Este documento describe una actividad experimental para preparar muestras microscópicas frescas y teñidas de catáfila de cebolla y observarlas bajo el microscopio. Se presenta el marco teórico sobre preparados histológicos, el procedimiento experimental que incluye la preparación de dos muestras (una fresca y otra teñida con Lugol), y las observaciones realizadas de cada muestra. Se concluye que el colorante permitió observar con mayor claridad los componentes de la catáfila y que es una actividad a

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2. Actividad experimental
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Hipótesis
A partir de la coloración podremos identificar con mayor claridad los
componentes de la catáfila
Objetivo
Realizar preparado histológico fresco de catáfila.
Marco teórico
Los preparados son métodos de análisis que nos van a permitir, gracias al microscopio y otras
herramientas de laboratorio, la visualización de una complejidad de elementos que a simple vista no son
captados porel ojohumano.
En primer lugar tenemos que tener en cuenta que hay dos tipos de preparados:
Preparados frescos (el que hacemos en el momento. El problema de estos preparados es
que se deshidratan rápidamente y se arruinan) y Preparados fijos (los que se hacen en
un momento determinado y, como su nombre lo indica, se "fijan" al portaobjetos para
ser observado en cualquier otro momento. No todos las células o tejidos pueden ser
fijados pero, cuando puede hacerse (y cuando tiene sentido), tiene la ventaja de que no
se deterioran con el tiempo).
La forma más simple de preparar un espécimen para su examen microscópico es
hacer una preparación en fresco. Existen dos técnicas, una preparación en fresco simple
(entre porta y cubre) consiste en colocar una gota de líquido con los microorganismos
sobre un portaobjetos y a continuación cubrirla con un cubreobjetos. Una preparación
en gota pendiente se realiza colocando una gota del material en un cubreobjetos y
cubriéndolo con un portaobjetos (invertido) con una excavación central (portaobjetos
excavado). Hay que sellar la preparación con vaselina alrededor de la excavación. La
ventaja de esta última técnica, es que la preparación no se seca y puede ser observada
durante un tiempo más largo. Las preparaciones en fresco se utilizan para observar
microorganismos vivos.
Sin embargo, el inconveniente de la observación en fresco es que no permite
aumentar el contraste de la preparación. Por tanto, su uso, con un microscopio óptico de
campo claro, está bastante limitado. El microscopio de campo claro es más útil para la
observación de especímenes teñidos. Los colorantes son compuestos químicos
utilizados para aumentar el contraste. Existen algunos, llamados colorantes vitales, que
pueden añadirse directamente a una preparación en fresco; por tanto, colorean células
vivas. No obstante, la mayoría de los colorantes son solamente efectivos después de que
los microorganismos hayan sido fijados, es decir, se encuentren muertos y adheridos al
portaobjetos. Para la fijación por calor, se realiza una fina extensión de una gota de
muestra líquida sobre un portaobjetos y se deja secar al aire; a continuación, se pasa la
preparación de Forma rápida sobre la llama de un mechero. El calor de la llama mata las
células microbianas por desnaturalización de sus proteínas. Las proteínas coaguladas

3. Actividad experimental
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unen las células al porta. Cuando se desea fijar especímenes delicados se utiliza la
fijación química, va que es menos lesiva que el calor. Para ello se añade una gota del
fijador, por ejemplo, ácido ósmico, formaldehído, o glutaraldehído, sobre la muestra
líquida con los microorganismos.
Casi todos los colorantes son sales, compuestos formados por iones cargados.
Los colorantes básicos son aquellos en los cuales el agente que tiñe es el ion cargado
positivamente, mientras que en los ácidos, el colorante es el ion cargado negativamente.
Los colorantes más utilizados son los de tipo básico, va que la mayor parte de las
células microbianas Poseen cargas débilmente negativas en su superficie, lo cual facilita
su unión. Entre los colorantes básicos más comunes se encuentran la safranina, la
fucsina básica, el cristal violeta y el azul de metileno. Los colorantes ácidos se unen a
las partes de las células cargadas positivamente. Se utilizan para teñir tejidos animales
infectados con microorganismos. Entre los más frecuentes están la eosina, la fucsina
ácida y el rojo Congo.
Se denomina catáfila a cada una de las hojas modificadas y reducidas que
generalmente protegen a las yemas de la planta que se hallan en reposo, particularmente
en órganos subterráneos de reserva como bulbos y rizomas.
La cebolla
La cebolla es el bulbo subterráneo y comestible que crece en la planta del mismo
nombre. Se trata de una hortaliza de origen asiático cultivada desde 6.000 a.C. Desde
Asia se extendió por Europa, de donde pasó a América. Actualmente existe una amplia
gama de variedades, que pueden clasificarse en función del color del bulbo, forma,
tamaño, usos, origen y precocidad. Tiene muchos usos culinarios, pudiendo usarse de
distintas maneras, ya sea cruda o cocinada. Además se le conocen distintas propiedades
medicinales.
La cebolla pertenece a la familia de las Liliáceas, a la especie Allium cepa. Se
cultiva por el bulbo subterráneo que desarrolla. Este órgano está formado por la base de
las hojas de la planta, que se superponen unas sobre otras y se hinchan. Si se mantiene
un segundo año en campo, la planta emite un tallo de hasta 1metro sobre el que aparece
la inflorescencia, con multitud de flores pequeñas. Es una planta bianual, es decir, su
ciclo dura dos años. Durante el primero forma el bulbo por el que se cultiva, y si se deja
un año más en campo florece.
Su sistema radicular está formado por un gran número de raíces blancas. En la
base del bulbo hay una masa aplastada denominada disco, que se corresponde con el
tallo. Sobre éste se disponen las hojas, formadas por dos partes diferenciadas. La parte
inferior se denomina vaina envolvente. El conjunto de estas vainas forma un órgano
hinchado que se denomina bulbo tunicado, ya que está rodeado por las bases de las
hojas engrosadas y carnosas, envolviéndose totalmente unas sobre otras. Las hojas

4. Actividad experimental
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exteriores son las encargadas de proteger el bulbo, y son las que toman color oscuro. La
parte superior de las hojas es hueca, redondeada y de color verde.
Materiales
 Microscopio óptico • Lugol (colorante)
 Portaobjetos • Pipeta
 Cubreobjetos • H2O
 Cebolla (Catáfila) • Pipeta
 Bisturí • Mechero
 Pinza • Vaso de bohemia
Procedimiento
• Realización del preparado 1:
- Realizar un recorte triangular con el bisturí en la cebolla para retirar la capa
externa
- Extraer una capa fina transversal con la pinza (catáfila)
- Colocar una gota de agua (gotero) sobre el portaobjetos
- Poner la catáfila sobre la gota de agua
- Colocar el cubreobjetos (quitar el aire con la pinza)
- Pasar preparado sobre el mechero para secar
- Observar al microscopio óptico
• Realización del preparado 2:
- Extraer una capa fina transversal con la pinza
- Colocar una gota de agua sobre el portaobjetos
- Poner catáfila sobre la gota de agua
- Con el gotero, colocar Lugol a la muestra
- Luego de determinado tiempo (previamente seleccionado), la muestra se lava
- Colocar el cubreobjetos (quitar el aire)
- Pasar el preparado sobre el mechero para secar
- Observar al microscopio
Observaciones
En el caso del primer preparado podemos encontrarnos con una muestra
incolora, contiene diversas formas indefinidas (células), en las cuales se observan los
límites de algunas de estas más destacados y algunas marcas negras (h2o) dispersas por
este preparado (generalmente puntos).

5. Actividad experimental
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Con respecto al segundo preparado nos encontramos con una muestra más clara
y definida. En este caso, la parte que observamos más oscura es porque la muestra
tomada de la cebolla estaba doblada en uno de sus extremos, lo cual se vio claramente
con el Lugol. En sí se observa lo mismo pero el colorante le da otro contraste a la
catáfila.
Conclusiones
Debemos de tener en cuenta las precauciones necesarias para la utilización del
microscopio.
Se debe extraer una capa muy fina para la correcta observación de la catáfila. En
caso de que no sea así no observaremos lo que se pretende.
El lugol debe de estar sobre la muestra el tiempo necesario para su correcta
absorción.
Como se afirmó en la hipótesis planteada, el Lugol permitió observar con mayor
claridad los componentes de la catáfila.
Es una actividad experimental muy acorde a la escuela y de fácil realización para
los niños. Esto generará asombro en un aula mayoritariamente cuando la muestra se
tiñe.

6. Actividad experimental
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En caso de llevarse al aula, debemos de tener un preparado en caso de que
ninguno de los obtenidos cumpla con las condiciones requeridas para su observación,
teniendo en cuenta que un preparado fresco tiene una duración de 2 o 3 días.
Anexos
Bibliografía
http://www.botanica.cnba.uba.ar
http://es.scribd.com/
http://biologia-lacienciadelavida.blogspot.com/
http://www.frutas-hortalizas.com/