Microbiologia y Antibioticos

Temas 4.4 al 4.8
Microbiología I
Profesor Juan Ramón Cota

INDICE Exámenes Bacteriológicos:
• Urogenital – Erica Rosales Ballin
• Cavidad Bucal – Kathya Ureña Castillo
• Ojos – Izamar Zúñiga Acosta
• Piel y anexos - Oscar Velasco Barrios
•Antibióticos – Uriel Tranquilino Aquino
Análisis Clínicos
Grupo 505
2007-2011

Examen bacteriológico de tracto
genital
Un numero considerable de microorganismos, tanto del tipo
aerobio como del anaerobio, se encuentran normalmente en los
genitales externos de ambos sexos.
En las mujeres se presenta una flora de:
 Difteroides aerobios
 Estafilococos
 Sarcinas
 Levaduras
 Bacilos del colon con sus afines y espiroquetas
 Bacilos fusiformes
 Protozoarios del genero Trichomona
El inocuo bacilo acido resistente, Mycobacterium smegmatis, se
encuentra frecuentemente en la región genital.

Continuación…
Un bacilo grande, aerobio, acidofilo y
grampositivo llamando bacilo de
Doderlein, es el organismo mas importante
que se ve en los cultivos vaginales.
 Ayuda a mantener la elevada acidez que
sirve para impedir el libre crecimiento de
otros gérmenes posiblemente dañinos.

 Las bacterias de los genitales externos son
generalmente inocuas, se pueden presentar los bacilos
fusiformes y las espiroquetas, que son patógenas y
pueden ser responsables de ulceraciones u otras
inflamaciones locales.
 La infección del útero después del parto (fiebre
puerperal) es producida en algunas casos por bacterias
que se encuentran normalmente en la vagina y en la
vulva.

Toma de muestra:
 Las muestras obtenidas en los casos de uretritis suelen
ser sospechosos de Neisseria gonorrheae.
 Para preparar el frotis se deberá tomar la secreción
directamente sobre el portaobjetos, fijarla por calor,
teñirla por el metodo gram.
 La presencia de diplococos gramnegativos
intracelulares de forma característica es un dato
sugestivo de gonorrea.
 Debe sembrarse en agar chocolate.

Continuación…
 A temperatura corporal y en un medio de CO2 al 10%.
 Puede confirmarse el diagnostico mediante reacciones
características de azucares, utilizando los del suero.
 Puede haber uretritis por microorganismos diferentes
a los de la gonorrea, por ejemplo:
Estreptococo pyogenes, Escherichia coli y Estreptococos
anaerobios.

 En estos casos la técnica es la misma que para el
material de vagina y cuello uterino. Si es posible, debe
examinarse gota suspendida un poco de secreción
uretral reciente, para excluir la presencia de las
tricomonas.

Generalidades Bucales
 La boca contiene flora bacteriana natural.
 Es un medio perfecto para la proliferación
de bacterias debido a sus superficies
distintas, a la temperatura ideal corporal
que mantiene y por la humedad y alimento
que puede proporcionar al microorganismo
extraño.
 La principal formación microbiana ajena a
la local es conocida como placa dental
bacteriana.

Placa bacteriana
 La placa bacteriana es un sistema ecológico formado por
una comunidad bacteriana, rica en microorganismo
anaerobios y aerobios, que se desarrolla sobre las
superficies dentales con nula o escasa limpieza.
Placa bacteriana
•80% agua
•20% fase sólida
•70% bacterias
•30% matriz orgánica o acelular

Estructura de la
placa dental:
La placa subgingival
Si la placa esta encontacto con
el margen gingival
debajo del margen de la encía,
entre el diente y el tejido del surco
gingival.
La supragingival por arriba del margen de la encía
placa marginal gingivitis

CRITERIOS PARA IDENTIFICAR
ODONTOPATOGENOS
 1. Ser de manera sistémica de individuos enfermos.
 2. Crecer en cultivos puros en el laboratorio,
 3. Producir una enfermedad similar cuando se inocula
en animales de laboratorio.
 4. Ser recuperado de lesiones en un animal de
laboratorio enfermo.

Toma de muestra : Cavidad Bucal
 Irá precedida de un enjuague
con agua o solución salina. Las
lesiones pseudomembranosas
y las secreciones se recogen
con una torunda o hisopo de
algodón estéril.

Medios de cultivo recomendados
 Medio de transporte de Amies : para la mayor parte de
bacterias de la boca.
 Agar Dextrosa Sabouraud
 Agar Harina de Maíz
Incubar a 37ºC durante 3 semanas. Un error habitual es tirar
los medios una vez que se ha conseguido el aislamiento de
algún hongo, ya que puede haber otros de crecimiento más
lento.

Medios de cultivo recomendados
 La incubación total
comprende un periodo de
una semana, pero se
prolongará hasta cuatro
semanas en caso de
sospecha de un hongo
filamentoso. En la mayoría
de los casos, las colonias
se pueden observar a las
24-48 h de incubación. En
los medios cromogénicos
electivos el color de las
colonias de levaduras es
más nítido a las 48-72 h.

DIAGNOSTICO CLINICO
Principales microorganismos
causantes de enfermedades
bucales

Micosis de la Cavidad oral
 Las micosis de la cavidad oral son
frecuentes y habitualmente de carácter leve
o moderado. La mayoría están producidas
por Candida albicans y, en menor medida,
por otras especies de Candida Se observan
especialmente en paciente portadores de
prótesis o con inmunodeficiencias,
considerándose que cuatro de cada mil
pacientes que acuden a una consulta dental
general presentan síntomas de infección
oral candidiásica

Caries
 La placa bacteriana produce ácidos a
partir del azúcar ingerido que atacan el
esmalte del diente produciendo
cavidades: Así, se forma una caries
dental. Los que con mayor frecuencia se
relacionan con el inicio y desarrollo de
la caries son: estreptococos del grupo
mutans, Lactobacillus sp. , y
Actinomyces sp. , estos pueden ser
aislados a partir de placa dental supra y
subgingival y en saliva.

Sarro
 Cuando la placa no se remueve, ésta se
cristaliza y se forma el sarro. El sarro produce
enfermedades de las encías, como
reabsorción del hueso, lo que causa
movilidad en los dientes y hasta perdida de
los mismos. Suelen abundar bacterias
saprófitas, pudiéndose observar gran
variedad de morfologías: espiroquetas,
cocobacilos, diplococos y bacilos.

Mal aliento o Halitosis
 Frecuentemente es
causado por la
acumulación de placa
bacteriana y sarro entre los
dientes y encías .En una
investigación llevada a
cabo últimamente por
biólogos de la Universidad
de Búffalo y financiada por
Colgate se identificó la
bacteria causante de la
alitosis: Solobacterium
moorei.

Ojos
Las infecciones oculares se localizan
Generalmente en parpados, conjuntiva que es una
membrana mucosa que reviste la cara posterior de los
dos párpados y la parte anterior o libre del globo del ojo,
en el saco lagrimal.
Loa microorganismos que con mas frecuencia se aíslan son:
 Bacilos difteroides.
 Estafilococo aureus.
 Neisseria catarralis.
 Gonorrae.
 Estreptococco alfa y beta hemolitico.
 Klebsiella.
 Neumococo.

Continuación……
Cualquier organismo gram negativo tiene significancia
clinica, organismos cosiderados de menos importancia
en otras localizaciones son causantes de enfermedades
del ojo y puede dar por resultado una enfermedad
ocular progresiva.
Se deberán realizar de preferencia en los estados agudos
de la enfermedad antes de la administración de
antibióticos como tratamiento de la enfermedad. Si
hubo aplicación de gotas oftálmicas que puedan
contener algún antiséptico es preferible esperar de 12 a
24 hrs. antes de tomar la muestra

Toma de muestra. La muestra se deberá tomar con isopos estériles, se
recomienda la aplicación de un colirio anestésico
(tetracaina).
 Se tomara del parpado o conjuntiva.
 Deberá sembrarse de inmediato en agar chocolate.
 Preparar un frotis para tinción
 De inmediato

Generalidades
 La piel representa una barrera notablemente eficaz
contra las infecciones bacterianas.
 En su superficie viven varias especies de bacterias que
llegan a ser patógenas ocasionando infecciones en
forma de granos o manchas rojizas.

Personas propensas a infecciones.
 Los diabéticos, que poseen una irrigación cutánea
disminuida, en especial la de las manos y de los pies.
 Los enfermos de SIDA, que presentan un sistema
inmunológico deprimido.
 Personas con piel dañada por :los rayos del sol, las
rascaduras u otra irritación también tiene más
posibilidades de infectarse.

Infecciones mas comunes.
 Impétigo
 Ectima
 Síndrome de la piel escaldada estafilocócica
 Erisipela
 Celulitis
 Funiculitis
 Furúnculos
 La lepra

Impétigo
 El impétigo es una infección cutánea causada por
Staphylococcus o Streptococcus, que se caracteriza por la
formación de pequeñas ampollas llenas de pus (pústulas).
 Esta enfermedad afecta principalmente a los niños y
puede aparecer en cualquier parte del cuerpo, aunque
frecuentemente lo hace en la cara, los brazos y las piernas.

Ectima
 Es una lesión más profunda de Impétigo, recibe
también el nombre de Impétigo ulcerado
Ocacinado por:
 Estreptococo B- hemolítico Grupo A
 Estafilococo aureus (colonizador secundario)
Manifestaciones clínicas:
 Ulceraciones redondeadas, aspecto en
"sacabocado" únicas ó escasas en numero, de 1 a
3cm de diámetro, cubiertas por una costra
amarillenta.
 Localización usual en las piernas.
 Suelen aparecen en personas con edema crónico
ó enfermedades graves.

Síndrome de la piel escaldada
estafilocócica
 Es un cuadro eritrodermico agudo,
que evoluciona a despegamientos
epidérmicos superficiales amplios.
 Ocasionado por:
 cepas dermatopáticas de Estafilococo
aureus que elaboran toxinas
epidermolíticas.
 Manifestaciones clínicas
 La piel es muy sensible y al
movimiento se produce dolor.
 La piel tiene aspecto escaldado ó
a quemadura por agua caliente.

Erisipela
 La erisipela es una infección cutánea causada por
estreptococos B hemolítico del Grupo A.
 Habitualmente, la infección aparece en la cara, en el
brazo o en la pierna, y a veces comienza en una zona de
piel lesionada. Los ganglios linfaticos comienzan a
Incharse y suele ser doloroso.

Celulitis
 La celulitis es una infeccion en las capas profundas de
la piel ocacionada por varios tipos de bacterias en
especial por estreptococos.
 Afectando las piernas y los dedos principalmente.

Foliculitis
 Es una inflamación de los
folículos pilosos causada
por una infección por
Staphylococcus.
 En los folículos pilosos se
forma una pequeña
cantidad de pus, que hace
que se irriten y enrojezcan.
La infección daña los pelos,
los cuales se pueden
arrancar fácilmente.

Furúnculos
 Los furúnculos son áreas grandes, dolorosas,
inflamadas y sobreelevadas originadas por una
infección por estafilococos alrededor de los folículos
pilosos.
 Los furúnculos a menudo tienen pus en el centro.

La lepra
 La lepra es una
enfermedad infecciosa, de
nula transmisibilidad
cuando está debidamente
tratada, aunque los
pacientes que no reciben
tratamiento, o este es
inadecuado, si constituyen
una fuente de contagio.
Puede estar producida por
la bacteria Mycobacterium
leprae

Bacterias causantes de infecciones.
 Mycobacterium Leprae
 Streptococcus B- Hemolitico grupo A
 Staphylococcus Aureus
 Staphylococcus Epidermis
 Bacillus anthracis

Obtención de muestras
 Biopsias de tejido
 Aspirados con jeringa
 Muestra tomada con torunda.

Medios de cultivo y prubas
bioquimicas
 Estafilococo 110 Agár
 Sal y Manitol Agár
 Middelbrook 7H10//7H11 Agár

Estafiloco 110 agar
 Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciación
presuntiva de estafilococos, en base a la producción de
pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de
gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.
 Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede
causar intoxicación alimentaria.
 En el medio de cultivo,el extracto de levadura y la tripteína
aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima
gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos
decarbono fermentables.

 Resultados :
 Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la
zona de crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de
microorganismos permanece sin cambio.
 Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
 Prueba negativa :no hay diferencias de color entre las zonas de
crecimiento bacteriano y la zona sin inocular.
 Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las
colonias.

M.O Pigmento Fermentación
de manitol
Hidrólisis de la
gelatina
Prueba de la
coagulasa
Staphylococcu
s aureus
+ + + +
Staphylococcu
s
epidermis
- - + -
 Características del medio preparado:
ámbar claro, opalescente con precipitado.

Sal y Manitol Agár
 Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para
el aislamiento y diferenciación de estafilococos.
 Es recomendado para el aislamiento de estafilococos
patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos,
productos cosméticos y otros materiales de
importancia sanitaria.
 Se trata de un medio altamente selectivo debido a su
alta concentración salina.

 Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el
manitol acidificandoe lmedio; las colonias aparecen
rodeadas de una zona amarilla brillante.
 Los estafilococos coagulasa negativos, presentan
colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las
colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin
exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa.

M.O. Crecimiento Caracteristicas de la
colonia
Staphylococcus aureas
ATCC 25923
Bueno Amarillo
Staphylococcus
epidermidis ATCC 14990
Excelente Rojo

Agár Middelbrook 7H10//7H11
Middlebrook 7H10 agar es un medio de cultivo sólido se
utilicen especialmente para el cultivo de Mycobacterium,
especialmente Mycobacterium tuberculosis.
Se ha informado de que el medio 7H10 tiende a crecer menos
contaminantes que los medios de comunicación a base de
huevos utilizados para el cultivo de micobacterias.

Los antibióticos
 Un antibiótico ha sido definido como una sustancia
química producida por un microorganismo capaz de
inhibir el desarrollo de otros microorganismos.
 Los antibióticos modificados por manipulaciones químicas
aun se consideran como tales.
 Un agente antimicrobiano es activo contra los
microorganismos y puede ser producido en forma natural
por microorganismos o sintéticamente en el laboratorio.
 El término agente quimioterápico ha sido empleado para
referirse a agentes antimicrobianos sintéticos o no y
también se refiere a agentes que actúan contra células
humanas como inmunomoduladores y drogas
antitumorales.
 Los términos agente antiviral y agente antimicótico son
términos más especificos, incluidos dentro de la categoría
más general de agentes antimicrobianos.

 Sintéticos.
 Todos los tipos de penicilina poseen un núcleo químico
idéntico llamado anillo.
 La cadena química que está adjunta al anillo es diferente en
cada tipo.
 Cambiando las moléculas de la cadena, los científicos
diseñan drogas con efectos potencialmente diferentes sobre
organismos diferentes.
 Algunas de estas drogas son útiles para tratar infecciones,
algunas no lo son.
 Los fabricantes farmacéuticos ahora utilizan imágenes
generadas por computadora de los anillos y experimentan
con una variedad interminable de cadenas posibles.
 Los investigadores han desarrollado antibióticos con vida
media larga (el período de eficacia), que permite tomar la
medicación una vez en 24 horas en vez de cada pocas horas.
 Los antibióticos más nuevos son también más efectivos
contra una gama más amplia de infecciones de lo que eran
las drogas anteriores.

 Las técnicas de un antibiograma requieren experiencia en
el laboratorio y conocimientos bacteriológicos adecuados,
de lo contrario se cometen errores importantes de
repercusión clínica.
 Factores a tener en cuenta que podrían causar problemas a
la hora de la terapéutica.
 Consistencia del medio de cultivo;
 Cantidad de antibiótico contenida en cada disco ensayado;
 Material infeccioso fresco;
 Tiempo de incubación y espera para efectuar la lectura;
 Medición correcta (en milímetros) del halo inhibitorio;
 Calidad de la inhibición;
 Prever contaminación (posible) del antibiograma por
empleo de técnicas defectuosas.

Variedades
 Hay docenas de antibióticos. Los siguientes son de uso común:
 Las penicilinas. Los diversos tipos de penicilinas constituyen un gran grupo
de antibióticos antibacteriales de los cuales los deribados de la benzil penicilina
son los únicos de que se produce naturalmente a partir de cepas. La Penicilina
G y ampicillin están en esta clase. Otra penicilina, llamada piperacillin, ha
mostrado ser efectiva contra 92 por ciento de las infecciones sin ocasionar
efectos colaterales serios. Las penicilinas se administran frecuentemente en
combinación con algunas otras drogas de las siguientes categorías.
 Cefalosporinas. Parecidas a las penicilinas, las cefalosporinas se utilizan
frecuentemente cuando una sensibilidad (reacción alérgica) a las penicilina se
conoce o es sospechada en un paciente. Ceftriaxona sódica es un tipo de
Cefalosporina que es muy efectiva para combatir infecciones profundas tales
como las que ocurren en los huesos y como resultado de una cirugía.
 Aminoglicósidos. Los aminoglicósidos incluyen la streptomicina y la
neomicina. Estas drogas se usan para tratar tuberculosis, la peste bubónica, y
otras infecciones. A causa de los efectos colaterales potencialmente serios que
genera, tal como interferencia a la audición y sensibilidad a la luz del sol, estas
drogas se administran con cuidado. (Todos los antibióticos se administran con
cuidado; el cuidado especial se toma por las posibles consecuencias negativas
superiores a las usuales de administración de una droga.)

Sulfo Drogas
 Tetraciclinas. Las tetraciclinas son efectivas contra la neumonía, el
tifo, y otras bacterias que ocasionan la enfermedad pero puede dañar la
función del hígado y riñones. La tetraciclina en un gel base especial se
usa para tratar muchas infecciones de ojo.
 Macrolidas. Las macrolidas se usan frecuentemente en pacientes que
resultan ser sensibles a la penicilina. La eritromicina es la mejor
medicina conocida en este grupo.
 Polipéptidos. La clase de antibióticos llamado polipéptidos es
bastante tóxica (venenosa) y se usa mayormente sobre el superficie de
la piel (tópicamente). La Bacitracina está en esta categoría.
 La Sulfonamida fue la primer droga antimicrobial que fue usada. Las
Sulfo drogas, que se hicieron a partir de químicos, tienen en su mayor
parte los mismos efectos que las penicilinas posteriormente
desarrolladas. Aunque las sulfo drogas pueden tener efectos nocivos
sobre los riñones a la vez son efectivas contra infecciones de riñón por
ello se toman siempre con grandes cantidades de agua para impedir la
formación de cristales de la droga. Gantrisin es todavía la más útil entre
estas sulfa drogas.

Otros Antimicrobiales
 Otros antimicrobiales incluyen furazolidone y tritethoprim. El primero se usa
primariamente en infecciones gastrointestinales; el posterior, cuando se
combina con una de las sulfonamidas, es efectivo en infecciones urinarias y
respiratorias
 Antifungales. Los Antifungales combaten la enfermedad ocasionada por
hongos tal como candida. El hongo que ocasiona la infección requiere
tratamiento a largo plazo. Las drogas tales como griseofulvin se toman
frecuentemente por seis meses. La mayoría de la infección funginales ocurren
sobre la piel o la membrana mucosa.
 Antivirales. Muy pocas se conocer sobre tratar infecciones virosas (el frío
común es un ejemplo). Un virus es el pensamiento para ser el agente infeccioso
más pequeño con la capacidad para duplicarse (reproducirse) a sí mismo.
Además, posee capazidades de mutante, o cambio, con gran rapidez. Las pocas
drogas que son efectivas contra infecciones virosas inmiscuidas con la
formación de nuevas, células normales y se usan por lo tanto con extremo
cuidado. Otras drogas micróbicas tienen poco efecto sobre un virus y se dan
únicamente para tratar infecciones bacteriológicas que acompañan o resultan
desde la infección virosa primaria.

Sensibilidad bacteriana a los
antibióticos
 La determinación de la Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la
base de la medida de la sensibìlidad de una bacteria a un determinado
antibiótico.
 La CIM se define como la menor concentración de una gama de
diluciones de antibiótico que provoca una inhibición de cualquier
crecimiento bacteriano visible.
 Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una escala
de actividad del antibiótico frente a diferentes especies bacterianas.
 Hay diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de
rutina, y de manera semicuantitativa, las CIM (métodos manuales y
métodos automatizados o semiautomatizados).
 Estos diferentes métodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa
bacteriana en función de su sensibilidad frente al antibiótico probado.
 Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia (I) o Resistente (R) al
antibiótìco.
 Para un determinado antibiótico, una cepa bacteriana es, según la
NCCLS:

 Sensible, si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el
caso de un tratamiento a la dosìs habitual.
 Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy
reducida. No es de esperar ningún efecto terapéutico sea cual fuere el
tipo de tratamiento.
 Intermedia, cuando el éxito terapéutico es imprevisible.
 Se puede conseguir efecto terapéutico en ciertas condiciones (fuertes
concentraciones locales o aumento de la posología).
 Ciertas moléculas son representativas de un grupo de antibióticos.
 Los resultados (S, I, R) obtenidos con estas moléculas pueden ser
ampliados a los antibióticos del grupo, que en ese caso no es necesario
ensayar (Ejemplo: Equivalencia entre la cefalotina que se ensaya y las
restantes cefalosporinas de 1ª generación que no es necesario probar, ya
que el resultado puede deducirse del obtenido en la cefalotina).
 Este hecho permite ensayar un número reducido de antibióticos, sin
limitar por ello las posibilidades terapéuticas.

Administración de Antibióticos
 Para actuar contra organismos infecciosos, un
antibiótico puede aplicarse externamente, como en el
caso de una cortadura sobre la superficie de la piel, o
internamente, alcanzando la corriente sanguínea
dentro del cuerpo. Los antibióticos se producen de
varias formas y en diferentes maneras.
 Las formas de administrar antibióticos son:
 Local. La aplicación local significa "a un área local" tal
como sobre la piel, en los ojos, o sobre la membrana
mucosa. Los antibióticos para el uso local están
disponibles en forma de polvos, ungüentos, o cremas.

 Oral.
 Hay dos formas de acción para la aplicación por vía
oral.
 Las tabletas, líquidos, y cápsulas que se tragan. En este
caso el antibiótico se libera en el intestino delgado
para ser absorbido en la corriente sanguínea.
 Caramelos o pastillas, que se disuelvan en la boca,
donde el antibiótico se absorbe a través de la
membrana mucosa.

 Parenteral.
 Las aplicaciones fuera del intestino se llaman
parenterales.
 Una forma de aplicación es mediante una inyección,
que puede ser subcutánea (debajo la piel),
intramuscular (en un músculo), o intravenosa (en una
vena).
 La administración Parenteral de un antibiótico se usa
cuando un médico requiere una concentración fuerte y
rápida del antibiótico en la corriente sanguínea.

Antibiosis
 La relación general entre un antibiótico y un
organismo infeccioso es de antibiosis.
 Esta palabra refiere a una asociación de dos de
organismos en la que uno es dañado o es matado por el
otro.
 La relación entre seres humanos y la enfermedad que
ocasionan los gérmenes es de antibiosis.
 Si una persona es afectada por gérmenes, ésta es el
organismo lastimado; si el ataque de germen es
repelido por las defensas del cuerpo, los gérmenes son
los organismos lastimados.
 Cuando el sistema de defensa de una persona no puede
controlar la antibiosis a su propio favor, se usan los
antibióticos para desequilibrar la balanza hacia la
salud.

La acción de Antibióticos
 Los antibióticos pueden ser bacteriostáticos (bloquean el
crecimiento y multiplicación celular) o bactericidas (producen
la muerte de las bacterias).
 Para desempeñar estas funciones, los antibióticos deben
ponerse en el contacto con las bacterias.
 Se cree que los antibióticos se inmiscuyen con la superficie de
células de bacterias, ocasionando un cambio en su capacidad de
reproducirse.
 La prueba de la acción de un antibiótico en el laboratorio
muestra cuanta exposición a la droga es necesaria para frenar la
reproducción o para matar las bacterias.
 Aunque a una gran cantidad de un antibiótico le tomaría un
tiempo menor para matar las bacterias que ocasionan una
enfermedad, tal dosis comúnmente haría que la persona sufra
de una enfermedad ocasionada por la droga.
 Por lo tanto, los antibióticos se dan en una serie de cantidades
pequeñas.

Antibiograma.
 El antibiograma es un test de resistencia o sensibilidad de las bacterias
bajo la acción de diversos antibióticos.
 Si un microorganismo está en contactado con la droga y aún así persiste
su capacidad vital, se deduce la inoperancia farmacológica del producto
para tal germen.
 Hay resistencia al antibiótico. Inversamente si la zona que rodea al
antibiótico está totalmente libre, o sea, que no hay desarrollo de la
bacteria: esta es sensible a la droga.
 Esta zona circundante al antibiótico, llamada halo de inhibición, es de
gran valor clínico para iniciar, continuar o modificar una terapia.
 Técnica: El laboratorista realiza comúnmente la técnica de difusión en
placa de petri, porque es más sencillo y menos costoso que la técnica de
dilución en tubo.
 Este método fue descrito inicialmente por Vincent y Vincent en 1944 y
modificado parcialmente por otros investigadores.
 Al medio de cultivo para las bacterias colocado en cápsulas de petri, se
le adicionan discos o comprimidos de antibióticos, separados entre sí
convenientemente, se incuban durante 12 horas a 18 horas a 37ºC , al
cabo de las cuales se efectúa la lectura.

Interpretación de un Antibiograma
 Cìertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in
vitro, cuando se inscriben en el DNA bacteriano.
 Su expresión en el organìsmo, en donde las condicìones en
cuanto a medios son diferentes, expondría al riesgo de fracaso
terapéutico.
 Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de
manera global a fin de descubrir, a través de la comparación
de las respuestas para cada antibiótico, un mecanismo de
resistencia incluso débilmente expresado.
 Así, gracias a la interpretación, una cepa que aparece como
falsamente sensible será categorizada como I o R (Ejemplo:
Una cepa de Klebsiella pneumoniae productora de BLSE
puede aparecer sensible in vitro a las cefalosporìnas de 3"
generación.
 El resultado de Sensible debe ser corregido a Intermedio o
Resistente, ya que la utilización de estos antibióticos correría
el riesgo de provocar un fracaso terapéutico).

Métodos automatizados
 La mayoría de estos novedosos métodos utilizan sistemas
de microdilución en medio líquido sobre microplacas con
pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano en
los diferentes pocillos por medio de un autoanalizador
(mediciones por turbidez o fluorescencia) o, en el caso de
los sistemas más sencillos, por simple lectura óptica del
técnico a través de un visor invertido de espejo.
 Su manipulación suele ser fácil y rápida, generalmente
automatizada o semiautomatizada, lo que los convierte en
métodos ideales para grandes volúmenes de trabajo.
 Una de sus grandes limitaciones es que sólo ofrecen
garantía para investigar microorganismos de crecimiento
rápido y que no tengan requerimientos especiales.

Antibiograma realizado por
método automático
 Antibiograma realizado por método automático
 En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una
microplaca para autoanalizador que incluye fase de identificación y fase
de antibiograma (panel microScan). Las tres filas superiores de la
microplaca son la zona de "identificación" del microorganismo, las cinco
filas inferiores son el apartado "antibiograma".
 La foto de la derecha, un plano más cercano de la mitad inferior
izquierda de la microplaca, permite observar con más detalle algunas
filas de pocillos con diluciones seriadas de algunos antibióticos.
 La dosificación de cada antibiótico aumenta, en cada fila, de izquierda a
derecha (obsérvese los rótulos bajo cada pocillo: 8-16 ... 1-2-8-16 ... 2-8-
32). Los pocillos que en la imagen muestran un color verde intenso
tienen crecimiento bacteriano, o sea, el antibiótico en cuestión no
impide el desarrollo del microorganismo a estudio.
 Los pocillos transparentes marcarían los puntos de inhibición de cada
antibiótico.

Método de E-test
 Es uno de los métodos más recientes que se han presentado en el
mercado y resulta de una curiosa combinación de características
de los métodos anteriores.
 Se trata de una técnica cuantitativa en placa que permite obtener
una lectura directa de CMI en µg/ml, ya que se emplean tiras
plásticas impregnadas en concentraciones crecientes de
antibiótico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.
 Una de sus grandes ventajas, dadas sus características, es que
resulta un método ideal para estudiar cualquier tipo de
microorganismo, aerobio o anaerobio, incluyendo aquellos
llamados "fastidiosos" o los que tengan requerimientos
especiales para crecer.
 El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre
ella se deposita la tira del antibiótico (o antibióticos) a ensayar.
 Tras la incubación de 16-24 horas a 35ºC se observan las placas y
se valora la zona de inhibición, de forma elíptica, alrededor de
cada tira.
 La CMI se lee directamente observando el punto más bajo de la
elipse que presente crecimiento.

Antibiograma realizado por el
método de E-test
 En la fotografía de la izquierda se muestra una vista general de
una placa con crecimiento bacteriano y con dos tiras de E-test.
 La zona de color más claro que ocupa la mayor parte de la placa
es el crecimiento bacteriano en las zonas no inhibidas.
 Las elipses más oscuras que rodean la parte superior de las tiras
E-test marcan las zonas en que los respectivos antibióticos han
inhibido, con mayor o menor eficacia, el crecimiento del
microorganismo a estudio.
 La foto de la derecha, un plano más cercano de la mitad inferior
de la placa, permite observar con más detalle lo señalado en el
párrafo anterior.
 Se aprecia perfectamente como el pico de la zona más estrecha
de la elipse en la tira de MZ coincide, en la escala graduada, con
la franja entre las marcas de 1.5 y 2, lo que nos indicaría que la
CMI de este antibiótico (MZ) para este microorganismo sería de
2 µg/ml

Método de difusión en agar
 Este método fue modifcado en 1947 por Bondi y col.
 incorporando el agente antimicrobiano a discos de papel de filtro.
 Fue un paso adelante gigantesco ya que el uso de los discos de papel permitía
preparar un gran número de pruebas idénticas y almacenarlas para uso futuro.
 En 1966, después de los estudios realizados por Bauer, Kirby, Sherris y Turk,
ensayando diferentes cepas bacterianas, el empleo de los discos de papel de filtro
para las pruebas de sensibilidad fue estandarizado y correlacionado
definitivamente con las CMI correspondientes.
 Durante muchos años, y a pesar de ser una técnica puramente cualitativa, el
método de difusión por disco (o método Kirby-Bauer), en función sobre todo de su
comodidad, economía y fiabilidad, ha sido, y aun es, uno de los más utilizados en
los laboratorios de todo el mundo.
 El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar y sobre su
superficie se disponen los discos correspondientes a varios antibióticos.
 Se incuban las placas durante 16-24 horas a 35ºC y al cabo de este tiempo se
estudia el crecimiento en ellas.
 Se valora el diámetro de la zona de inhibición que se forma alrededor de cada disco
y se compara con las referencias oportunas publicadas por el NCCLS.
 Con esta referencia podemos informar si el microorganismo es Sensible,
Intermedio o Resistente (S, I, R) a cada uno de los antibióticos ensayados en las
placas.

Antibiograma realizado por el
método de difusión en agar
 En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una placa
con crecimiento bacteriano y con seis discos de antibióticos.
 La zona de color claro que ocupa la mayor parte de la placa es el
crecimiento bacteriano en las zonas no inhibidas
 . Los círculos negros que rodean a cinco de los seis discos marcan las
zonas en que los respectivos antibióticos han inhibido, con mayor o
menor eficacia, el crecimiento del microorganismo a estudio.
 El sexto disco (AM-10) no tiene a su alrededor halo de inhibición lo que
indica la resistencia del microorganismo a ese antibiótico.
 La foto de la derecha, un plano más cercano de la mitad superior de la
placa, permite observar con más detalle lo señalado en el párrafo
anterior.
 Puede verse además, con gran claridad, la especial disminución de la
intensidad de crecimiento del microorganismo en la zona interior del
halo de inhibición del disco de CTX-30, debido probablemente a la
aparición de mutantes resistentes de dicho microorganismo capaces de
soportar en mayor medida que el resto el efecto inhibitorio del
antibiótico.

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