Microbiología  de los Alimentos Dr. Prof. Alejandro Dinamarca Facultad de Farmacia Universidad de Valparaíso
Tipos de Contaminación Biológica Nemátodos, protozoos Genes,  proteínas Bacterias Hongos
Variables relacionadas con el huésped. Edad Estado de Salud Embarazo Medicaciones Desordenes metabólicos Alcoholismo, cirrosis Cantidad de alimentos consumidos Actividad gástrica: antiácidos, variación natural. Desordenes genéticos Estado nutricional Competencia Inmune  Historial quirúrgico Ocupación oficio, nivel socio económico Origen étnico
Giardia   lamblia Entamoeba histolytica Cryptosporidium parvum Cyclospora cayetanensis Anisakis  sp. Diphyllobothrium  spp. Nanophyetus  spp. Eustrongylides  sp. Acanthamoeba  y otras amebas de vida libre Ascaris lumbricoides  y  Trichuris trichiura PARÁSITOS GUSANOS Y PROTOZOOS
Parásitos intestinales del tipo  nemátodos, platelmintos y protozoos. Giardia lamblia Entamoeba histoytica Trichuris trichura Ascaris lumbricoide Taenia saginata (vacuno) Taenia solium (cerdo) Anisaki Protozoos Nemátodos (gusano) Nemátodos (gusano) Platelminto (gusano plano)
Ciclo de vida de Giardia
Ciclo de vida de Ascaris
Ciclo de vida de Tenia
Salmonella  spp. Clostridium botulinum Staphylococcus aureus Campylobacter jejuni Yersinia enterocolitica Yersinia pseudotuberculosis Listeria monocytogenes Vibrio cholerae  O1 Vibrio cholerae  non-O1 Vibrio parahaemolyticus Vibrio vulnificus Clostridium perfringens Bacillus cereus Aeromonas hydrophila Plesiomonas shigelloides Shigella  spp. Miscellaneous   enterics Streptococcus LISTADO DE BACTERIAS PATÓGENAS TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS
Escherichia   coli  – entero toxigénica (ETEC) Escherichia coli  – entero patogénica (EPEC) Escherichia coli  O157:H7 entero hemorrágica (EHEC) Escherichia coli  – entero invasiva (EIEC) ESCHERICHIA coli GRUPO ENTEROVIRULENTO (EEC)
TOXINAS NATURALES  Ciguatera Mariscos toxinas (PSP, DSP, NSP, ASP) Scombroid envenenamiento Tetrodotoxin (Pufferfish) Toxinas de Callampas Aflatoxinas de Hongos Pyrrolizidine alcaloides Phytohaemagglutinin (Red kidney bean poisoning) Grayanotoxina (intoxicación por miel) VIRUS Hepatitis   A   virus Hepatitis E virus Rotavirus Norwalk virus Otros agentes virales OTROS AGENTES PATÓGENOS Priones
TOXINAS  BACTERIANAS
Fuente Consumo de alimentos contaminados con bacterias. Bacterias se multiplican en intestino y producen enterotoxinas Salmonella  sp.,  Clostridium perfringens Consumo de de toxina preformada Toxina botulínica
Staphylococcus aureus Contaminación por descarga nasal Cortes y heridas infectadas Leche con mastitis Carne de ave artrítica Jamón ahumado Aves, pesacdo, mariscos, carnes, papas saladas, cremas de pastelería Alimentos ricos en proteinas .
 
Enterotoxina termoestable relacionada con cepas coagulasa (+) y Dnasa (+). Hemolisinas, lipasas, hialuronidasas, fibrinolisinas. Síntomas  Nauseas, salivación, vómitos, arcadas, diarrea, dolor abdominal, sudoración, deshidratción, debilidad Buenas Practicas de Elaboración.
Botulismo Clostridium botulinum Síndrome neurotóxico Consumo alimentos con neurotoxinas termolábiles Anaeróbico, gram(+), con esporas termoresistentes Neurotoxina A,B,C, alfa, D,E,F y G Alimentos en conservas tipo caseras pH 4,6 Almacenamiento anaeróbico Alta humedad
Toxina Estable pH ácido y pepsina de estómago Activada por tripsina Absorción linfática Impide liberación de ACh en nervios periféricos colinérgicos Signos aparecen entre 2 h a 6 días. Nauseas, vómitos y diarrea Dolor de cabeza, sequedad de boca, visión borrosa o doble. Parálisis facial y luego descendente Parálisis de músculos respiratorios y muerte.
Prevención Buenas Practicas de Fabricación Ebullición por 3 min Calentamiento a 80°C por 30 min Uso de sal y polifosfatos Compuestos antimicrobianos Nisina y Nitritos Procesos de Ahumado Presencia de Ac. Láctico   Antitoxina
Clostridium perfringes A Enterotoxina que se comporta como superantígeno. Alfa- toxina Letal Necrotizante  Hemolítica Cocción insuficiente, conservación inadecuada de alimentos Esporulación en intestino y producción de toxina Liberación de mediadores de inflamación masiva
Carnes y pescado Alimentos cocinados a 100°C por menos de una hora. Almacenados y enfriados lentamente Multiplicación y producción de toxina se inhibe con calentamiento a 90º- 100°C Enfriamiento rápido
Síntomas 7 a 15 horas después de ingesta Diarrea líquida espumosa y maloliente Dolores abdominales. Alteración de canales celulares con entrada de calcio extracelular y agua. Salida de potasio desde hepatocito y falla cardiaca y muerte.
Bacillus cereus Toxina emética y enterotoxina Gram (+), Temp. 28/37°C P. incubación: 1 - 5 horas Alimentos expuestos a temperatura ambiente después de la cocción Síntomas:  Náuseas, vómitos y dolor abdominal, a veces diarrea Duración: 24 - 36 horas Medidas de control:  < 10 °C y > 60°C Evitar envases grandes
Salmonella  sp. Varios serotipos de Salmonella con enterotoxina Incubación: 6 a 72 horas Síntomas:  Dolor abdominal, diarreas, vómitos, escalofrios, fiebre náuseas, malestar Duración: Varios días Modo de transmisión: Por ingestión de alimentos y agua contaminados por heces del hombre y los animales. Medidas de control: Control de la matanza de animales, tratamiento térmico adecuado, evitar contaminación cruzada, evitar proliferación
 
Campylobacter jejuni   Gram (-) , crece a bajas concentraciones de oxígeno. Síntomas:  Fiebre, dolor abdominal severo, náuseas y diarrea algunas veces con sangre y mucus Incubación: 2 - 5 días Duración: 1 a 10 días Reservorio: Animales domésticos, aves, agua contaminada Transmisión: Aves,  leche, agua Medidas de control:  Evitar contaminación cruzada,  Tto térmico o irradiación Tratamiento del agua
 
Escherichia coli   Enterohemorrágica Enteroinvasiva Enterotoxigénica Gram (-),  Optima 37°C Síntomas:  Diarreas, náuseas, vómitos, fiebre, cefalalgia. Para algunas especies sangre y mucus en las heces. Incubación: 1 a 10 días Duración: Días hasta semanas
Transmisión a través de agua y alimentos contaminados: carnes. Medidas de control: Cocción adecuada de los alimentos,  higiene en la manipulación.
O157 H7 Colitis hemorragica; Sindrome hemolítico uremico (HUS) Entero hemorragica (EHEC) O6 H- Diarrea Secretoria Enterotoxigénica (ETEC) O26 H111 Diarrea Infantil EnteroPatogenica  (EPEC) Serotipo Enfermedad Grupo
E. coli
Listeria monocytogenes L eche sin procesar ó contaminada, quesos suaves, vegetales sucios y sin procesar, aves de corral poco cocinadas, y carnes precocinadas . Mujeres embarazadas, neonatos, ancianos, inmunodeprimidos. T ransmi ción  de mujer embarazada a su bebé en  el útero  durante el parto. 
 
Agentes Causales según Alimento Involucrado.  Región Metropolitana
Vibrios  en cultivo de agar TCBS
Vibriosis
 
Vibrio cholerae Gram (-), flagelado Serogrupo O:1 Crece en el intestino Enterotoxina Secreción cloruros, bicarbonatos y agua Pérdida de fluidos y electrolitos 12 a 20 L por día Shock, colapso y muerte 50% de mortalidad
 
Afecciones al tracto gastrointestinal superior Tiempo de inoculación a síntomas 1-6 h ó 2-4h 8-16 h (emésis en 2 a 4 h) Síntomas Nausea, vómitos, diarrea, dolor abdominal, postración. Vómitos, calambres abdominales, diarrea, nauseas. Patógeno/toxina Staphylococcus aureus (toxina) Bacillus cereus (toxina)
Afecciones al tracto gastrointestinal inferior Tiempo de inoculación a síntomas 2-36 h, promedio 6-12 h 12-74 h (18 a 36 h) Síntomas Calambres abdominales, diarrea, diarrea putrefacta asociada a C. perfringens, a veces náuseas y vómitos. Calambres abdominales, diarrea, vómitos, fievre, nausea, dolor de cabeza, diarrea mucosa, lesiones cutaneas (V. vulnificus). Yersinia se mimetiza con apendicitis o resfrios. Patógeno/toxina Clostridium perfringens, Bacillus cereus, Streptococcus faecalis, Streptococcus faecium. Salmonella spp., Shigella, Escherichia enteropatogénicas, Vibrio parahemolityticus, Yersinia enterocolitica, Aeromonas hydrophila, V. cholerae, V. Vulnificus, V. fluvialis
Afecciones neurológicas Tiempo de inoculación a síntomas 0.5-2 h 2-5 min a 3-4 h 30 min a 2-3 h Síntomas Comezón, bochornos, entumecimiento, incoherencia, parálisis respiratoria. Sensación de frió y calor, entumecimiento de labios,lengua y garganta, dolor muscular, diarrea y vómitos. Nausea, vómitos, dolor abdominal, fiebre. Patógeno/toxina Saxitoxina, Toxina paralizante (VPM). Mariscos Bevretoxina, Neurotoxina. Mariscos. Toxina diarréica (VDM). Mariscos.
Contaminación Biológica Fuentes de Contaminación Biológica Aire Suelo Animales
Salud!!!
 
MECANISMOS DE CONTAMINACIÓN BIOLÓGICA CONTAMINACIÓN  DE ORÍGEN CONTAMINACIÓN  CRUZADA Carga microbiana Materias primas Procesamiento Producción Almacenamiento Transporte Venta Adquisición de  organismos Materias primas Producto terminado Indica riesgo Indica riesgo Riesgo
Como evitar la contaminación cruzada.    La contaminación cruzada es aquella que se produce cuando los microbios presentes en los alimentos crudos, utensilios y superficies contaminadas, se expanden hacia los alimentos cocidos o higienizados.  Separe siempre los alimentos crudos de los que ya han sido cocidos y/o se encuentren listos para comer. Tenga cuidado al preparar alimentos en los cuales exista una combinación de crudos y cocidos.  Conserve los alimentos en recipientes separados para evitar el contacto entre crudos y cocidos. En la heladera evite que los alimentos crudos goteen sobre el resto de sus preparaciones, para ello cúbralos o guárdelos en un recipiente.  También es importante no usar, para alimentos cocidos, utensilios como cuchillos o tablas para cortar que se hayan utilizado en la preparación de los alimentos crudos, o que no hayan sido debidamente higienizados.
Tipos de daños producidos por contaminación biológica Biodeterioro Salud Intoxicación Infección Economía Directos Indirectos Desequilibrio nutricional Extrinsecos Intrinsecos Directos Indirectos
Biodeterioro Extrinsecos Intrinsecos Factores abióticos: Temperatura Luz Agua pH Factores bióticos: Carga Microbiana Contaminación ambiental Características Físico-químicas de los alimentos: Contenido de proteínas Carbohidratos Lípidos
Biodeterioro Extrinsecos Intrinsecos Salud Proliferación  Microbiana Intoxicación  Infección Alteración  Bioquímica Intoxicación
Biodeterioro Extrínsecos Intrínsecos Daño económico Proliferación  Microbiana Alteración  (Física-organoléptica) Riesgo Salud Alteración  Bioquímica Alteración  (Física-organoléptica) Riesgo Salud Almacenamiento  Cadena de frío Manipulación
Análisis de microorganismos en alimentos Verificar la presencia y cantidad Identificar el tipo o grupo de microorganismo Cuantificar la cantidad de microorganismos
Tipo o grupo de microorganismo Patógeno No Patógeno Vasta con verificar su presencia Indica riesgo o contaminación Indica deterioro
ANÁLISIS DE MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS Recuento.
MÉTODOS DIRECTOS  Cámara de recuento de Petroff-Hauser: Contadores electrónicos de partículas (tipo Coulter):  MÉTODOS INDIRECTOS  Recuento de viables en placa Recuento sobre filtros Método de múltiples diluciones (Número Más Probable)
 
9 ml de solución  salina de dilución 1 ml  1 ml  1 ml Dilución   10  –1   10  –2   10  –3   10  -4 0.1 ml de inóculo Incubar a T º adecuada por 24 horas
9 ml de solución  salina de dilución 1 ml  1 ml  1 ml Dilución   10  –1   10  –2   10  –3   10  -4 0.1 ml de inóculo 14 colonias Número de microorganismos por ml = Nº de colonias X inóculo X Factor de dilución (1/dil) UFC/ml (g).
 
BACTERIAS COLIFORMES  Coliformes totales: Son aquellas bacterias de morfología bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativas, no esporógenas, que fermentan la lactosa con producción de ácido y de gas a 37°C en un tiempo máximo de 48 horas. Este grupo comprende los géneros  Escherichia, Citrobacter, Klebsiella  y Enterobacter  , pertenecientes a la familia  Enterobacteriaceae.  COLIFORMES   FECALES : Bacterias coliformes de origen fecal son aquellas comprendidas en el grupo anterior, que además son capaces de fermentar la lactosa, con producción de ácido y de gas a 44°C, en un tiempo máximo de 24 horas.  Método de los tubos múltIples  ( NMP = número más probable ). Este método podrá utilizarse para cualquier tipo de agua y será el procedimiento oficial obligatorio en casos de litigio.  Fundamento  : Determinación del número de coliformes mediante siembra de distintos volúmenes del agua a analizar en series de tubos con caldo lactosado y resiembra en medios de cultivo selectivos incubando a temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva, de confirmación de coliformes totales y de confirmación de coliformes fecales.  Medio de cultivo  : -Caldo lactosado -Agar- lactosa- eosina- azul de metileno ( EMB, Medio de Teague- Levine ) -Medio Irquido lactosado con sales biliares y fosfatos ( EC, Medio Hajna- Perry )
Procedimiento  : Prueba presuntiva  . Es un procedimiento de criba en el que una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme y una reacción positiva indica su posible presencia.  Técnica  . Disponer en gradilla una serie de tubos y -en su caso- frascos con caldo lactosado simple y doble concentrado, según la tabla de NMP que se haya elegido. Mediante pipetas estériles, sembrar los tubos de la serie tomando los volúmenes del agua, homogeneizada, que se indican en la tabla. Homogeneizar los tubos sembrados. Incubar a 37°C (± 1°C ) durante 24 h (± 2 h) y, en su caso, hasta 48 h (± 3 h).  Lectura e interpretación  : Se consideran tubos positivos aquellos en los que se observa enturbiamiento, acidez (detectada por un indicador colocado en el medio) y aparición de gas en la campana de fermentación, independientemente de su cantidad. La producción de gas se pone también de manifiesto por el desprendimiento de pequenas burbujas que atraviesan el medio al agitar suavemente el tubo. La ausencia del gas al cabo de 48 h (± 3 h ) se considera como prueba negativa.
Prueba de confirmacion de coliformes totales  . Es un procedimiento mediante el cual una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme mientras que una reacción positiva indica su presencia inequívoca y deben someterse a esta prueba todos los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva.  Técnica  : Se resiembran en placa de Petri con medio EMB los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva, se incuban en estufa a 37°C (± 1°C ) las placas invertidas durante 24 h (± 2 h ) Sobre este medio las bacterias fermentadoras de la lactosa dan colonias características opacas y pigmentadas en rosa, azul o violeta oscuro con o sin reflejo metálico. Las colonias distintas de las descritas corresponden a bacterias no fermentadoras de la lactosa.  Lectura e interpretación de resultados  : Si en la placa de medio Teague-Lévine no se han desarrollado colonias o bien las que han aparecido no son fermentadoras de lactosa con producción de gas, la prueba de confirmación es negativa. Para el cálculo del NMP de coliformes totales se contabilizarán como positivos aquellos tubos de la serie elegida que hayan dado una prueba de confirmación positiva
Prueba de confirmación de coliformes fecales  Es un procedimiento mediante el cual una reacción negativa excluye la presencia de coliformes fecales, mientras que una reacción positiva indica su presencia inequívoca. Deben someterse a esta prueba todos los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva.  Técnica.  Esta prueba debe llevarse a cabo simultáneamente a la de confirmación de coliformes totales. Resembrar cada tubo positivo de la presuntiva en medio EC mediante un asa o dos gotas de pipeta Pasteur. Llevar a estufa o baño maría antes de transcurrir 30 minutos. Incubar a 44°C (± 0,5°C) durante 24 h (± 2 h )  Lectura e interpretación.  Si se observa crecimiento bacteriano con producción de gas a las 24 h o antes, la presencia de bacterias coliformes fecales se considerará confirmada. Para el cálculo del NMP de coliformes fecales se contabilizarán como positivos aquellos tubos de la serie que hayan dado prueba de confirmación positiva.
Muestra de agua o sólido diluído 10 ml  1 ml  0,1 ml Se inoculan 15 tubos de medio lauryl sulfato, cada uno con una campana Durham. Los 5 primeros tubos se inoculan cada uno con 10 ml Los 5 segundos con 1 ml cada uno Los 5 últimos con 0,1 ml Los tubos se inoculan a 35 º C durante 24 +/- 2 horas.
Muestra de agua o sólido diluído 10 ml  1 ml  0,1 ml 24 hrs 35 º C Coliformes totales Se da por resultado positivos aquellos tubos turbios y con producción de gas
Muestra de agua o sólido diluído 10 ml  1 ml  0,1 ml 24 hrs 37 º C Coliformes totales 4  4  1
Prueba confirmatoria de coliformes totales Cada tubo postivo de lauryl se inocula en un tubo de medio Bilis Verde Brillante, cada uno con una campana Durham. Los tubos se incuban a 35 º C por 24 / 48 horas.
Prueba confirmatoria de coliformes totales 3  3  0
Prueba confirmatoria de coliformes fecales Para determinar la presencia de bacterias coliformes fecales, cada uno de los tubos confirmatorios para Coliformes totales se inocula en medio caldo EC y se incuba a 42 º C por 24 horas.
 
IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Enzimas vinculadas con la respiración oxidasa      b)  catalasa   2) Descomposición de azúcares simples, ácidos orgánicos y   otros 2.1) Requerimientos de oxígeno  OF (óxido-fermentación)  2.2) Producción de ácido, o ácido y  gas, Fermentación de  carbohidratos     2.3) Detección de enzimas y vías  metabólicas a) RM-VP (rojo de metilo - Voges  Proskauer) b) Gluconato c) O.N.P.G. (orto nitro ß-D-galactopiranósico) d) Esculina e) Hipurato   3) Fuente única de carbono citrato  4) Utilización de compuestos nitrogenados     4.1) Reducción de nitrato    asimilación   Denitrificación      4.2) Descomposición de carbohidratos  aminoácidos y otros  indol  H  2 S Urea  
  5) Ensayos combinados   TSI (Triple Azúcar Hierro)  LIA (Agar Hierro Lisina)  Bilis esculina   6) Detección de exoenzimas    lecitinasa   proteasas, coagulasa   amilasas   celulasas   desoxirribonucleasas   acción de microorganismos sobre la sangre (hemolisinas)   7) Misceláneos        KCN       b) Bilis       c) producción de pigmentos   8) Test de crecimiento o inhibición       Temperatura      NaCl       Antibióticos
PRUEBAS BIOQUÍMICAS OXIDASA
PRUEBAS BIOQUÍMICAS CATALASA
PRUEBAS BIOQUÍMICAS UTILIZACIÓN DE AZÚCARES LACTOSA
Se utiliza esta prueba en la diferenciación de enterobacterias.  En el mismo medio se pueden determinar la fermentación y utilización de los hidratos de carbono, la producción de sulfhídrico y la producción de gas.  El medio TSI Kligler contiene glucosa, lactosa.  Se preparan en tubos poco inclinados y con bastante medio, inoculándolos por picadura en el centro del medio y realizando además una estría recta al salir sobre la superficie inclinada del medio.  La producción de ácido de glucosa se pone de manifiesto en el fondo del tubo por viraje del indicador a amarillo, la de la lactosa en la superficie inclinada por viraje al mismo color, la producción de gas a partir de glucosa por aparición de burbujas que agrietan el medio y la de sulfhídrico por la aparición de un precipitado negro debido a las sales de hierro presentes. PRUEBAS BIOQUÍMICAS UTILIZACIÓN DE AZÚCARES LACTOSA GLUCOSA GALACTOSA
Resultados de la prueba TSI/HIERRO KLIGLER        K / A   =   superficie alcalina (color fucsia) sobre fondo ácido (amarillo):  el microorganismo es capaz de usar  sólo la glucosa . En la superficie del tubo la glucosa es degradada aeróbicamente (vía oxidativa). A las 24 h, tiempo requerido para la lectura de esta prueba, la glucosa ha sido agotada y el microorganismo comienza a usar las peptonas, con lo cual el medio se alcaliniza dando una superficie de color fucsia. En el fondo del tubo, la glucosa es fermentada produciéndose ácidos estables, por lo tanto se observa un fondo amarillo.       A / A   = superficie ácida (amarillo) sobre fondo ácido (amarillo):  el microorganismo es capaz de usar  ambos azucares . Después de 24 h, cuando el microorganismo a usado toda la glucosa comienza a usar la lactosa. Debido a que éste azúcar está 10 veces más concentrado, aún no se ha consumido totalmente, por lo que el medio se mantiene ácido (color amarillo).       K / K  = superficie alcalina (fucsia) sobre fondo alcalino (fucsia):  el microorganismo no usa  ninguno de los dos azúcares , por lo que usa directamente las peptonas del medio. Si el microorganismos puede usar este compuesto tanto aerobia como anaeróbicamente, el resultado es K/K. Por el contrario, si sólo usa las peptonas aeróbicamente el resultado es K/sin cambio (fucsia/rojo).
 
PRUEBAS BIOQUÍMICAS UTILIZACIÓN DE AZÚCARES LACTOSA
PRUEBAS BIOQUÍMICAS UTILIZACIÓN DE CITRATO
PRUEBAS BIOQUÍMICAS UTILIZACIÓN DE UREA Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por acción del enzima ureasa. Esta actividad enzimática es característica de todas las especies de  Proteus  y se usa sobre todo  para diferenciar este género de otras enterobacterias  que dan negativo o positivo retardado.  Se cultiva el microorganismo en slant en agar urea de Christensen.  Este medio se complementa  después del autoclavado con 50ml/l de urea.  Ésta será degradada por aquellos microorganismos capaces  de producir el enzima ureasa. Esta degradación  produce amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS UREA
Mediante esta prueba se detectala liberación de indol en un cultivo bacteriano.  Dicha liberación se debe a la degradación  de triptófano mediante el enzima  triptofanasa. Para la realización de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48 horas en un caldo de triptona. Para la detección del indol se usa el reactivo de Kovacs: Alcohol amílico o isoamílico (alc.butílico)……………………..50 ml p-dimetilamino-benzaldehído.......................................................…10 g  HCl (concentrado)......................................................................…50 ml  Para el control de calidad se pueden utilizar cultivos conocidos. Las  más convenientes son  Escherichia coli  (indol+) y todas las especies de  Klebsiella  (indol-).  PRUEBAS BIOQUÍMICAS Indol
 
Fermentación ácido mixta:  La realizan las bacterias del grupo de  E.coli  y los productos finales son ácidos orgánicos(ácidos fórmico, acético, láctico  y succínico) que provocan un fuerte descenso  del pH inicial del medio. Puede detectarse por el viraje  del indicador de rojo de metilo que permanece amarillo  por encima de pH 5,1 y rojo por debajo de 4,4. Fermentación butilén glicólica:  La realizan las bacterias del grupo  Klebsiella-Enterobacter  (antiguo aerógenes). Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol, produciéndose acetoína  como intermediario que podrá ser detectada añadiendo  al medio KOH (reactivo A de Voges-Proskauer) y alfa-naftol  (reactivo B de Voges-Proskauer) que reaccionarán  con este compuesto produciendo un color rojo característico.  PRUEBAS BIOQUÍMICAS Rojo Metilo y Voges-Proskauer
 
 
 
 
 
HACCP INFECCIONES INTOXICACIONES MICROORGANISMOS TOXINAS Materias primas Procesos Productos terminados Manipuladores Disminuir/Eliminar Disminuir/Eliminar

Microbiología de alimentos1

  • 1.
    Microbiología delos Alimentos Dr. Prof. Alejandro Dinamarca Facultad de Farmacia Universidad de Valparaíso
  • 2.
    Tipos de ContaminaciónBiológica Nemátodos, protozoos Genes, proteínas Bacterias Hongos
  • 3.
    Variables relacionadas conel huésped. Edad Estado de Salud Embarazo Medicaciones Desordenes metabólicos Alcoholismo, cirrosis Cantidad de alimentos consumidos Actividad gástrica: antiácidos, variación natural. Desordenes genéticos Estado nutricional Competencia Inmune Historial quirúrgico Ocupación oficio, nivel socio económico Origen étnico
  • 4.
    Giardia lamblia Entamoeba histolytica Cryptosporidium parvum Cyclospora cayetanensis Anisakis sp. Diphyllobothrium spp. Nanophyetus spp. Eustrongylides sp. Acanthamoeba y otras amebas de vida libre Ascaris lumbricoides y Trichuris trichiura PARÁSITOS GUSANOS Y PROTOZOOS
  • 5.
    Parásitos intestinales deltipo nemátodos, platelmintos y protozoos. Giardia lamblia Entamoeba histoytica Trichuris trichura Ascaris lumbricoide Taenia saginata (vacuno) Taenia solium (cerdo) Anisaki Protozoos Nemátodos (gusano) Nemátodos (gusano) Platelminto (gusano plano)
  • 6.
    Ciclo de vidade Giardia
  • 7.
    Ciclo de vidade Ascaris
  • 8.
    Ciclo de vidade Tenia
  • 9.
    Salmonella spp.Clostridium botulinum Staphylococcus aureus Campylobacter jejuni Yersinia enterocolitica Yersinia pseudotuberculosis Listeria monocytogenes Vibrio cholerae O1 Vibrio cholerae non-O1 Vibrio parahaemolyticus Vibrio vulnificus Clostridium perfringens Bacillus cereus Aeromonas hydrophila Plesiomonas shigelloides Shigella spp. Miscellaneous enterics Streptococcus LISTADO DE BACTERIAS PATÓGENAS TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS
  • 10.
    Escherichia coli – entero toxigénica (ETEC) Escherichia coli – entero patogénica (EPEC) Escherichia coli O157:H7 entero hemorrágica (EHEC) Escherichia coli – entero invasiva (EIEC) ESCHERICHIA coli GRUPO ENTEROVIRULENTO (EEC)
  • 11.
    TOXINAS NATURALES Ciguatera Mariscos toxinas (PSP, DSP, NSP, ASP) Scombroid envenenamiento Tetrodotoxin (Pufferfish) Toxinas de Callampas Aflatoxinas de Hongos Pyrrolizidine alcaloides Phytohaemagglutinin (Red kidney bean poisoning) Grayanotoxina (intoxicación por miel) VIRUS Hepatitis A virus Hepatitis E virus Rotavirus Norwalk virus Otros agentes virales OTROS AGENTES PATÓGENOS Priones
  • 12.
  • 13.
    Fuente Consumo dealimentos contaminados con bacterias. Bacterias se multiplican en intestino y producen enterotoxinas Salmonella sp., Clostridium perfringens Consumo de de toxina preformada Toxina botulínica
  • 14.
    Staphylococcus aureus Contaminaciónpor descarga nasal Cortes y heridas infectadas Leche con mastitis Carne de ave artrítica Jamón ahumado Aves, pesacdo, mariscos, carnes, papas saladas, cremas de pastelería Alimentos ricos en proteinas .
  • 15.
  • 16.
    Enterotoxina termoestable relacionadacon cepas coagulasa (+) y Dnasa (+). Hemolisinas, lipasas, hialuronidasas, fibrinolisinas. Síntomas Nauseas, salivación, vómitos, arcadas, diarrea, dolor abdominal, sudoración, deshidratción, debilidad Buenas Practicas de Elaboración.
  • 17.
    Botulismo Clostridium botulinumSíndrome neurotóxico Consumo alimentos con neurotoxinas termolábiles Anaeróbico, gram(+), con esporas termoresistentes Neurotoxina A,B,C, alfa, D,E,F y G Alimentos en conservas tipo caseras pH 4,6 Almacenamiento anaeróbico Alta humedad
  • 18.
    Toxina Estable pHácido y pepsina de estómago Activada por tripsina Absorción linfática Impide liberación de ACh en nervios periféricos colinérgicos Signos aparecen entre 2 h a 6 días. Nauseas, vómitos y diarrea Dolor de cabeza, sequedad de boca, visión borrosa o doble. Parálisis facial y luego descendente Parálisis de músculos respiratorios y muerte.
  • 19.
    Prevención Buenas Practicasde Fabricación Ebullición por 3 min Calentamiento a 80°C por 30 min Uso de sal y polifosfatos Compuestos antimicrobianos Nisina y Nitritos Procesos de Ahumado Presencia de Ac. Láctico Antitoxina
  • 20.
    Clostridium perfringes AEnterotoxina que se comporta como superantígeno. Alfa- toxina Letal Necrotizante Hemolítica Cocción insuficiente, conservación inadecuada de alimentos Esporulación en intestino y producción de toxina Liberación de mediadores de inflamación masiva
  • 21.
    Carnes y pescadoAlimentos cocinados a 100°C por menos de una hora. Almacenados y enfriados lentamente Multiplicación y producción de toxina se inhibe con calentamiento a 90º- 100°C Enfriamiento rápido
  • 22.
    Síntomas 7 a15 horas después de ingesta Diarrea líquida espumosa y maloliente Dolores abdominales. Alteración de canales celulares con entrada de calcio extracelular y agua. Salida de potasio desde hepatocito y falla cardiaca y muerte.
  • 23.
    Bacillus cereus Toxinaemética y enterotoxina Gram (+), Temp. 28/37°C P. incubación: 1 - 5 horas Alimentos expuestos a temperatura ambiente después de la cocción Síntomas: Náuseas, vómitos y dolor abdominal, a veces diarrea Duración: 24 - 36 horas Medidas de control: < 10 °C y > 60°C Evitar envases grandes
  • 24.
    Salmonella sp.Varios serotipos de Salmonella con enterotoxina Incubación: 6 a 72 horas Síntomas: Dolor abdominal, diarreas, vómitos, escalofrios, fiebre náuseas, malestar Duración: Varios días Modo de transmisión: Por ingestión de alimentos y agua contaminados por heces del hombre y los animales. Medidas de control: Control de la matanza de animales, tratamiento térmico adecuado, evitar contaminación cruzada, evitar proliferación
  • 25.
  • 26.
    Campylobacter jejuni Gram (-) , crece a bajas concentraciones de oxígeno. Síntomas: Fiebre, dolor abdominal severo, náuseas y diarrea algunas veces con sangre y mucus Incubación: 2 - 5 días Duración: 1 a 10 días Reservorio: Animales domésticos, aves, agua contaminada Transmisión: Aves, leche, agua Medidas de control: Evitar contaminación cruzada, Tto térmico o irradiación Tratamiento del agua
  • 27.
  • 28.
    Escherichia coli Enterohemorrágica Enteroinvasiva Enterotoxigénica Gram (-), Optima 37°C Síntomas: Diarreas, náuseas, vómitos, fiebre, cefalalgia. Para algunas especies sangre y mucus en las heces. Incubación: 1 a 10 días Duración: Días hasta semanas
  • 29.
    Transmisión a travésde agua y alimentos contaminados: carnes. Medidas de control: Cocción adecuada de los alimentos, higiene en la manipulación.
  • 30.
    O157 H7 Colitishemorragica; Sindrome hemolítico uremico (HUS) Entero hemorragica (EHEC) O6 H- Diarrea Secretoria Enterotoxigénica (ETEC) O26 H111 Diarrea Infantil EnteroPatogenica (EPEC) Serotipo Enfermedad Grupo
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    Listeria monocytogenes Leche sin procesar ó contaminada, quesos suaves, vegetales sucios y sin procesar, aves de corral poco cocinadas, y carnes precocinadas . Mujeres embarazadas, neonatos, ancianos, inmunodeprimidos. T ransmi ción de mujer embarazada a su bebé en el útero durante el parto. 
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    Agentes Causales segúnAlimento Involucrado. Región Metropolitana
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    Vibrios encultivo de agar TCBS
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    Vibrio cholerae Gram(-), flagelado Serogrupo O:1 Crece en el intestino Enterotoxina Secreción cloruros, bicarbonatos y agua Pérdida de fluidos y electrolitos 12 a 20 L por día Shock, colapso y muerte 50% de mortalidad
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    Afecciones al tractogastrointestinal superior Tiempo de inoculación a síntomas 1-6 h ó 2-4h 8-16 h (emésis en 2 a 4 h) Síntomas Nausea, vómitos, diarrea, dolor abdominal, postración. Vómitos, calambres abdominales, diarrea, nauseas. Patógeno/toxina Staphylococcus aureus (toxina) Bacillus cereus (toxina)
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    Afecciones al tractogastrointestinal inferior Tiempo de inoculación a síntomas 2-36 h, promedio 6-12 h 12-74 h (18 a 36 h) Síntomas Calambres abdominales, diarrea, diarrea putrefacta asociada a C. perfringens, a veces náuseas y vómitos. Calambres abdominales, diarrea, vómitos, fievre, nausea, dolor de cabeza, diarrea mucosa, lesiones cutaneas (V. vulnificus). Yersinia se mimetiza con apendicitis o resfrios. Patógeno/toxina Clostridium perfringens, Bacillus cereus, Streptococcus faecalis, Streptococcus faecium. Salmonella spp., Shigella, Escherichia enteropatogénicas, Vibrio parahemolityticus, Yersinia enterocolitica, Aeromonas hydrophila, V. cholerae, V. Vulnificus, V. fluvialis
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    Afecciones neurológicas Tiempode inoculación a síntomas 0.5-2 h 2-5 min a 3-4 h 30 min a 2-3 h Síntomas Comezón, bochornos, entumecimiento, incoherencia, parálisis respiratoria. Sensación de frió y calor, entumecimiento de labios,lengua y garganta, dolor muscular, diarrea y vómitos. Nausea, vómitos, dolor abdominal, fiebre. Patógeno/toxina Saxitoxina, Toxina paralizante (VPM). Mariscos Bevretoxina, Neurotoxina. Mariscos. Toxina diarréica (VDM). Mariscos.
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    Contaminación Biológica Fuentesde Contaminación Biológica Aire Suelo Animales
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    MECANISMOS DE CONTAMINACIÓNBIOLÓGICA CONTAMINACIÓN DE ORÍGEN CONTAMINACIÓN CRUZADA Carga microbiana Materias primas Procesamiento Producción Almacenamiento Transporte Venta Adquisición de organismos Materias primas Producto terminado Indica riesgo Indica riesgo Riesgo
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    Como evitar lacontaminación cruzada.   La contaminación cruzada es aquella que se produce cuando los microbios presentes en los alimentos crudos, utensilios y superficies contaminadas, se expanden hacia los alimentos cocidos o higienizados. Separe siempre los alimentos crudos de los que ya han sido cocidos y/o se encuentren listos para comer. Tenga cuidado al preparar alimentos en los cuales exista una combinación de crudos y cocidos. Conserve los alimentos en recipientes separados para evitar el contacto entre crudos y cocidos. En la heladera evite que los alimentos crudos goteen sobre el resto de sus preparaciones, para ello cúbralos o guárdelos en un recipiente. También es importante no usar, para alimentos cocidos, utensilios como cuchillos o tablas para cortar que se hayan utilizado en la preparación de los alimentos crudos, o que no hayan sido debidamente higienizados.
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    Tipos de dañosproducidos por contaminación biológica Biodeterioro Salud Intoxicación Infección Economía Directos Indirectos Desequilibrio nutricional Extrinsecos Intrinsecos Directos Indirectos
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    Biodeterioro Extrinsecos IntrinsecosFactores abióticos: Temperatura Luz Agua pH Factores bióticos: Carga Microbiana Contaminación ambiental Características Físico-químicas de los alimentos: Contenido de proteínas Carbohidratos Lípidos
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    Biodeterioro Extrinsecos IntrinsecosSalud Proliferación Microbiana Intoxicación Infección Alteración Bioquímica Intoxicación
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    Biodeterioro Extrínsecos IntrínsecosDaño económico Proliferación Microbiana Alteración (Física-organoléptica) Riesgo Salud Alteración Bioquímica Alteración (Física-organoléptica) Riesgo Salud Almacenamiento Cadena de frío Manipulación
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    Análisis de microorganismosen alimentos Verificar la presencia y cantidad Identificar el tipo o grupo de microorganismo Cuantificar la cantidad de microorganismos
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    Tipo o grupode microorganismo Patógeno No Patógeno Vasta con verificar su presencia Indica riesgo o contaminación Indica deterioro
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    ANÁLISIS DE MICROORGANISMOSEN ALIMENTOS Recuento.
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    MÉTODOS DIRECTOS Cámara de recuento de Petroff-Hauser: Contadores electrónicos de partículas (tipo Coulter): MÉTODOS INDIRECTOS Recuento de viables en placa Recuento sobre filtros Método de múltiples diluciones (Número Más Probable)
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    9 ml desolución salina de dilución 1 ml 1 ml 1 ml Dilución 10 –1 10 –2 10 –3 10 -4 0.1 ml de inóculo Incubar a T º adecuada por 24 horas
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    9 ml desolución salina de dilución 1 ml 1 ml 1 ml Dilución 10 –1 10 –2 10 –3 10 -4 0.1 ml de inóculo 14 colonias Número de microorganismos por ml = Nº de colonias X inóculo X Factor de dilución (1/dil) UFC/ml (g).
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    BACTERIAS COLIFORMES Coliformes totales: Son aquellas bacterias de morfología bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativas, no esporógenas, que fermentan la lactosa con producción de ácido y de gas a 37°C en un tiempo máximo de 48 horas. Este grupo comprende los géneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter , pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. COLIFORMES FECALES : Bacterias coliformes de origen fecal son aquellas comprendidas en el grupo anterior, que además son capaces de fermentar la lactosa, con producción de ácido y de gas a 44°C, en un tiempo máximo de 24 horas. Método de los tubos múltIples ( NMP = número más probable ). Este método podrá utilizarse para cualquier tipo de agua y será el procedimiento oficial obligatorio en casos de litigio. Fundamento : Determinación del número de coliformes mediante siembra de distintos volúmenes del agua a analizar en series de tubos con caldo lactosado y resiembra en medios de cultivo selectivos incubando a temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva, de confirmación de coliformes totales y de confirmación de coliformes fecales. Medio de cultivo : -Caldo lactosado -Agar- lactosa- eosina- azul de metileno ( EMB, Medio de Teague- Levine ) -Medio Irquido lactosado con sales biliares y fosfatos ( EC, Medio Hajna- Perry )
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    Procedimiento :Prueba presuntiva . Es un procedimiento de criba en el que una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme y una reacción positiva indica su posible presencia. Técnica . Disponer en gradilla una serie de tubos y -en su caso- frascos con caldo lactosado simple y doble concentrado, según la tabla de NMP que se haya elegido. Mediante pipetas estériles, sembrar los tubos de la serie tomando los volúmenes del agua, homogeneizada, que se indican en la tabla. Homogeneizar los tubos sembrados. Incubar a 37°C (± 1°C ) durante 24 h (± 2 h) y, en su caso, hasta 48 h (± 3 h). Lectura e interpretación : Se consideran tubos positivos aquellos en los que se observa enturbiamiento, acidez (detectada por un indicador colocado en el medio) y aparición de gas en la campana de fermentación, independientemente de su cantidad. La producción de gas se pone también de manifiesto por el desprendimiento de pequenas burbujas que atraviesan el medio al agitar suavemente el tubo. La ausencia del gas al cabo de 48 h (± 3 h ) se considera como prueba negativa.
  • 62.
    Prueba de confirmacionde coliformes totales . Es un procedimiento mediante el cual una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme mientras que una reacción positiva indica su presencia inequívoca y deben someterse a esta prueba todos los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva. Técnica : Se resiembran en placa de Petri con medio EMB los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva, se incuban en estufa a 37°C (± 1°C ) las placas invertidas durante 24 h (± 2 h ) Sobre este medio las bacterias fermentadoras de la lactosa dan colonias características opacas y pigmentadas en rosa, azul o violeta oscuro con o sin reflejo metálico. Las colonias distintas de las descritas corresponden a bacterias no fermentadoras de la lactosa. Lectura e interpretación de resultados : Si en la placa de medio Teague-Lévine no se han desarrollado colonias o bien las que han aparecido no son fermentadoras de lactosa con producción de gas, la prueba de confirmación es negativa. Para el cálculo del NMP de coliformes totales se contabilizarán como positivos aquellos tubos de la serie elegida que hayan dado una prueba de confirmación positiva
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    Prueba de confirmaciónde coliformes fecales Es un procedimiento mediante el cual una reacción negativa excluye la presencia de coliformes fecales, mientras que una reacción positiva indica su presencia inequívoca. Deben someterse a esta prueba todos los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva. Técnica. Esta prueba debe llevarse a cabo simultáneamente a la de confirmación de coliformes totales. Resembrar cada tubo positivo de la presuntiva en medio EC mediante un asa o dos gotas de pipeta Pasteur. Llevar a estufa o baño maría antes de transcurrir 30 minutos. Incubar a 44°C (± 0,5°C) durante 24 h (± 2 h ) Lectura e interpretación. Si se observa crecimiento bacteriano con producción de gas a las 24 h o antes, la presencia de bacterias coliformes fecales se considerará confirmada. Para el cálculo del NMP de coliformes fecales se contabilizarán como positivos aquellos tubos de la serie que hayan dado prueba de confirmación positiva.
  • 64.
    Muestra de aguao sólido diluído 10 ml 1 ml 0,1 ml Se inoculan 15 tubos de medio lauryl sulfato, cada uno con una campana Durham. Los 5 primeros tubos se inoculan cada uno con 10 ml Los 5 segundos con 1 ml cada uno Los 5 últimos con 0,1 ml Los tubos se inoculan a 35 º C durante 24 +/- 2 horas.
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    Muestra de aguao sólido diluído 10 ml 1 ml 0,1 ml 24 hrs 35 º C Coliformes totales Se da por resultado positivos aquellos tubos turbios y con producción de gas
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    Muestra de aguao sólido diluído 10 ml 1 ml 0,1 ml 24 hrs 37 º C Coliformes totales 4 4 1
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    Prueba confirmatoria decoliformes totales Cada tubo postivo de lauryl se inocula en un tubo de medio Bilis Verde Brillante, cada uno con una campana Durham. Los tubos se incuban a 35 º C por 24 / 48 horas.
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    Prueba confirmatoria decoliformes totales 3 3 0
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    Prueba confirmatoria decoliformes fecales Para determinar la presencia de bacterias coliformes fecales, cada uno de los tubos confirmatorios para Coliformes totales se inocula en medio caldo EC y se incuba a 42 º C por 24 horas.
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    Enzimas vinculadas conla respiración oxidasa     b) catalasa   2) Descomposición de azúcares simples, ácidos orgánicos y  otros 2.1) Requerimientos de oxígeno  OF (óxido-fermentación) 2.2) Producción de ácido, o ácido y gas, Fermentación de carbohidratos     2.3) Detección de enzimas y vías metabólicas a) RM-VP (rojo de metilo - Voges Proskauer) b) Gluconato c) O.N.P.G. (orto nitro ß-D-galactopiranósico) d) Esculina e) Hipurato   3) Fuente única de carbono citrato  4) Utilización de compuestos nitrogenados    4.1) Reducción de nitrato   asimilación   Denitrificación     4.2) Descomposición de carbohidratos aminoácidos y otros indol H 2 S Urea  
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      5) Ensayoscombinados TSI (Triple Azúcar Hierro) LIA (Agar Hierro Lisina) Bilis esculina   6) Detección de exoenzimas   lecitinasa   proteasas, coagulasa   amilasas   celulasas   desoxirribonucleasas   acción de microorganismos sobre la sangre (hemolisinas)   7) Misceláneos      KCN      b) Bilis      c) producción de pigmentos   8) Test de crecimiento o inhibición     Temperatura     NaCl      Antibióticos
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    Se utiliza estaprueba en la diferenciación de enterobacterias. En el mismo medio se pueden determinar la fermentación y utilización de los hidratos de carbono, la producción de sulfhídrico y la producción de gas. El medio TSI Kligler contiene glucosa, lactosa. Se preparan en tubos poco inclinados y con bastante medio, inoculándolos por picadura en el centro del medio y realizando además una estría recta al salir sobre la superficie inclinada del medio. La producción de ácido de glucosa se pone de manifiesto en el fondo del tubo por viraje del indicador a amarillo, la de la lactosa en la superficie inclinada por viraje al mismo color, la producción de gas a partir de glucosa por aparición de burbujas que agrietan el medio y la de sulfhídrico por la aparición de un precipitado negro debido a las sales de hierro presentes. PRUEBAS BIOQUÍMICAS UTILIZACIÓN DE AZÚCARES LACTOSA GLUCOSA GALACTOSA
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    Resultados de laprueba TSI/HIERRO KLIGLER       K / A = superficie alcalina (color fucsia) sobre fondo ácido (amarillo): el microorganismo es capaz de usar sólo la glucosa . En la superficie del tubo la glucosa es degradada aeróbicamente (vía oxidativa). A las 24 h, tiempo requerido para la lectura de esta prueba, la glucosa ha sido agotada y el microorganismo comienza a usar las peptonas, con lo cual el medio se alcaliniza dando una superficie de color fucsia. En el fondo del tubo, la glucosa es fermentada produciéndose ácidos estables, por lo tanto se observa un fondo amarillo.     A / A = superficie ácida (amarillo) sobre fondo ácido (amarillo): el microorganismo es capaz de usar ambos azucares . Después de 24 h, cuando el microorganismo a usado toda la glucosa comienza a usar la lactosa. Debido a que éste azúcar está 10 veces más concentrado, aún no se ha consumido totalmente, por lo que el medio se mantiene ácido (color amarillo).     K / K = superficie alcalina (fucsia) sobre fondo alcalino (fucsia): el microorganismo no usa ninguno de los dos azúcares , por lo que usa directamente las peptonas del medio. Si el microorganismos puede usar este compuesto tanto aerobia como anaeróbicamente, el resultado es K/K. Por el contrario, si sólo usa las peptonas aeróbicamente el resultado es K/sin cambio (fucsia/rojo).
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    PRUEBAS BIOQUÍMICAS UTILIZACIÓNDE UREA Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por acción del enzima ureasa. Esta actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este género de otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado. Se cultiva el microorganismo en slant en agar urea de Christensen. Este medio se complementa después del autoclavado con 50ml/l de urea. Ésta será degradada por aquellos microorganismos capaces de producir el enzima ureasa. Esta degradación produce amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa.
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    Mediante esta pruebase detectala liberación de indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberación se debe a la degradación de triptófano mediante el enzima triptofanasa. Para la realización de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48 horas en un caldo de triptona. Para la detección del indol se usa el reactivo de Kovacs: Alcohol amílico o isoamílico (alc.butílico)……………………..50 ml p-dimetilamino-benzaldehído.......................................................…10 g HCl (concentrado)......................................................................…50 ml Para el control de calidad se pueden utilizar cultivos conocidos. Las más convenientes son Escherichia coli (indol+) y todas las especies de Klebsiella (indol-). PRUEBAS BIOQUÍMICAS Indol
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    Fermentación ácido mixta: La realizan las bacterias del grupo de E.coli y los productos finales son ácidos orgánicos(ácidos fórmico, acético, láctico y succínico) que provocan un fuerte descenso del pH inicial del medio. Puede detectarse por el viraje del indicador de rojo de metilo que permanece amarillo por encima de pH 5,1 y rojo por debajo de 4,4. Fermentación butilén glicólica: La realizan las bacterias del grupo Klebsiella-Enterobacter (antiguo aerógenes). Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol, produciéndose acetoína como intermediario que podrá ser detectada añadiendo al medio KOH (reactivo A de Voges-Proskauer) y alfa-naftol (reactivo B de Voges-Proskauer) que reaccionarán con este compuesto produciendo un color rojo característico. PRUEBAS BIOQUÍMICAS Rojo Metilo y Voges-Proskauer
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    HACCP INFECCIONES INTOXICACIONESMICROORGANISMOS TOXINAS Materias primas Procesos Productos terminados Manipuladores Disminuir/Eliminar Disminuir/Eliminar