ppt del ibuprofeno

1. Caracterización genética de la vía
degradativa del ibuprofeno de
Rhizorhabdus wittichiiMPO218
Integrantes: Alondra Cornejo- Valeria Cuevas.
Fecha de entrega: 28- 11-2023
Profesor: Raúl Donoso

2. Introducción
La contaminación generalizada por ibuprofeno en suelos y aguas representa una seria amenaza
ambiental y de salud. A pesar de los avances en la identificación de microorganismos que lo
degradan, los procesos específicos siguen siendo poco comprendidos.
Este estudio se enfoca en la cepa bacteriana Rhizorhabdus wittichii MPO218, utilizando análisis
genéticos y metabólicos para elucidar su capacidad única para metabolizar el ibuprofeno.
La metodología empleada en este estudio proporciona una base sólida para examinar las
complejidades de la biodegradación del ibuprofeno y ofrece perspectivas esenciales para mitigar su
impacto ambiental.

3. ¿Qué es el ibuprofeno?
• El ibuprofeno es un fármaco
antiinflamatorio no esteroideo utilizado
para aliviar dolor, fiebre e inflamación al
inhibir la producción de prostaglandinas.
• el "ibuprofeno de Rhizorhabdus
wittichiiMPO218" se refiere al
ibuprofeno que es degradado por esta
bacteria. Es decir, la bacteria es capaz de
utilizar el ibuprofeno como fuente de
carbono y energía, y lo degrada a través
de una serie de reacciones metabólicas.

4. Métodos
Cepas y Condiciones de
Crecimiento Bacteriano:
Se utilizaron las cepas de E.
coli y MPO218 en diferentes
medios de crecimiento y
condiciones de temperatura y
aerobiosis.
Se emplearon diferentes
fuentes de carbono y
antibióticos en
concentraciones específicas.
Procedimientos de Biología
Molecular:
Manipulaciones de ADN se
realizaron siguiendo
estándares.
Se utilizaron técnicas de PCR
con oligonucleótidos
específicos.
La secuenciación de ADN se
realizó y se analizaron las
secuencias mediante BLAST en
NCBI.
Clonación y Expresión de Genes:
Se amplificaron genes
específicos y se clonaron en
vectores plasmídicos.
Se indujo la expresión génica
con IPTG en placas de medio.
Mutagénesis con miniTn5-Km:
Se llevaron a cabo
mutagénesis con un
transposón para generar
mutantes.
Se seleccionaron mutantes
específicos mediante
crecimiento en diferentes
medios.

5. Mapeo de Inserciones de Km
por PCR:
• Se amplificaron las regiones
flanqueantes de las inserciones del
transposón para determinar su
ubicación en el genoma.
Construcción de Biblioteca
Genómica:
• Se construyó una biblioteca genómica de
la cepa MPO218 con aproximadamente
20,000 clones independientes.
Complementación de Mutantes
de Inserción con Biblioteca
Genómica:
• Los mutantes de inserción fueron
complementados utilizando la biblioteca
genómica para restaurar su
funcionalidad.
Ensayos de RT-qPCR:
• Se realizaron ensayos de RT-qPCR para
analizar la expresión génica en presencia
y ausencia del ibuprofeno.
Análisis de Secuencia:
• Se utilizó BLAST y ontología genética
para caracterizar genes y grupos.
• Se realizaron modelados de proteínas y
predicciones funcionales.
Disponibilidad de Datos:
• Se proporcionaron números de acceso y
enlaces a las secuencias disponibles en
bases de datos públicas.

6. Resultados

13. Conclusión
• Se identificaron nuevos genes involucrados en la degradación del
ibuprofeno por la bacteria Rhizorhabdus wittichii MPO218 y se
describen los mecanismos moleculares involucrados en este proceso.
• También se discuten las implicaciones de estos hallazgos para la
biotecnología y la biorremediación.
• En general, la conclusión destaca la importancia de comprender los
procesos de degradación de contaminantes ambientales para
encontrar soluciones sostenibles y eficaces para su eliminación.