Resistencia Bacteriana
En enterobacterias y no
fermentadores
Antibióticos β-lactámicos

Suárez C.(2009). Enferm Infecc Microbiol Clin. 27(2):116–129
Formación de la pared bacteriana

Suárez C.(2009). Enferm Infecc Microbiol Clin. 27(2):116–129
Mecanismos de acción de los betalactámicos

Suárez C.(2009). Enferm Infecc Microbiol Clin. 27(2):116–129
Mecanismo de resistencia a betalactámicos

 Betalactamasas
 Alteración de permeabilidad de la
membrana externa (perdida o reducción
de porinas).
 Aumento de bombas de extrusión

Modificación de dianas de acción
(Mutación en las proteínas de unión a la
penicilina).
Betalactamasas

IMIPENEM
http://faculty.ccbcmd.edu/courses/bio141/lecguide/unit2/control/blactam.html
Clasificación de las Betalactamasas

Los esquemas más ulizados para la clasificación de las
betalactamasas son:
Clasificación Funcional según Bush-Jacoby-Medeiros
Clasificación molecular según Ambler (clases A, B, C y D).

Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
Clasificación funcional


Grupo 1: Cefalosporinasas que no son inhibidas por ácido
clavulánico. Enzimas tipo serina (clase molecular C).



Grupo 2: Betalactamasas (con diferente perfil sustrato) que
generalmente son inhibidas por ácido clavulánico Enzimas tipo
serina (clase molecular A y D) .



Grupo 3: Metalo-betalactamasas, que son pobremente inhibidas
ácido clavulánico de betalactamasas, pero son inhibidas por
agentes quelantes (clase molecular B).



Grupo 4: Penicilinasas no inhibidas por ácido clavulánico (no están
clasificadas molecularmente).
Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
Clasificación de las Betalactamasas
INHIBIDO POR

GRUPO BUSHJACOBY (2009)

GRUPO BUSHJACOBY (2009)

AMBLER

1

1

C

1e
2a

C
A

2b

A

2be

A

2br

A

2ber

A

2c
2ce
2d

A
A
D

2de

D

2df

D

Cloxacilina y carbapenemes

2e

A

Cefalosporinas de espectro extendido (no
actúa sobre monobactámicos)

2f

A

3a
3b

2

3

SUSTRATO

REPRESENTANTE

Ac. Clav.

EDTA

Cefalosporinas y cefamicinas

No

No

AmpC, CMY-2, FOX, MIR, ACT,

Cefalosporinas
Penicilinas
Penicilinas y cefalosporinas de primera
generación
Cefalosporinas de espectro extendido y
monobactámicos
Penicilinas
Cefalosporinas de espectro extendido y
monobactámicos
Carbenicilinas
Carbenicilina y cefepime
Cloxacilina
Cloxaxilina y cefalosporinas de espectro
extendido

No
Si

No
No

GCI, CMY-37
PC-1

Si

No

TEM-1, TEM-2, SHV-1

Si

No

TEM-3, SHV-2, CTX-M-15, PER-1

No

No

TEM-30, SHV-10

No

No

TEM-50

Si
Si
Variable

No
No
No

PSE-1, CARB-3
RTG-4
OXA-1, OXA-10

Variable

No

0XA-11, OXA-15

Variable

No

OXA-23, OXA-24, OXA-48

Si

No

CepA

Carbapenemes

Variable

No

KPC, IMI, SME

B

Carbapenemes

No

Si

IMP, VIM, GIM, SPM, SIM, NDM

B

Carbapenemes

No

Si

CAU, GOB, FEZ

Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
Betalactamasas de Amplio espectro
GRUPO BUSH- GRUPO BUSHAMBLER
JACOBY (2009) JACOBY (2009)

SUSTRATO

INHIBIDO POR
Ac. Clav.

REPRESENTANTE

EDTA

C

Cefalosporinas y cefamicinas

No

No

AmpC, CMY-2, FOX, MIR, ACT,

1e
2a

C
A

No
No

GCI, CMY-37
PC-1

A

Si

No

TEM-1, TEM-2, SHV-1

A

Si

No

TEM-3, SHV-2, CTX-M-15, PER-1

2br

A

No

No

TEM-30, SHV-10

2ber

A

No

No

TEM-50

2c
2ce
2d

A
A
D

Si
Si
Variable

No
No
No

PSE-1, CARB-3
RTG-4
OXA-1, OXA-10

2de

D

Cefalosporinas
Penicilinas
Penicilinas y cefalosporinas de primera
generación
Cefalosporinas de espectro extendido y
monobactámicos
Penicilinas
Cefalosporinas de espectro extendido y
monobactámicos
Carbenicilinas
Carbenicilina y cefepime
Cloxacilina
Cloxaxilina y cefalosporinas de espectro
extendido

No
Si

2be

Variable

No

0XA-11, OXA-15

2df

D

Cloxacilina y carbapenemes

Variable

No

OXA-23, OXA-24, OXA-48

2e

2

1

2b

1

A

Cefalosporinas de espectro extendido (no
actúa sobre monobactámicos)

Si

No

CepA

Variable

No

KPC, IMI, SME

Carbapenemes
Bush, K. 2f
(2010).A AAC. 54 (3): 969 - 976

3

3a

B

Carbapenemes

No

Si

IMP, VIM, GIM, SPM, SIM; NDM

3b

B

Carbapenemes

No

Si

CAU, GOB, FEZ

Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
Betalactamasas de Espectro Extendido
(BLEE)

GRUPO BUSH- GRUPO BUSHAMBLER
JACOBY (2009) JACOBY (2009)

SUSTRATO

INHIBIDO POR

Ac. Clav.

REPRESENTANTE

EDTA

C

Cefalosporinas y cefamicinas

No

No

AmpC, CMY-2, FOX, MIR, ACT,

1e
2a

C
A

No
No

GCI, CMY-37
PC-1

A

Si

No

TEM-1, TEM-2, SHV-1

A

Si

No

TEM-3, SHV-2, CTX-M-15, PER-1

2br

A

No

No

TEM-30, SHV-10

2ber

A

No

No

TEM-50

2c
2ce
2d

A
A
D

Si
Si
Variable

No
No
No

PSE-1, CARB-3
RTG-4
OXA-1, OXA-10

2de

D

Cefalosporinas
Penicilinas
Penicilinas y cefalosporinas de primera
generación
Cefalosporinas de espectro extendido y
monobactámicos
Penicilinas
Cefalosporinas de espectro extendido y
monobactámicos
Carbenicilinas
Carbenicilina y cefepime
Cloxacilina
Cloxaxilina y cefalosporinas de espectro
extendido

No
Si

2be

Variable

No

0XA-11, OXA-15

2df

D

Cloxacilina y carbapenemes

Variable

No

OXA-23, OXA-24, OXA-48

2e

2

1

2b

1

A

Cefalosporinas de espectro extendido (no
actúa sobre monobactámicos)

Si

No

CepA

Variable

No

KPC, IMI, SME

Carbapenemes
Bush, K. 2f
(2010).A AAC. 54 (3): 969 - 976

3

3a

B

Carbapenemes

No

Si

IMP, VIM, GIM, SPM, SIM, NDM

3b

B

Carbapenemes

No

Si

CAU, GOB, FEZ

Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
Test confirmatorio para detección de BLEE
Prueba positiva:
Un incremento ≥ 5 mm en la zona de
diámetro para cualquiera de los
agentes antimicrobianos probados en
combinación con acido clavulánico vs
la zona de diámetro cuando el
antimicrobiano se prueba solo.
Ejemplo:
Ceftazidime (CAZ): 16 mm
Ceftazidme + Ac. clavulánico
(CAZ/CLA): 21
Test confirmatorio para detección de BLEE con
método epsilométrico
Prueba positiva:
Un incremento en la CIM ≥ 3
diluciones dobles en la elipse de
cefotaxime en combinación con
acido clavulánico (CTL) vs la zona
de elipse con cefotaxime solo.
Ejemplo:
Cefotaxime (CT): 16mg/mL
Cefotaxime + Ac. clavulánico
(CTL): 0,25mg/mL
CTX – M

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Villegas MV. et al. (2004). AAC. 48(2): 629 – 631.
Mantilla JR et al. (2006). Biomédica. 26(3): 408 – 414,
Pulido IY et al. (2011). Biomédica. 31(1): 15 - 20
Velandia DA. et al. (2006). JCM. 44(5): 1919 – 1920.
Villegas MV. et al. (2011). JCM. 49(5): 1993 – 1996
Espinal PA. et al. (2004). Biomédica. 24(3): 252 – 261.
Espinal PA. et al. (2010). J Chemother. 22(3):160-4.
Leal Al et al (2012). Enferm Infecc Microbiol Clin.

SHV
Carbapenemasas
GRUPO BUSH- GRUPO BUSHAMBLER
JACOBY (2009) JACOBY (2009)

SUSTRATO

INHIBIDO POR
Ac. Clav.

REPRESENTANTE

EDTA

C

Cefalosporinas y cefamicinas

No

No

AmpC, CMY-2, FOX, MIR, ACT,

1e
2a

C
A

No
No

GCI, CMY-37
PC-1

A

Si

No

TEM-1, TEM-2, SHV-1

A

Si

No

TEM-3, SHV-2, CTX-M-15, PER-1

2br

A

No

No

TEM-30, SHV-10

2ber

A

No

No

TEM-50

2c
2ce
2d

A
A
D

Si
Si
Variable

No
No
No

PSE-1, CARB-3
RTG-4
OXA-1, OXA-10

2de

D

Cefalosporinas
Penicilinas
Penicilinas y cefalosporinas de primera
generación
Cefalosporinas de espectro extendido y
monobactámicos
Penicilinas
Cefalosporinas de espectro extendido y
monobactámicos
Carbenicilinas
Carbenicilina y cefepime
Cloxacilina
Cloxaxilina y cefalosporinas de espectro
extendido

No
Si

2be

Variable

No

0XA-11, OXA-15

2df

D

Cloxacilina y carbapenemes

Variable

No

OXA-23, OXA-24, OXA-48

2e

2

1

2b

1

A

Cefalosporinas de espectro extendido (no
actúa sobre monobactámicos)

Si

No

CepA

Variable

No

KPC, IMI, SME

Carbapenemes
Bush, K. 2f
(2010). A AAC. 54 (3): 969 - 976

3

3a

B

Carbapenemes

No

Si

IMP, VIM, GIM, SPM, SIM, NDM

3b

B

Carbapenemes

No

Si

CAU, GOB, FEZ

Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
Carbapenemasas
1. Grupo más versátil de betalactamasas
2. Incremento en la complejidad (mas clases dentro de
cada clase).
3. Diferentes patógenos y diferentes niveles de
expresión.
4. Diferentes genes de resistencia asociados.
5. Detección en el laboratorio
Nordmann P, Naas T, Poirel L. Global spread of Carbapenemase-producing Enterobacteriaceae. Emerg
Infect Dis. 2011 Oct;17(10):1791-8.
Nordmann P, Naas T, Poirel L. Global spread of Carbapenemase-producing Enterobacteriaceae. Emerg
Infect Dis. 2011 Oct;17(10):1791-8.
Carbapenemasas adquiridas
Diapositiva de Fernando Pasteran

Metalobetalactamasas
MBL –clase B
VIM, NDM, IMP,
SPM. GIM, SIM, AIM,
KHM, DIM, FIM
BGNNF >> Enterob.
R a C3G y C4G
S a AZT

Enzimas tipo
serina clase A
KPC, GES,
Sme, IMI/NMC
Enterob>>BGNNF
KPC y GES:
R a C3G, C4G y
AZT

Inh. por EDTA

Inh. por APB

Grupo 3

Grupo 2f

Enzimas tipo serina
clase D Oxacilinasas
OXA-23, OXA-24,
OXA-51, OXA-58,
OXA-143, OXA-48
Acinetob>> Enterob.
No perfil típico
hidrólisis variable
Sin inhibidores

Grupo 2d
Carbapenemasas

Fuente: Emerg Infect Dis 2011 Centers for Disease Control and Prevention (CDC)
Carbapenemasas

http://new.paho.org/hq/index.php
Carbapenemasas KPC
KPC REPORTADAS EN COLOMBIA en
Colombia
1. Carbapenemasas tipo KPC: variantes KPC-2 y KPC-3 (1, 2, 3, 4, 5)
2. Detectadas en enterobacterias (principalmente K, pneumoniae, E coli) y
no fermentadores como P. aeruginosa.
3. Diseminación de KPC-3 en hospitales de diferenctes ciudades de
Colombia (3, 4, 5).

1.
2.
3.
4.
5.

Villegas MV (2006). AAC. 50:2880-2882.
Villegas MV (2007). AAC. 51:2001-2004.
Saavedra SY (2009). CMI. 15: 19th ECCMID. P791. S481-S482
Saavedra SY (2010). CMI. 16: 20th ECCMID. P1281. S361
López J. (2010). CMI. 54:1354-1357
Carbapenemasas MBL en colombia
1. Carbapenemasas VIM por primera vez detectadas
en Verona Italia (Imipenemasa Veronesa), en 1997
en P. aeruginosa. De las 37 variantes en Colombia
se han detectado VIM-8 (1) y VIM-2 (3) en
P. aeruginosa y VIM-24 (3) en K.
pneumoniae.
1.
2.
3.

Crespo MP. et al (2004). JCM. 42(11): 5094-5101
Villegas MV. et al (2006). AAC. 50(1): 226 - 229
Villegas MV. et al (2011). AAC. 55(5): 2428-2830
Distribución por departamento
de carbapenemasas tipo NDM

Departamento y/o
distrito

Microoganismo

Bogotá

K. pneumoniae

Santander

Providencia rettgeri

Valle

Acinetobacter

Bogotá

Providencia rettgeri

Departamentos donde se ha
identificado NDM
Carbapenemasas tipo MBL en
KPC REPORTADAS EN COLOMBIA
Colombia
1.

De las carbapenemasas tipo VIM en Colombia se han reportado las
variantes VIM-8 (1), VIM-2 (2) y VIM-24 (3).

2.

Carbapenemasa NDM (New Delhi Metallo-B-lactamase), detectada
por primera vez en Suecia en 2008 en un paciente transferido de un
hospital de Nueva Deli. Aislada principalmente en enterobacterias
pero también se ha detectado en no fermentadores.

3.

Circular 0056 del Instituto Nacional de Salud del 14 de agosto de 2012
primera detección de aislamientos de K. pneumoniae de origen
intrahospitalarios portadores de NDM-1
1.
2.
3.

Crespo MP. et al (2004). JCM. 42: 5094-5101
Villegas MV. et al (2006). AAC. 50: 226 - 229
Villegas MV. et al (2011). AAC. 55: 2428-2830
KPC REPORTADAS ENOxacilinasas en Colombia
Carbapenemasas tipo COLOMBIA
1. En Colombia, la carbapenemasa tipo OXA más prevalente
es la enzima OXA-23 detectada en A. baumannii de
hospitales de diferentes ciudades (1, 2, 3, 4)
2. También se reportó la presencia de la enzima OXA-72
(enzima del subgrupo OXA-24), la cual se presentó en un
aislamiento de A. baumannii de Bogotá (5) y en un
aislamiento de A. Pittii (6).
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Villegas MV. et al. (2007) AAC. 51(6):2001-2004.
Saavedra SY. et al. (2008). Int J Antimicrob Agents. 31(4):389-391.
Pinzíon JO. et al (2006). Infectio 2006;10(2):78-85
Saavedra SY. et al. (2008) CMI. 14(S7) 18th ECCMID P1673: S485
Saavedra et al. (2010) CMI. 14(S7) 20th ECCMID P791: S202- S203.
Montealegre MC (2012). Antimicrob Agents Chemother. 56:3996-3998
Protocolos Antibiograma
Enterobacterias
Ampicilina (10 ug)
Ampicilina (10 ug)
Amoxicilina- Ac clavulánico (20/10ug)
Amoxicilina- Ac clavulánico (20/10ug)
Piperacilina //Tazobactam (100/10 ug)
Piperacilina Tazobactam (100/10 ug)
Cefalotina (30 ug)
Cefalotina (30 ug)
Cefotaxima (30 ug)
Cefotaxima (30 ug)
Ceftazidima (30 ug)
Ceftazidima (30 ug)
Cefepime (30 µg)
Cefepime (30 µg)
Aztreonam (30ug)
Aztreonam (30ug)
Imipenem (10 ug)
Imipenem (10 ug)

Meropenem (10µg)
Meropenem (10µg)
Gentamicina 10 ug)
Gentamicina 10 ug)
Amikacina (30 ug)
Amikacina (30 ug)
Ciprofloxacina (5 ug)
Ciprofloxacina (5 ug)
Trimetropin sulfa (25 ug)
Trimetropin sulfa (25 ug)
Cefoxitina (30 ug)
Cefoxitina (30 ug)
Acido Nalidíxico (30 ug)
Acido Nalidíxico (30 ug)
Colistin (10 ug)
Colistin (10 ug)
Protocolos Antibiograma
Pseudomonas
Piperacilina //Tazobactam (100/10 ug)
Piperacilina Tazobactam (100/10 ug)
Ceftazidima (30 ug)
Ceftazidima (30 ug)
Cefoperazona (30 ug)
Cefoperazona (30 ug)
Cefepime (30 ug)
Cefepime (30 ug)
Aztreonam (30 ug)
Aztreonam (30 ug)
Imipenem (10 ug)
Imipenem (10 ug)
Meropenem (10 ug)
Meropenem (10 ug)
Ciprofloxacina (5 ug)
Ciprofloxacina (5 ug)
Gentamicina (10 ug)
Gentamicina (10 ug)
Amikacina (30 ug)
Amikacina (30 ug)
Colistin (10 ug) (no informar si no se
Colistin (10 ug) (no informar si no se
hace CIM)
hace CIM)

Acinetobacter
Ampicilina/ Sulbactam (10/10 ug)
Piperacilina / Tazobactam (100/10 ug)
Ceftazidima (30 ug)
Cefepime (30 ug)
Imipenem (10 ug)
Meropenem (10 ug)
Ciprofloxacina (5 ug)
Gentamicina (10 ug)
Amikacina (30 ug)
Trimetropin sulfa (25 ug)
Doxiciclina (30 ug)
Colistin (10 ug) (no informar si no se
hace CIM)
Test Modificado de Hodge (TMH)
A partir de la suspensión 0,5
Mac Farland realizar una
dilución 1/10 con solución
salina
Cuando realizar el TMH
Recomendada
por CLSI, para
enterobacterias, se debe realizar
cuando se cumplan los siguientes
criterios
(únicamente
para
enterobacterias):
 Resistencia a una o más
cefalosporinas de la subclase III.
(ceftriaxone, cefotaxime, ceftazidime,
cefoperazone, ceftizoxime)

1. Control negativo para producción de carbapenemasas
2. Control positivo para producción de carbapenemasas
3. Aislamiento positivo para producción de
carbapenemasas
Foto archivo laboratorio de microbiología – Facultad de
medicina - Universidad Nacional de Colombia

Resistencia
o
susceptibilidad
intermedia a por lo menos un
carbapenémico:
 Difusión de disco:
Ertapenem (19-21 mm) y meropenem
( 16-21mm), no imipenem.
 Microdilución (CIM):
CIM de Ertapenem
CIM de Imipenem y/o Meropenem

2µg/mL
2 – 4 µg/mL.

 Las especies Proteus sp, Providencia sp y Morganella sp, pueden
presentar CIMs elevados a imipenem por mecanismos no relacionados a la
producción de carbapenemasas, por lo cual sugiere iniciar la búsqueda de
carbapenemasas en estos géneros a partir de una CIM de 4µg/mL para
imipenem y 2µg/mL para ertapenem y meropenem
 Reporte en caso de prueba positiva: “Organismo con posible
producción de carbapenemasas” y no cambie la interpretación de
susceptibilidad a carbapenémicos.
Nota :
No todos los aislamientos de Enterobacteriacea productores de
Carbapenemasas son TMH (+) y resultados de MHT (+) pueden encontrarse
en aislamientos con mecanismos de resistencia a carbapenémicos diferentes
a la producción de carbapenemasas .
Resultados TMH

CLSI, 2012
Que dice la literatura
• Test modificado de Hodge es útil en la
detección de carbapenemasas KPC y OXA-48
(1).
• Especificidad: Se pueden presentar falsos
positivos en hiperproductores de AmpC o de
CTX-M que prreesente alteraciones de
impermeabilidad (2)

1.
2.

Girlich G (2012). JCM 50: 447
Pasteran F. (2010) JCM 48: 1323-32

• Sensibilidad: Limitaciones en la detección de
MBL tipo NDM, por resultados de difícil
interpretación (débil detección de NDM o
resultado falso negativo) (1). Algunos autores
proponen el uso de Sulfato de Zinc (ZnSO4) en
el agar. .
TEST DE HODGE EN NO FERMENTADORES
EN INVESTIGACIÓN
Para
detección
de
carbapenemasas
MBL
en
Pseudomonas
sp
y
Acinetobacter sp se recomienda
adición de sulfato de Zinc
(ZnSO4) en el Mueller- Hinton
(1).

1.

Lee K. (2003). JCM. 41: 4623-9
Pruebas de sinergismo para carbapenemasas tipo serina
clase A con Acido fenil borónico (APB)

IMP
15mm

APB

CAZ
15mm

 Sensibilidad (100%) y especificidad (aprox. 98.8%), sin embargo aquellos
aislamientos con sobreproducción de AmpC y pérdida de porinas pueden presentar
sinergia a APB.
Útil para enterobacterias y no fermentadores
K. pneumon
iae
E. cloacae

APB

g
300 µ

APB

300 µ
g

Diapositiva de Fernando Pasteran

o oro o:
ergias conciaAcidajustaBs (centrnaicntro)
Sin
o ce
da
optima
Distan
S. marcescens Sme-1b

E. cloacae wild type

E. coli ATCC 25922.

Pasteran F, J. Clin. Microbiol. 2009 June47(6):1631-163

Detección por laboratorio

K. pneumoniae KPC -2
APB

Ecl M
951

IMP
15

APB
mm
IMP 25mm

Ecl p99

Huevo

IMPOS

TOR!

interfer
en
Enterob cia: ↑↑↑↑ Amp
C
acter, C
Pastera
.freund
n F., en
ii, P.aer
viado a
J Clin.
uginos
Micro
a
biol,
Pruebas de sinergismo para carbapenemasas
MBL con agentes quelantes

Lee K. (2003). JCM. 41: 4623-9

 Uso de agentes quelantes: EDTA, EDTA+SMA “mercaptoacetato de
sodio” y ácido dipicolínico.
 EDTA resultados falsos positivos en no fermentadores.
 EDTA+ SMA útil en enterobacterias como en no fermentadores
P. aeruginosa

A. baumannii

Detección de
Metalobetalactamasa
Inhibidor EDTA /SMA en
diferentes aislamientos

S. marscenses

A. xylosoxidans

A. baumannii
PRUEBAS DE DOBLE DISCO

Aislamiento productor de
MBL

Aislamiento productor de
KPC

Aislamientos positivos aquellos que presentan un aumento ≥5mm en el halo de
inhibición del disco del carbapenémico + Acido borónico y ≥7mm carbapenémico +
EDTA
Tsakris A. (2010) JAC. 65: 1664-71
E-test MBL
Prueba positiva:
Un incremento en la CIM ≥ 3 diluciones dobles en la
elipse de imipenem en combinación con EDTA (IPI)
vs la zona de elipse con imipenem solo.
Ejemplo:
Imipenem (IP): 64mg/mL
Imipenen / EDTA (IPI): ≤1mg/mL

Walsh T. (2005). CMR. 18: 306-25

Se han reportado falsos positivos en
P. aeruginosa y A. baumannii
Enterobacterias
GEN
ERTA
SXT

IMP 1,5cm
CTX
CIP

AMK

PTZ
AMC
FOX

CTX /
CLA

1,5cm

CAZ

1,5cm
CAZ /
CLA

EDTA

FEP

APB

1,5cm

MER

TIGE
1,
5c
m

Pseudomonas
APB 1,5cm

IMP

CIP

DORI
PTZ

CAZ/
CLA

EDTA

AMK

1,5

cm

AZT
FEP

GEN

2,
0c
m

Acinetobacter
CAZ

IMP

CAZ/
CLA

SXT
MINO
TIGE

FEP

EDTA

CIP

AMK

cm

AMS

1,5

MER

1,5cm

1,5cm

PIP

CAZ

MER

PTZ

GEN
Resistencias naturales a carbapenémicos…
Posibles resultados con pruebas de tamizaje para
carbapenemasas en enterobacterias
 TMH (+), APB (+) EDTA-SMA (-) : sugiere presencia carbapenemasa
tipo serina grupo 2f (KPC, Sme, NMC-A) “confirmar con PCR”
 TMH (+), APB (-) EDTA-SMA (+) : sugiere presencia carbapenemasa
tipo MBL (confirmar con PCR)
 TMH (-), APB (-) EDTA-SMA (+) : sugiere presencia carbapenemasa tipo
MBL posiblemente NDM, confirmar con PCR
 TMH (-), APB (+) EDTA-SMA (-) : sugiere presencia de cefalosporinasas
AmpC, confirmar con otras pruebas de tamizaje o con PCR.
 TMH (+), APB (+) EDTA-SMA (+) : sugiere presencia carbapenemasa
tipo serina y MBL, o presencia de carbapenemasas MBL y AmpC,
realizar otras pruebas de tamizaje para AmpC. Confirmar por PCR
Posibles resultados con pruebas de tamizaje para
carbapenemasas en Pseudomonas spp. y
Acinetobacter spp.
 EDTA-SMA (+) : sugiere presencia carbapenemasa tipo MBL
(confirmar con PCR)
 EDTA-SMA (-) : sugiere presencia de carbapenemasa no MBL como
KPC o en Acinetobacter spp. presencia de carbapenemasas tipo
oxacilinasas adquiridas “OXA-23, OXA-24, OXA-58” (confirmar con
PCR). Sugiere pressencia de otro mecanismo no enzimatico.
Para recordar…
 Realizar el test modificado de Hodge, y las
pruebas con inhibidores (APB) y (EDTA-SMA), el
mismo día.
 Todo perfil sospechoso de carbapenemasas debe
ser enviado al laboratorio de referencia para ser
confirmado a través de pruebas de biología
molecular.
Resistencia intrínseca
Resistencia intrínseca
Gracias
Grupo de Microbiología
Subdirección Red Nacional de Laboratorios
Instituto Nacional de Salud
Correo electrónico
cduarte@ins.gov.co
Teléfono (57-1) 220 77 00 Extensión 1423
Bogotá, COLOMBIA
www.ins.gov.co
Línea gratuita nacional: 01 8000 113 400

Enterobacterias

  • 1.
  • 2.
    Antibióticos β-lactámicos Suárez C.(2009).Enferm Infecc Microbiol Clin. 27(2):116–129
  • 3.
    Formación de lapared bacteriana Suárez C.(2009). Enferm Infecc Microbiol Clin. 27(2):116–129
  • 4.
    Mecanismos de acciónde los betalactámicos Suárez C.(2009). Enferm Infecc Microbiol Clin. 27(2):116–129
  • 5.
    Mecanismo de resistenciaa betalactámicos  Betalactamasas  Alteración de permeabilidad de la membrana externa (perdida o reducción de porinas).  Aumento de bombas de extrusión  Modificación de dianas de acción (Mutación en las proteínas de unión a la penicilina).
  • 6.
  • 7.
    Clasificación de lasBetalactamasas Los esquemas más ulizados para la clasificación de las betalactamasas son: Clasificación Funcional según Bush-Jacoby-Medeiros Clasificación molecular según Ambler (clases A, B, C y D). Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
  • 8.
    Clasificación funcional  Grupo 1:Cefalosporinasas que no son inhibidas por ácido clavulánico. Enzimas tipo serina (clase molecular C).  Grupo 2: Betalactamasas (con diferente perfil sustrato) que generalmente son inhibidas por ácido clavulánico Enzimas tipo serina (clase molecular A y D) .  Grupo 3: Metalo-betalactamasas, que son pobremente inhibidas ácido clavulánico de betalactamasas, pero son inhibidas por agentes quelantes (clase molecular B).  Grupo 4: Penicilinasas no inhibidas por ácido clavulánico (no están clasificadas molecularmente). Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
  • 9.
    Clasificación de lasBetalactamasas INHIBIDO POR GRUPO BUSHJACOBY (2009) GRUPO BUSHJACOBY (2009) AMBLER 1 1 C 1e 2a C A 2b A 2be A 2br A 2ber A 2c 2ce 2d A A D 2de D 2df D Cloxacilina y carbapenemes 2e A Cefalosporinas de espectro extendido (no actúa sobre monobactámicos) 2f A 3a 3b 2 3 SUSTRATO REPRESENTANTE Ac. Clav. EDTA Cefalosporinas y cefamicinas No No AmpC, CMY-2, FOX, MIR, ACT, Cefalosporinas Penicilinas Penicilinas y cefalosporinas de primera generación Cefalosporinas de espectro extendido y monobactámicos Penicilinas Cefalosporinas de espectro extendido y monobactámicos Carbenicilinas Carbenicilina y cefepime Cloxacilina Cloxaxilina y cefalosporinas de espectro extendido No Si No No GCI, CMY-37 PC-1 Si No TEM-1, TEM-2, SHV-1 Si No TEM-3, SHV-2, CTX-M-15, PER-1 No No TEM-30, SHV-10 No No TEM-50 Si Si Variable No No No PSE-1, CARB-3 RTG-4 OXA-1, OXA-10 Variable No 0XA-11, OXA-15 Variable No OXA-23, OXA-24, OXA-48 Si No CepA Carbapenemes Variable No KPC, IMI, SME B Carbapenemes No Si IMP, VIM, GIM, SPM, SIM, NDM B Carbapenemes No Si CAU, GOB, FEZ Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
  • 10.
    Betalactamasas de Amplioespectro GRUPO BUSH- GRUPO BUSHAMBLER JACOBY (2009) JACOBY (2009) SUSTRATO INHIBIDO POR Ac. Clav. REPRESENTANTE EDTA C Cefalosporinas y cefamicinas No No AmpC, CMY-2, FOX, MIR, ACT, 1e 2a C A No No GCI, CMY-37 PC-1 A Si No TEM-1, TEM-2, SHV-1 A Si No TEM-3, SHV-2, CTX-M-15, PER-1 2br A No No TEM-30, SHV-10 2ber A No No TEM-50 2c 2ce 2d A A D Si Si Variable No No No PSE-1, CARB-3 RTG-4 OXA-1, OXA-10 2de D Cefalosporinas Penicilinas Penicilinas y cefalosporinas de primera generación Cefalosporinas de espectro extendido y monobactámicos Penicilinas Cefalosporinas de espectro extendido y monobactámicos Carbenicilinas Carbenicilina y cefepime Cloxacilina Cloxaxilina y cefalosporinas de espectro extendido No Si 2be Variable No 0XA-11, OXA-15 2df D Cloxacilina y carbapenemes Variable No OXA-23, OXA-24, OXA-48 2e 2 1 2b 1 A Cefalosporinas de espectro extendido (no actúa sobre monobactámicos) Si No CepA Variable No KPC, IMI, SME Carbapenemes Bush, K. 2f (2010).A AAC. 54 (3): 969 - 976 3 3a B Carbapenemes No Si IMP, VIM, GIM, SPM, SIM; NDM 3b B Carbapenemes No Si CAU, GOB, FEZ Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
  • 11.
    Betalactamasas de EspectroExtendido (BLEE) GRUPO BUSH- GRUPO BUSHAMBLER JACOBY (2009) JACOBY (2009) SUSTRATO INHIBIDO POR Ac. Clav. REPRESENTANTE EDTA C Cefalosporinas y cefamicinas No No AmpC, CMY-2, FOX, MIR, ACT, 1e 2a C A No No GCI, CMY-37 PC-1 A Si No TEM-1, TEM-2, SHV-1 A Si No TEM-3, SHV-2, CTX-M-15, PER-1 2br A No No TEM-30, SHV-10 2ber A No No TEM-50 2c 2ce 2d A A D Si Si Variable No No No PSE-1, CARB-3 RTG-4 OXA-1, OXA-10 2de D Cefalosporinas Penicilinas Penicilinas y cefalosporinas de primera generación Cefalosporinas de espectro extendido y monobactámicos Penicilinas Cefalosporinas de espectro extendido y monobactámicos Carbenicilinas Carbenicilina y cefepime Cloxacilina Cloxaxilina y cefalosporinas de espectro extendido No Si 2be Variable No 0XA-11, OXA-15 2df D Cloxacilina y carbapenemes Variable No OXA-23, OXA-24, OXA-48 2e 2 1 2b 1 A Cefalosporinas de espectro extendido (no actúa sobre monobactámicos) Si No CepA Variable No KPC, IMI, SME Carbapenemes Bush, K. 2f (2010).A AAC. 54 (3): 969 - 976 3 3a B Carbapenemes No Si IMP, VIM, GIM, SPM, SIM, NDM 3b B Carbapenemes No Si CAU, GOB, FEZ Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
  • 13.
    Test confirmatorio paradetección de BLEE Prueba positiva: Un incremento ≥ 5 mm en la zona de diámetro para cualquiera de los agentes antimicrobianos probados en combinación con acido clavulánico vs la zona de diámetro cuando el antimicrobiano se prueba solo. Ejemplo: Ceftazidime (CAZ): 16 mm Ceftazidme + Ac. clavulánico (CAZ/CLA): 21
  • 14.
    Test confirmatorio paradetección de BLEE con método epsilométrico Prueba positiva: Un incremento en la CIM ≥ 3 diluciones dobles en la elipse de cefotaxime en combinación con acido clavulánico (CTL) vs la zona de elipse con cefotaxime solo. Ejemplo: Cefotaxime (CT): 16mg/mL Cefotaxime + Ac. clavulánico (CTL): 0,25mg/mL
  • 15.
    CTX – M 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. VillegasMV. et al. (2004). AAC. 48(2): 629 – 631. Mantilla JR et al. (2006). Biomédica. 26(3): 408 – 414, Pulido IY et al. (2011). Biomédica. 31(1): 15 - 20 Velandia DA. et al. (2006). JCM. 44(5): 1919 – 1920. Villegas MV. et al. (2011). JCM. 49(5): 1993 – 1996 Espinal PA. et al. (2004). Biomédica. 24(3): 252 – 261. Espinal PA. et al. (2010). J Chemother. 22(3):160-4. Leal Al et al (2012). Enferm Infecc Microbiol Clin. SHV
  • 16.
    Carbapenemasas GRUPO BUSH- GRUPOBUSHAMBLER JACOBY (2009) JACOBY (2009) SUSTRATO INHIBIDO POR Ac. Clav. REPRESENTANTE EDTA C Cefalosporinas y cefamicinas No No AmpC, CMY-2, FOX, MIR, ACT, 1e 2a C A No No GCI, CMY-37 PC-1 A Si No TEM-1, TEM-2, SHV-1 A Si No TEM-3, SHV-2, CTX-M-15, PER-1 2br A No No TEM-30, SHV-10 2ber A No No TEM-50 2c 2ce 2d A A D Si Si Variable No No No PSE-1, CARB-3 RTG-4 OXA-1, OXA-10 2de D Cefalosporinas Penicilinas Penicilinas y cefalosporinas de primera generación Cefalosporinas de espectro extendido y monobactámicos Penicilinas Cefalosporinas de espectro extendido y monobactámicos Carbenicilinas Carbenicilina y cefepime Cloxacilina Cloxaxilina y cefalosporinas de espectro extendido No Si 2be Variable No 0XA-11, OXA-15 2df D Cloxacilina y carbapenemes Variable No OXA-23, OXA-24, OXA-48 2e 2 1 2b 1 A Cefalosporinas de espectro extendido (no actúa sobre monobactámicos) Si No CepA Variable No KPC, IMI, SME Carbapenemes Bush, K. 2f (2010). A AAC. 54 (3): 969 - 976 3 3a B Carbapenemes No Si IMP, VIM, GIM, SPM, SIM, NDM 3b B Carbapenemes No Si CAU, GOB, FEZ Bush K. et al (1995). AAC. 39(6): 1211–1233. Bush, K. (2010). AAC. 54 (3): 969 - 976
  • 17.
    Carbapenemasas 1. Grupo másversátil de betalactamasas 2. Incremento en la complejidad (mas clases dentro de cada clase). 3. Diferentes patógenos y diferentes niveles de expresión. 4. Diferentes genes de resistencia asociados. 5. Detección en el laboratorio Nordmann P, Naas T, Poirel L. Global spread of Carbapenemase-producing Enterobacteriaceae. Emerg Infect Dis. 2011 Oct;17(10):1791-8.
  • 18.
    Nordmann P, NaasT, Poirel L. Global spread of Carbapenemase-producing Enterobacteriaceae. Emerg Infect Dis. 2011 Oct;17(10):1791-8.
  • 19.
    Carbapenemasas adquiridas Diapositiva deFernando Pasteran Metalobetalactamasas MBL –clase B VIM, NDM, IMP, SPM. GIM, SIM, AIM, KHM, DIM, FIM BGNNF >> Enterob. R a C3G y C4G S a AZT Enzimas tipo serina clase A KPC, GES, Sme, IMI/NMC Enterob>>BGNNF KPC y GES: R a C3G, C4G y AZT Inh. por EDTA Inh. por APB Grupo 3 Grupo 2f Enzimas tipo serina clase D Oxacilinasas OXA-23, OXA-24, OXA-51, OXA-58, OXA-143, OXA-48 Acinetob>> Enterob. No perfil típico hidrólisis variable Sin inhibidores Grupo 2d
  • 20.
    Carbapenemasas Fuente: Emerg InfectDis 2011 Centers for Disease Control and Prevention (CDC)
  • 21.
  • 22.
    Carbapenemasas KPC KPC REPORTADASEN COLOMBIA en Colombia 1. Carbapenemasas tipo KPC: variantes KPC-2 y KPC-3 (1, 2, 3, 4, 5) 2. Detectadas en enterobacterias (principalmente K, pneumoniae, E coli) y no fermentadores como P. aeruginosa. 3. Diseminación de KPC-3 en hospitales de diferenctes ciudades de Colombia (3, 4, 5). 1. 2. 3. 4. 5. Villegas MV (2006). AAC. 50:2880-2882. Villegas MV (2007). AAC. 51:2001-2004. Saavedra SY (2009). CMI. 15: 19th ECCMID. P791. S481-S482 Saavedra SY (2010). CMI. 16: 20th ECCMID. P1281. S361 López J. (2010). CMI. 54:1354-1357
  • 23.
    Carbapenemasas MBL encolombia 1. Carbapenemasas VIM por primera vez detectadas en Verona Italia (Imipenemasa Veronesa), en 1997 en P. aeruginosa. De las 37 variantes en Colombia se han detectado VIM-8 (1) y VIM-2 (3) en P. aeruginosa y VIM-24 (3) en K. pneumoniae. 1. 2. 3. Crespo MP. et al (2004). JCM. 42(11): 5094-5101 Villegas MV. et al (2006). AAC. 50(1): 226 - 229 Villegas MV. et al (2011). AAC. 55(5): 2428-2830
  • 24.
    Distribución por departamento decarbapenemasas tipo NDM Departamento y/o distrito Microoganismo Bogotá K. pneumoniae Santander Providencia rettgeri Valle Acinetobacter Bogotá Providencia rettgeri Departamentos donde se ha identificado NDM
  • 25.
    Carbapenemasas tipo MBLen KPC REPORTADAS EN COLOMBIA Colombia 1. De las carbapenemasas tipo VIM en Colombia se han reportado las variantes VIM-8 (1), VIM-2 (2) y VIM-24 (3). 2. Carbapenemasa NDM (New Delhi Metallo-B-lactamase), detectada por primera vez en Suecia en 2008 en un paciente transferido de un hospital de Nueva Deli. Aislada principalmente en enterobacterias pero también se ha detectado en no fermentadores. 3. Circular 0056 del Instituto Nacional de Salud del 14 de agosto de 2012 primera detección de aislamientos de K. pneumoniae de origen intrahospitalarios portadores de NDM-1 1. 2. 3. Crespo MP. et al (2004). JCM. 42: 5094-5101 Villegas MV. et al (2006). AAC. 50: 226 - 229 Villegas MV. et al (2011). AAC. 55: 2428-2830
  • 26.
    KPC REPORTADAS ENOxacilinasasen Colombia Carbapenemasas tipo COLOMBIA 1. En Colombia, la carbapenemasa tipo OXA más prevalente es la enzima OXA-23 detectada en A. baumannii de hospitales de diferentes ciudades (1, 2, 3, 4) 2. También se reportó la presencia de la enzima OXA-72 (enzima del subgrupo OXA-24), la cual se presentó en un aislamiento de A. baumannii de Bogotá (5) y en un aislamiento de A. Pittii (6). 1. 2. 3. 4. 5. 6. Villegas MV. et al. (2007) AAC. 51(6):2001-2004. Saavedra SY. et al. (2008). Int J Antimicrob Agents. 31(4):389-391. Pinzíon JO. et al (2006). Infectio 2006;10(2):78-85 Saavedra SY. et al. (2008) CMI. 14(S7) 18th ECCMID P1673: S485 Saavedra et al. (2010) CMI. 14(S7) 20th ECCMID P791: S202- S203. Montealegre MC (2012). Antimicrob Agents Chemother. 56:3996-3998
  • 27.
    Protocolos Antibiograma Enterobacterias Ampicilina (10ug) Ampicilina (10 ug) Amoxicilina- Ac clavulánico (20/10ug) Amoxicilina- Ac clavulánico (20/10ug) Piperacilina //Tazobactam (100/10 ug) Piperacilina Tazobactam (100/10 ug) Cefalotina (30 ug) Cefalotina (30 ug) Cefotaxima (30 ug) Cefotaxima (30 ug) Ceftazidima (30 ug) Ceftazidima (30 ug) Cefepime (30 µg) Cefepime (30 µg) Aztreonam (30ug) Aztreonam (30ug) Imipenem (10 ug) Imipenem (10 ug) Meropenem (10µg) Meropenem (10µg) Gentamicina 10 ug) Gentamicina 10 ug) Amikacina (30 ug) Amikacina (30 ug) Ciprofloxacina (5 ug) Ciprofloxacina (5 ug) Trimetropin sulfa (25 ug) Trimetropin sulfa (25 ug) Cefoxitina (30 ug) Cefoxitina (30 ug) Acido Nalidíxico (30 ug) Acido Nalidíxico (30 ug) Colistin (10 ug) Colistin (10 ug)
  • 28.
    Protocolos Antibiograma Pseudomonas Piperacilina //Tazobactam(100/10 ug) Piperacilina Tazobactam (100/10 ug) Ceftazidima (30 ug) Ceftazidima (30 ug) Cefoperazona (30 ug) Cefoperazona (30 ug) Cefepime (30 ug) Cefepime (30 ug) Aztreonam (30 ug) Aztreonam (30 ug) Imipenem (10 ug) Imipenem (10 ug) Meropenem (10 ug) Meropenem (10 ug) Ciprofloxacina (5 ug) Ciprofloxacina (5 ug) Gentamicina (10 ug) Gentamicina (10 ug) Amikacina (30 ug) Amikacina (30 ug) Colistin (10 ug) (no informar si no se Colistin (10 ug) (no informar si no se hace CIM) hace CIM) Acinetobacter Ampicilina/ Sulbactam (10/10 ug) Piperacilina / Tazobactam (100/10 ug) Ceftazidima (30 ug) Cefepime (30 ug) Imipenem (10 ug) Meropenem (10 ug) Ciprofloxacina (5 ug) Gentamicina (10 ug) Amikacina (30 ug) Trimetropin sulfa (25 ug) Doxiciclina (30 ug) Colistin (10 ug) (no informar si no se hace CIM)
  • 29.
    Test Modificado deHodge (TMH) A partir de la suspensión 0,5 Mac Farland realizar una dilución 1/10 con solución salina
  • 30.
    Cuando realizar elTMH Recomendada por CLSI, para enterobacterias, se debe realizar cuando se cumplan los siguientes criterios (únicamente para enterobacterias):  Resistencia a una o más cefalosporinas de la subclase III. (ceftriaxone, cefotaxime, ceftazidime, cefoperazone, ceftizoxime) 1. Control negativo para producción de carbapenemasas 2. Control positivo para producción de carbapenemasas 3. Aislamiento positivo para producción de carbapenemasas Foto archivo laboratorio de microbiología – Facultad de medicina - Universidad Nacional de Colombia Resistencia o susceptibilidad intermedia a por lo menos un carbapenémico:  Difusión de disco: Ertapenem (19-21 mm) y meropenem ( 16-21mm), no imipenem.
  • 31.
     Microdilución (CIM): CIMde Ertapenem CIM de Imipenem y/o Meropenem 2µg/mL 2 – 4 µg/mL.  Las especies Proteus sp, Providencia sp y Morganella sp, pueden presentar CIMs elevados a imipenem por mecanismos no relacionados a la producción de carbapenemasas, por lo cual sugiere iniciar la búsqueda de carbapenemasas en estos géneros a partir de una CIM de 4µg/mL para imipenem y 2µg/mL para ertapenem y meropenem  Reporte en caso de prueba positiva: “Organismo con posible producción de carbapenemasas” y no cambie la interpretación de susceptibilidad a carbapenémicos. Nota : No todos los aislamientos de Enterobacteriacea productores de Carbapenemasas son TMH (+) y resultados de MHT (+) pueden encontrarse en aislamientos con mecanismos de resistencia a carbapenémicos diferentes a la producción de carbapenemasas .
  • 32.
  • 33.
    Que dice laliteratura • Test modificado de Hodge es útil en la detección de carbapenemasas KPC y OXA-48 (1). • Especificidad: Se pueden presentar falsos positivos en hiperproductores de AmpC o de CTX-M que prreesente alteraciones de impermeabilidad (2) 1. 2. Girlich G (2012). JCM 50: 447 Pasteran F. (2010) JCM 48: 1323-32 • Sensibilidad: Limitaciones en la detección de MBL tipo NDM, por resultados de difícil interpretación (débil detección de NDM o resultado falso negativo) (1). Algunos autores proponen el uso de Sulfato de Zinc (ZnSO4) en el agar. .
  • 34.
    TEST DE HODGEEN NO FERMENTADORES EN INVESTIGACIÓN Para detección de carbapenemasas MBL en Pseudomonas sp y Acinetobacter sp se recomienda adición de sulfato de Zinc (ZnSO4) en el Mueller- Hinton (1). 1. Lee K. (2003). JCM. 41: 4623-9
  • 36.
    Pruebas de sinergismopara carbapenemasas tipo serina clase A con Acido fenil borónico (APB) IMP 15mm APB CAZ 15mm  Sensibilidad (100%) y especificidad (aprox. 98.8%), sin embargo aquellos aislamientos con sobreproducción de AmpC y pérdida de porinas pueden presentar sinergia a APB. Útil para enterobacterias y no fermentadores
  • 37.
    K. pneumon iae E. cloacae APB g 300µ APB 300 µ g Diapositiva de Fernando Pasteran o oro o: ergias conciaAcidajustaBs (centrnaicntro) Sin o ce da optima Distan
  • 38.
    S. marcescens Sme-1b E.cloacae wild type E. coli ATCC 25922. Pasteran F, J. Clin. Microbiol. 2009 June47(6):1631-163 Detección por laboratorio K. pneumoniae KPC -2
  • 39.
    APB Ecl M 951 IMP 15 APB mm IMP 25mm Eclp99 Huevo IMPOS TOR! interfer en Enterob cia: ↑↑↑↑ Amp C acter, C Pastera .freund n F., en ii, P.aer viado a J Clin. uginos Micro a biol,
  • 40.
    Pruebas de sinergismopara carbapenemasas MBL con agentes quelantes Lee K. (2003). JCM. 41: 4623-9  Uso de agentes quelantes: EDTA, EDTA+SMA “mercaptoacetato de sodio” y ácido dipicolínico.  EDTA resultados falsos positivos en no fermentadores.  EDTA+ SMA útil en enterobacterias como en no fermentadores
  • 41.
    P. aeruginosa A. baumannii Detecciónde Metalobetalactamasa Inhibidor EDTA /SMA en diferentes aislamientos S. marscenses A. xylosoxidans A. baumannii
  • 42.
    PRUEBAS DE DOBLEDISCO Aislamiento productor de MBL Aislamiento productor de KPC Aislamientos positivos aquellos que presentan un aumento ≥5mm en el halo de inhibición del disco del carbapenémico + Acido borónico y ≥7mm carbapenémico + EDTA Tsakris A. (2010) JAC. 65: 1664-71
  • 43.
    E-test MBL Prueba positiva: Unincremento en la CIM ≥ 3 diluciones dobles en la elipse de imipenem en combinación con EDTA (IPI) vs la zona de elipse con imipenem solo. Ejemplo: Imipenem (IP): 64mg/mL Imipenen / EDTA (IPI): ≤1mg/mL Walsh T. (2005). CMR. 18: 306-25 Se han reportado falsos positivos en P. aeruginosa y A. baumannii
  • 44.
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    Resistencias naturales acarbapenémicos…
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    Posibles resultados conpruebas de tamizaje para carbapenemasas en enterobacterias  TMH (+), APB (+) EDTA-SMA (-) : sugiere presencia carbapenemasa tipo serina grupo 2f (KPC, Sme, NMC-A) “confirmar con PCR”  TMH (+), APB (-) EDTA-SMA (+) : sugiere presencia carbapenemasa tipo MBL (confirmar con PCR)  TMH (-), APB (-) EDTA-SMA (+) : sugiere presencia carbapenemasa tipo MBL posiblemente NDM, confirmar con PCR  TMH (-), APB (+) EDTA-SMA (-) : sugiere presencia de cefalosporinasas AmpC, confirmar con otras pruebas de tamizaje o con PCR.  TMH (+), APB (+) EDTA-SMA (+) : sugiere presencia carbapenemasa tipo serina y MBL, o presencia de carbapenemasas MBL y AmpC, realizar otras pruebas de tamizaje para AmpC. Confirmar por PCR
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    Posibles resultados conpruebas de tamizaje para carbapenemasas en Pseudomonas spp. y Acinetobacter spp.  EDTA-SMA (+) : sugiere presencia carbapenemasa tipo MBL (confirmar con PCR)  EDTA-SMA (-) : sugiere presencia de carbapenemasa no MBL como KPC o en Acinetobacter spp. presencia de carbapenemasas tipo oxacilinasas adquiridas “OXA-23, OXA-24, OXA-58” (confirmar con PCR). Sugiere pressencia de otro mecanismo no enzimatico.
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    Para recordar…  Realizarel test modificado de Hodge, y las pruebas con inhibidores (APB) y (EDTA-SMA), el mismo día.  Todo perfil sospechoso de carbapenemasas debe ser enviado al laboratorio de referencia para ser confirmado a través de pruebas de biología molecular.
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    Gracias Grupo de Microbiología SubdirecciónRed Nacional de Laboratorios Instituto Nacional de Salud Correo electrónico cduarte@ins.gov.co Teléfono (57-1) 220 77 00 Extensión 1423 Bogotá, COLOMBIA www.ins.gov.co Línea gratuita nacional: 01 8000 113 400