Bacilo aerobio estricto
 Ácido-alcohol resistente
 Sin movilidad (se divide por biparticion)
 De crecimiento lento / Vive de forma intracelular
 Se inactiva con rayos ultravioletas y temperaturas > de
60° C
 95% vía respiratoria por gotitas de pfluge
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2. Explique la inmunopatogenia producida por
Mycobacterium tuberculosis y cómo se
transmite
Las bacterias fagocitadas pueden eludir a la destrucción mediada por lo macrófagos, mediándote la
formación de intermediarios reactivos del nitrógenos (oxido nítrico) y aniones superóxido.
El fagosoma es capaz de fusionarse a otras vesículas intracelulares y facilitar el acceso al patógeno a
nutrientes y replicación.
M. Tuberculosis impide la fusión del fagosoma con los lisosomas (Al inhibir la molécula de unión
[EEA1]).
Entra las partículas infecciosas a los alveolos por los macrófagos alveolares..
Ingresa en las vías respiratorias
La transmisión
se da de una
persona a otra
mediante la
INHALACION
DE
AEROSOLES
INECTADOS
3 ¿Cuáles son los colorantes que se usan en la tinción de Ziehl-
Neelsen ?. Explique brevemente los pasos de la tinción.
1. La muestra se tiñe con carbolfucsina (método de Ziehl-
Neelsen).
2. Se decolora con una solución de acido – alcohol.
3. Se aplica una tinción de contraste.
4. Las muestras se examinan con un microscopio óptico.
4. Explique brevemente las características de las colonias
del bacilo de Koch en agar Lewenstein-Jensen (LJ).
LowensteinJensenMedio
Base
 Uso Base utilizada para la preparación de
diferentes medios destinados al aislamiento,
cultivo y diferenciación de micobacterias,
fundamentalmente Mycobacterium
tuberculosis.
Compuesto por :
 Sulfato de magnesio
 Citrato de magnesio
 Asparragina. Actúa como fuente de nitrógeno
 Harina de patata
 Glicerina. Actúa como fuente de carbono.
 Huevos frescos enteros.
Proporciona albúmina y lípidos, además al
coagular le da solidez al medio.
 Verde de malaquita. Inhibe el crecimiento de
otras bacterias
 Agua purificada.
Previa descontaminación de otros gérmenes con
hidróxido de sodio al 4%.
Colocado en tubos adecuadamente
acondicionados en estufa a 37°C permite la
lectura de las siembras a la 3ª y 6ª semana. Si
es positivo hay desarrollo de colonias con
gérmenes agrupados (factor cuerda) (González
Montaner).
• El número de colonias podrá ser confluente o
en pátina o muy escaso,
• 1 ó 2 colonias con toda una gradación
intermedia (Fig 3.1.2 y 3.1.3)
• colonias típicas de M. Tuberculosis son bien
desarrolladas (eugónicas), con superficie
rugosa, y un color característico amarillo ante
(«buff»)
5.- Mencione y explique ¿Con qué pruebas se hace
el diagnóstico de la TBC extrapulmonar (TB-EP)?.
Diagnóstico Inmunológico
 Prueba de la Tuberculina (Test de Mantoux)
 Se usa un PPD (Derivado Proteínico Derivado) de la Pared Celular
 Desventaja
 No es reactivo si la persona presenta VIH
 Siempre es reactivo si la persona recibió la vacuna BCG
 También se emplean antígenos más específicos que pueden discriminar
entre la infección y la vacunación con BCG:
 Diana antigénica secretada de forma precoz 6 (ESAT-6)
 Proteína 10 del filtrado de cultivo (CFP - 10)
Realización de la prueba de
Tuberculina
Reacción positiva a la prueba de
Tuberculina
Diagnóstico Inmunológico
 Prueba de liberación de IFN –γ
Se utiliza una prueba de Inmunoensayo para medir el IFN-γ
producido por los linfocitos T sensibilizados por los antígenos de M.
tuberculosis
Cultivo
 Caldo de cultivo selectivo
 Medio de Löwenstein-Jensen (con huevo)
 Medio de Middlebrook (con agar)
La técnica MODS o ensayo de sensibilidad al fármaco
mediante observación al microscopio emplea un
microscopio de luz invertida para analizar las placas con 24
pocilios inoculadas con medio de cultivo de Middlebrook y un
esputo descontaminado.
Medio de Löwenstein-Jensen
Medio de Middlebrook
Microscopia
 Tinción con carbolfucsina
 Tinción de Ziehl-Neelsen (ácido-alcohol resistencia calentando)
 Tinción de Kinyoun (ácido-alcohol resistencia sin calentar)
 Tinción con Auramina-Rodamina
 Tinción ácido-alcohol resistencia con fluorocromo Truant
Tinción con
carbolfucsina
utilizando el
método de
Kinyoun
Tinción con los colorantes
fluorescentes auramina y
rodamina utilizando el método
del fluorocromo de Truant.
Identificación
 Se puede lograr a través de la observación de las propiedades de
crecimiento y la morfología de las colonias.
 A través de pruebas bioquímicas
 la positividad a la prueba de niacina
 Reducción de nitrato (+)
 Producción de ureasa (-) o catalasa (+)
 Prueba de Arilsulfatasa (+)
 Sondas moleculares específicas de especies:
Se utiliza para diferenciar entre las especies de
Mycobacterium
6.¿Cómo se previene la TBC? ¿Qué es la BCG y
para qué se utiliza?
¿
Prevención de la TBC
 vida sana e higiénica
 identificando oportunamente a los
enfermos y asegurando su
curación para no contagiar a otras
personas, principalmente por
medio de la vacunación con
vacuna BCG.
Medidas preventivas
 La persona infectada debe protegerse siempre que tosa con
pañuelos desechables.
 Lavado de manos después de toser.
 Ventilación adecuada del lugar de residencia.
 Limpiar el domicilio con paños húmedos.
 Utilizar mascarilla en zonas comunes.
 Restringir visitas a personas no expuestas a la enfermedad.
 Garantizar adherencia al tratamiento.
 No fumar. El cigarrillo no causa tuberculosis, pero sí favorece el
desarrollo de la enfermedad.
BCG
 Bacillus de Calmette y Guérin, más conocida por su sigla BCG, es
la vacuna contra la tuberculosis. Esta vacuna se prepara a partir de
extracto atenuado de Mycobacterium bovis que ha perdido su
virulencia en cultivos artificiales, manteniendo su poder antigénico.
CASO CLÍNICO N°05
1- ¿Cuáles son los posibles
microorganismos
capaces de producir este cuadro clínico?
BACTERIAS VIRUS HONGOS
• Micobacterium
tuberculosis
• V. sincitial respiratorio.
• Rhinovirus
• V. de la influenza
DIAGNOSTICO: TUBERCULOSIS
2.- Cual es la bacteria más común en
nuestro país relacionada con este cuadro
clínico
 MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
Características microbiológicas de
Mycobacterium tuberculosis
• Patógeno intracelular
• Bacilo aerobio estricto delgado de forma recta
• 1-4 um de largo x 0,3-0,5 um de ancho
• Gram positivo débil
• Acido-alcohol resistente (coloración Ziehl-Neelsen)
• Pared celular rica en lípidos
• No formadores de esporas
• Sin flagelos ni capsula
• Gruesa pared de 4 capas [La mas interna es el peptidoglicano con moléculas
de N-acetilglucosamina y ac. N-glucolilmurámico con cortas cadenas de
alanina, que lo diferencian del M. leprae (glicina)].
Capa Componentes
1era Capa Peptidoglicano con moléculas de N-
acetilglucosamina y ac. N-glucolilmurámico,
cadenas cortas de alanina
2da Capa Polímeros de arabinosa y galactosa
3era Capa Ácidos micólicos
4ta Capa Lípidos, sulfolípidos, Glicolípidos (cord factor,
micósidos)
 Crecimiento de cultivo lento, requiere de 10 – 20 días de
incubación a 37°
 pH optimo de crecimiento de 7
 Fuentes de carbono y energía preferidas: glicerol y ac. Piruvico
 El hierro es un requerimiento esencial para su desarrollo cuya
adquisición requiere micobactinas y exoquelinas
 Tiempo de duplicación en condiciones optimas: 15 – 18 horas.
Cultivo bacteriano
Tipos de TBC que afectan a los pobladores de
nuestro país, según su sensibilidad a fármacos
antituberculosos
• TB MDR (Tuberculosis Multi drogorresistente)
• TB XDR (Tuberculosis Extremandamente drogorresistente)
• El 58 % de casos de TB, 82 % de casos de TB MDR y 93 % de casos
de TB XDR son notificados por Lima y Callao. El primer caso de TB
XDR1,2 , fue notificado el año de 1999 y hasta agosto del 2008 se han
notificado 186 casos acumulados, de los cuales el 85 % se concentran
en los distritos de La Victoria, Lima Cercado, San Martin de Porres,
San Juan de Lurigancho, Ate, Santa Anita y El Agustino.
3. Espectro clínico de la Tuberculosis
(TBC)
 Dificultad respiratoria
 Dolor torácico
 Tos húmeda
 Expectoración con sangre en algunos casos.
 Sudoración nocturna.
 Fatiga
 Fiebre en algunos casos.
 Pérdida de peso
4. Patogenia de la TBC primaria
secundaria (post primaria)
PRIMARIA SECUNDARIA
Aparece consecutivamente a la
infección inicial por el bacilo
tuberculoso.
Es una reactivación a partir de
focos endógenos previos
inactivos
PPD ( Prueba cutánea de derivado
proteico purificado)
Método utilizado para el
diagnostico de la infección
por tuberculosis
También conocida como “
Método de Matoux”
Consiste en aplicar
debajo de la piel del
brazo una sustancia
“tuberculina” (derivado
proteico purificado del
cultivo de Mycobacterium
tuberculosis)
Interpretación:
Resultado + según los siguientes
parámetros:
• Pápula de mas de 5 mm: pacientes
infectados por VIH
• Pápula de mas de 10 mm: trabajadores
del sector salud, habitantes de asilos,
prisioneros, consumidores de drogas
parenterales, etc.
• Pápula de mas de 15 mm: Pacientes no
incluidos en ítems anteriores
5. PRUEBAS DE
TUBERCULINA
6.-Señale otras micobacterias de
importancia clínica y las enfermedades
que producen
Mycibacterium
leprae
Lepra
tuberculoide
(LT)
Lepra intermedia
(BT, BB, BL)
Lepra
lepromatosa.

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Caso clínico 5:TUBERCULOSIS

  • 1.
  • 2. Mencione y explique la morfología, estructura antigénica y fisiología de Mycobacterium tuberculosis
  • 3. Mycobacterium tuberculosis (bacilo de Koch)  Forma: bacilar, ligeramente curvada  Bacilo aerobio estricto  Ácido-alcohol resistente  Sin movilidad (se divide por biparticion)  De crecimiento lento / Vive de forma intracelular  Se inactiva con rayos ultravioletas y temperaturas > de 60° C  95% vía respiratoria por gotitas de pfluge
  • 4.
  • 6. 2. Explique la inmunopatogenia producida por Mycobacterium tuberculosis y cómo se transmite Las bacterias fagocitadas pueden eludir a la destrucción mediada por lo macrófagos, mediándote la formación de intermediarios reactivos del nitrógenos (oxido nítrico) y aniones superóxido. El fagosoma es capaz de fusionarse a otras vesículas intracelulares y facilitar el acceso al patógeno a nutrientes y replicación. M. Tuberculosis impide la fusión del fagosoma con los lisosomas (Al inhibir la molécula de unión [EEA1]). Entra las partículas infecciosas a los alveolos por los macrófagos alveolares.. Ingresa en las vías respiratorias La transmisión se da de una persona a otra mediante la INHALACION DE AEROSOLES INECTADOS
  • 7. 3 ¿Cuáles son los colorantes que se usan en la tinción de Ziehl- Neelsen ?. Explique brevemente los pasos de la tinción. 1. La muestra se tiñe con carbolfucsina (método de Ziehl- Neelsen). 2. Se decolora con una solución de acido – alcohol. 3. Se aplica una tinción de contraste. 4. Las muestras se examinan con un microscopio óptico.
  • 8. 4. Explique brevemente las características de las colonias del bacilo de Koch en agar Lewenstein-Jensen (LJ).
  • 9. LowensteinJensenMedio Base  Uso Base utilizada para la preparación de diferentes medios destinados al aislamiento, cultivo y diferenciación de micobacterias, fundamentalmente Mycobacterium tuberculosis. Compuesto por :  Sulfato de magnesio  Citrato de magnesio  Asparragina. Actúa como fuente de nitrógeno  Harina de patata  Glicerina. Actúa como fuente de carbono.  Huevos frescos enteros. Proporciona albúmina y lípidos, además al coagular le da solidez al medio.  Verde de malaquita. Inhibe el crecimiento de otras bacterias  Agua purificada.
  • 10. Previa descontaminación de otros gérmenes con hidróxido de sodio al 4%. Colocado en tubos adecuadamente acondicionados en estufa a 37°C permite la lectura de las siembras a la 3ª y 6ª semana. Si es positivo hay desarrollo de colonias con gérmenes agrupados (factor cuerda) (González Montaner). • El número de colonias podrá ser confluente o en pátina o muy escaso, • 1 ó 2 colonias con toda una gradación intermedia (Fig 3.1.2 y 3.1.3) • colonias típicas de M. Tuberculosis son bien desarrolladas (eugónicas), con superficie rugosa, y un color característico amarillo ante («buff»)
  • 11. 5.- Mencione y explique ¿Con qué pruebas se hace el diagnóstico de la TBC extrapulmonar (TB-EP)?.
  • 12. Diagnóstico Inmunológico  Prueba de la Tuberculina (Test de Mantoux)  Se usa un PPD (Derivado Proteínico Derivado) de la Pared Celular  Desventaja  No es reactivo si la persona presenta VIH  Siempre es reactivo si la persona recibió la vacuna BCG  También se emplean antígenos más específicos que pueden discriminar entre la infección y la vacunación con BCG:  Diana antigénica secretada de forma precoz 6 (ESAT-6)  Proteína 10 del filtrado de cultivo (CFP - 10)
  • 13. Realización de la prueba de Tuberculina Reacción positiva a la prueba de Tuberculina
  • 14. Diagnóstico Inmunológico  Prueba de liberación de IFN –γ Se utiliza una prueba de Inmunoensayo para medir el IFN-γ producido por los linfocitos T sensibilizados por los antígenos de M. tuberculosis
  • 15. Cultivo  Caldo de cultivo selectivo  Medio de Löwenstein-Jensen (con huevo)  Medio de Middlebrook (con agar) La técnica MODS o ensayo de sensibilidad al fármaco mediante observación al microscopio emplea un microscopio de luz invertida para analizar las placas con 24 pocilios inoculadas con medio de cultivo de Middlebrook y un esputo descontaminado.
  • 17. Microscopia  Tinción con carbolfucsina  Tinción de Ziehl-Neelsen (ácido-alcohol resistencia calentando)  Tinción de Kinyoun (ácido-alcohol resistencia sin calentar)  Tinción con Auramina-Rodamina  Tinción ácido-alcohol resistencia con fluorocromo Truant
  • 18. Tinción con carbolfucsina utilizando el método de Kinyoun Tinción con los colorantes fluorescentes auramina y rodamina utilizando el método del fluorocromo de Truant.
  • 19. Identificación  Se puede lograr a través de la observación de las propiedades de crecimiento y la morfología de las colonias.  A través de pruebas bioquímicas  la positividad a la prueba de niacina  Reducción de nitrato (+)  Producción de ureasa (-) o catalasa (+)  Prueba de Arilsulfatasa (+)  Sondas moleculares específicas de especies: Se utiliza para diferenciar entre las especies de Mycobacterium
  • 20. 6.¿Cómo se previene la TBC? ¿Qué es la BCG y para qué se utiliza? ¿
  • 21. Prevención de la TBC  vida sana e higiénica  identificando oportunamente a los enfermos y asegurando su curación para no contagiar a otras personas, principalmente por medio de la vacunación con vacuna BCG.
  • 22. Medidas preventivas  La persona infectada debe protegerse siempre que tosa con pañuelos desechables.  Lavado de manos después de toser.  Ventilación adecuada del lugar de residencia.  Limpiar el domicilio con paños húmedos.  Utilizar mascarilla en zonas comunes.  Restringir visitas a personas no expuestas a la enfermedad.  Garantizar adherencia al tratamiento.  No fumar. El cigarrillo no causa tuberculosis, pero sí favorece el desarrollo de la enfermedad.
  • 23. BCG  Bacillus de Calmette y Guérin, más conocida por su sigla BCG, es la vacuna contra la tuberculosis. Esta vacuna se prepara a partir de extracto atenuado de Mycobacterium bovis que ha perdido su virulencia en cultivos artificiales, manteniendo su poder antigénico.
  • 25. 1- ¿Cuáles son los posibles microorganismos capaces de producir este cuadro clínico? BACTERIAS VIRUS HONGOS • Micobacterium tuberculosis • V. sincitial respiratorio. • Rhinovirus • V. de la influenza DIAGNOSTICO: TUBERCULOSIS
  • 26. 2.- Cual es la bacteria más común en nuestro país relacionada con este cuadro clínico  MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
  • 27. Características microbiológicas de Mycobacterium tuberculosis • Patógeno intracelular • Bacilo aerobio estricto delgado de forma recta • 1-4 um de largo x 0,3-0,5 um de ancho • Gram positivo débil • Acido-alcohol resistente (coloración Ziehl-Neelsen) • Pared celular rica en lípidos • No formadores de esporas • Sin flagelos ni capsula • Gruesa pared de 4 capas [La mas interna es el peptidoglicano con moléculas de N-acetilglucosamina y ac. N-glucolilmurámico con cortas cadenas de alanina, que lo diferencian del M. leprae (glicina)].
  • 28. Capa Componentes 1era Capa Peptidoglicano con moléculas de N- acetilglucosamina y ac. N-glucolilmurámico, cadenas cortas de alanina 2da Capa Polímeros de arabinosa y galactosa 3era Capa Ácidos micólicos 4ta Capa Lípidos, sulfolípidos, Glicolípidos (cord factor, micósidos)
  • 29.  Crecimiento de cultivo lento, requiere de 10 – 20 días de incubación a 37°  pH optimo de crecimiento de 7  Fuentes de carbono y energía preferidas: glicerol y ac. Piruvico  El hierro es un requerimiento esencial para su desarrollo cuya adquisición requiere micobactinas y exoquelinas  Tiempo de duplicación en condiciones optimas: 15 – 18 horas. Cultivo bacteriano
  • 30. Tipos de TBC que afectan a los pobladores de nuestro país, según su sensibilidad a fármacos antituberculosos • TB MDR (Tuberculosis Multi drogorresistente) • TB XDR (Tuberculosis Extremandamente drogorresistente) • El 58 % de casos de TB, 82 % de casos de TB MDR y 93 % de casos de TB XDR son notificados por Lima y Callao. El primer caso de TB XDR1,2 , fue notificado el año de 1999 y hasta agosto del 2008 se han notificado 186 casos acumulados, de los cuales el 85 % se concentran en los distritos de La Victoria, Lima Cercado, San Martin de Porres, San Juan de Lurigancho, Ate, Santa Anita y El Agustino.
  • 31. 3. Espectro clínico de la Tuberculosis (TBC)  Dificultad respiratoria  Dolor torácico  Tos húmeda  Expectoración con sangre en algunos casos.  Sudoración nocturna.  Fatiga  Fiebre en algunos casos.  Pérdida de peso
  • 32. 4. Patogenia de la TBC primaria secundaria (post primaria) PRIMARIA SECUNDARIA Aparece consecutivamente a la infección inicial por el bacilo tuberculoso. Es una reactivación a partir de focos endógenos previos inactivos
  • 33. PPD ( Prueba cutánea de derivado proteico purificado) Método utilizado para el diagnostico de la infección por tuberculosis También conocida como “ Método de Matoux” Consiste en aplicar debajo de la piel del brazo una sustancia “tuberculina” (derivado proteico purificado del cultivo de Mycobacterium tuberculosis) Interpretación: Resultado + según los siguientes parámetros: • Pápula de mas de 5 mm: pacientes infectados por VIH • Pápula de mas de 10 mm: trabajadores del sector salud, habitantes de asilos, prisioneros, consumidores de drogas parenterales, etc. • Pápula de mas de 15 mm: Pacientes no incluidos en ítems anteriores 5. PRUEBAS DE TUBERCULINA
  • 34. 6.-Señale otras micobacterias de importancia clínica y las enfermedades que producen Mycibacterium leprae Lepra tuberculoide (LT) Lepra intermedia (BT, BB, BL) Lepra lepromatosa.

Notas del editor

  1. http://www.britanialab.com/productos/576_hoja_tecnica_es.pdf
  2. http://www.bgb-biogen.com/tuberculosis/TUBERCULOSIS03.pdf