Descargar para leer sin conexión
SESION PRACTICA 6.pptx
- 1.
- 2. ROL DEL LABORATORIOEN EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO - ETIOLÓGICO DE LAS INFECCIONES RESPIRATORIAS ALTAS Y BAJAS 2
- 3. INFECCIONES RESPIRATORIAS ALTAS •Origen viral • Sobreinfección bacteriana • Toma de muestra antes del inicio del tratamiento cuando se sospecha de infección bacteriana. • Cuando hay falla del tratamiento empírico o del tratamiento de elección, o en pacientes con ciertos factores de riesgo. 27/09/2022 3
- 5.
- 6. Influenza A,B,C ...Dx Muestrade nasofaringe (hisopado) Test rápidos: detecta antígeno del virus influencia A,B. NO INDICA LA CEPA. Cultivo celulares RT-PCR A,B Inmunofluorescencia / Inhibición de hemaglutinación (AH1-3 ..antisueros específicos) >4 veces = Infección aguda Pruebas de fijación del complemento Test rápidos por inmunocromatografía – Sensibilidad: 10-70% – Especificidad: 90-95% Inmunofluorescencia S: 80% E: 95-100% Inh hemaglutinación 27/09/2022 6
- 7. FARINGOAMIGDALITIS • Datos clínicos •Muestra biológica: exudado faríngeo • Detección rápida del Ag de estreptococo – S: 85 % / E: 95 % • Patrón “oro”: cultivo • Determinación de anticuerpos (ASLO) – Diagnóstico retrospectivo 27/09/2022 6
- 8. Streptococcus pyogenes EBHGA: característicasmicrobiológicas Portación faríngea (5-25%) Mas de 80 serotipos, transmisión aérea, contacto directo, piel Microscopía: Gram CGPc Cultivo: Colonias B-hemolíticas en AS Susceptibilidad a Bacitracina , Test de Voges Proskauer (VP), test de pirrolidonil aminopeptidasa (PYR), test de CAMP. Factores de Virulencia: Hemolisinas (ASO), DNAsas; Estreptokinasas, Hialuronidasas 27/09/2022 8
- 9.
- 10.
- 11. Sistema de Clasificaciónde Lancefield AG específico de grupo (HC) en la pared celular: – Grupo A ------- Ramnosa-N-acetil glucosamina – Grupo B-------- Ramnosa-glucosamina – Grupo C ------- Ramnosa-N-acetil galactosamina – Grupo D ------- D-alanina y glucosa – Grupo F -- Glucopiranosil-N-acetil galactosamina ESTREPTOCOCOS 27/09/2022 11
- 12. SINUSITIS • Causada principalmente pneumoniae,H. influenzae, M. por bacterias (S. catarrhalis, S. pyogenes, bacterias anaerobias). • Muestra biológica: secreción (aspiración de secreciones nasales, aspiración de meato medio bajo visión endoscópica, punción). • Cultivo: inmunocomprometidos, infecciones nosocomiales, mala respuesta antimicrobiana, complicaciones (meningitis, osteomielitis, celulitis peri orbitaria). 27/09/2022 12
- 13.
- 14. EPIGLOTITIS área • Inflamación del supraglótica,causada por Haemophilus influenzae tipo B (serotipo b) – 90% • Provoca obstrucción severa de la via aérea superior (muerte). el H. • Edad: 2 – 6 años • Clínica: Tóxico. • Vacuna influenzae contra tipo B (HiB), há disminuido su incidencia (niños menores de 5 años). Epiglotis edematosa – “Rojo cereza”
- 15. EPIGLOTITIS • Haemophilus influenzaeserotipo b • Muestra biológica: sangre • Hemocultivos seriados. • Toma de muestras faríngeas o nasofaríngeas contraindicadas. 27/09/2022 15
- 16. OTITIS MEDIA • Bacteriasmás comunes: S. pneumoniae, H. Influenzae no tipificables y Moraxella catarrhails. • Virus: VSR, adenovirus, influenza, rinovirus, parainfluenza, coronavirus Otoscopía: Color, contorno y movilidad. Tímpano abombado, amarillo o rojo, inmóvil, en que la marca de los huesecillos y el reflejo luminoso están distorsionados • Timpanocentesis o miringotomía: secreción ótica, Gram , cultivo. 27/09/2022 16
- 17. Streptococcus pneumoniae: características microbiológicas Portacióntransitoria nasofaríngea, 30% de la población. Gram: DCGP lanceolados Cultivo en AS: colonias - hemolíticas, umbilicadas Susceptibilidad a la optoquina. Solubilidad en bilis. 27/09/2022 17
- 19. Infecciones oculares: clasificación conjuntivitis queratitis endoftalmitis Uveitis/coriorretinitis Infecciones delos anexos oculares 27/09/2022 19
- 20. Infecciones oculares • 1ªcausa de ceguera en el mundo: – Tracoma: – VHS: 6,5 millones 20 casos/100.000/año 27/09/2022 20
- 21. Conjuntivitis Aguda • Infecciosas: –Bacteriana aguda (S. Aureus, S. Epidermidis, S. Pneumoniae, H. influenzae) – Bacteriana hiperaguda (Neiserias) – Infección por Chlamydias – Viral: Adenovirus, enterovirus y coxsackie, HSV I • No infecciosas: Alérgicas, Tóxica, por enf sistémicas, otras…. • Cultivo Muestra: colección de exudado conjuntival. 27/09/2022 21
- 22. Conjuntivitis: diagnóstico microbiológico •Oftalmia neonatorum • Crónicas • Epidemias víricas • Infecciones por Chlamydia CLINICO Hisopado conjuntival suero Chlamydia Tinción de Gram Cultivo bacteriológico IFD: Chlamydia, virus Cultivo de virus autolimitadas 27/09/2022 22
- 23. Queratitis: etiología Rotura dela córnea • Bacteriana – S. aureus, S. pneumoniae – H. influenzae, P . aeruginosa • Vírica – Familia herpes: VHS, VVZ – No herpes: EBV, CMV, adenovirus • Hongos – Fusarium, Aspergillus, levaduras • Parásitos – Acanthamoeba Lentes de contacto*** Colirios crónicos Cirugía ocular Trauma 27/09/2022 23
- 24. Queratitis: diagnóstico clínico Queratitisherpética Lesiones dendríticas Úlcera central por Acanthamoeba Exploración oftalmológica Lesiones típicas 27/09/2022 24
- 25. Lentes de contacto Queratititis:diagnóstico microbiológico Raspado corneal Inoculación directa Medios de cultivo Cultivo bacteriológico Examen directo Tinción de Gram Medio de tranporte Cultivo de parásitos (Biopsia corneal) Cultivo de parásitos 27/09/2022 25
- 26. Uveítis/Coriorretinitis • Etiología – ANTERIOR •VHS, sífilis, TB, B. burgdorferi – POSTERIOR • Toxoplasma, CMV, sífilis, Toxocara • Diagnóstico microbiológico – NO cultivo – Serología: T. pallidum, T. canis – PCR VHS, VZV, CMV, TB 27/09/2022 26
- 27. Infección de losanexos oculares Infecciones palpebrales Flora cutánea S. aureus S. aureus A. israelii, anaerobios Sistema lagrimal Dacrioadenitis Canaliculitis Tinción de Gram Cultivo 27/09/2022 27
- 28. DIAGNÓSTICO ETIOLÓGICO DE TUBERCULOSISPULMONAR 27/09/2022 28
- 29. CASO CLÍNICO • Mujerde 26 años, llega a la Emergencia con hemoptisis y fatiga. • Pérdida de peso 10 kg en 12 meses. • Tos por más de 3 meses con esputo hemoptoico. • Fiebre y sudoración nocturna. • Niega disnea y dolor torácico. 27/09/2022 29
- 30. FASE PRE-ANALÍTICA • Indicaciones. •Toma de muestra. • Transporte. 27/09/2022 30
- 31. TOMA DE MUESTRA •Tuberculosis pulmonar: – Esputo • https://www.youtube.com/watch?v=92dT_1kbbek – Aspirado/lavado bronquioalveolar • https://www.youtube.com/watch?v=PAEguckhbIM • Tuberculosis extra pulmonar: – Jugo gástrico – Orina – Otros fluidos 27/09/2022 31
- 32. FASE ANALÍTICA • Diagnósticopresuntivo 27/09/2022 32
- 33. PRE TRATAMIENTO DELA MUESTRA • Estéril – Centrifugar – sedimento • No estéril – Licuefacción (N-acetil-L-cisteína). – Decontaminación (NaOH). – Neutralización (buffer o H2O). – Centrifugación. 27/09/2022 33
- 34. TINCIÓN ZIEHL NEELSEN •Tinción utilizada para identificar micobacterias – Carbolfucsina ó fucsina fenicada – Alcohol ácido – Azul de metileno 27/09/2022 34
- 37. FUNDAMENTO DE LATINCIÓN (1) • La ácido-alcohol resistencia de los bacilos propiedad micobacterias de captar en (BAAR), es la que tienen las su pared fucsina fenicada (de color fucsia) o auramina (amarillo fluorescente) y retenerla aun con la acción de decolorantes, como la mezcla de ácido y alcohol. 27/09/2022 37
- 38. RESULTADO DE LACOLORACIÓN 27/09/2022 39
- 39.
- 40. TINCIÓN KINYOUN • Coloraciónen frío • Agente tensoactivo • Fenol en alta concentración en la carbolfucsina (Aumenta la permeabilidad del colorante). • Alcohol ácido. • Azul de metileno. 27/09/2022 41
- 41. TINCIÓN AURAMINA RODAMINA •Los ácidos micólicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad por los fluorocromos auramina y rodamina (naranja rojo) • Alcohol ácido. • Permanganato de potasio (Evita la fluorescencia inespecífica) • Microscopio de fluorescencia. 27/09/2022 42
- 42. PRUEBA DE TUBERCULINA- PPD • Derivado proteico purificado de tuberculina • Hipersensibilidad retardada (tipo IV). • Intradérmica 0.01 ml(prueba cutánea de Mantoux). • Lectura: 48-72 horas – Induración y eritema – > de 5 mm. 27/09/2022 43
- 43. SEROLOGÍA • QUANTIFERON-TB Goldassay. • Mide la respuesta inmune celular a Ag M. tuberculosis en sangre. – Péptidos secretados por micobacterias. • Early secreted antigenic target 6 (ESAT-6) • Culture filtrate protein 10 (CFP-10): Antogebo que contribuye a la virulencia. • TB 7.7 – IFN γ. • Detecta infección latente. 27/09/2022 44
- 44.
- 45. CULTIVO • Agar LowensteinJensen • Agar Middlebrook 7H11 • Caldo Middlebrook 7H9 27/09/2022 46 Aislamiento y cultivo de micobacterias. El medio de agar profundo en tubo se utiliza para la prueba semicuantitativa de catalasa para facilitar la clasificación de micobacteria
- 46. LECTURA DE COLONIASCARACTERÍSTICAS 27/09/2022 47
- 47. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARALA IDENTIFICACIÓN OTRAS PRUEBAS: -Hidrólisis Tween 80 - Reducción de telurito de potasio - Arilsulfatasa Inhibición de crecimiento por TCH ((hidracida del ácido tiofeno-2-carboxílico). 27/09/2022 48
- 48. RESISTENCIA A LOSANTIMICOBACTERIANOS • TB sensible • TB resistente • TB multidrogorresistente }( MDR) • TB panrresistente 27/09/2022 49
- 49. DETECCIÓN DE MULTIDROGORRESISTENCIA •METODO MODS 27/09/2022 50 - cultivo directo de muestras de esputo en medio líquido, que detecta Mycobacterium tuberculosis y evalúa la susceptibilidad frente a isoniacida y rifampicina directamente de dichas muestra
- 50.
- 51. DETECCIÓN DE MULTIDROGORRESISTENCIA •POR BACTEC MGIT 960 27/09/2022 52
- 52. DETECCIÓN DE MULTIDROGORRESISTENCIA •POR MICOBACTERIOFAGOS 27/09/2022 53
- 53. DETECCIÓN DE MULTIDROGORRESISTENCIA •POR PC REAL TIME 27/09/2022 54
Notas del editor
- #3 El sistema respiratorio se divide arbitrariamente en vías altas o superiores, que comprenden las áreas anatómicas anteriores a la laringe (incluyendo la nasofaringe, orofaringe, laringe, epiglotis, oído externo y medio, y los senos paranasales), y vías bajas o inferiores que incluyen todas las estructuras posteriores a la laringe. En ocasiones es difícil separar la etiología y la clínica en muchos de estos procesos que finalmente acaban involucrando a ambas áreas, y comportándose en la práctica como un único cuadro microbiológico y clínico.
- #4 La microbiota orofaríngea normal está formada principalmente por cocos grampositivos. La colonización de la orofaringe por bacilos gramnegativos se observa en menos del 10% de los individuos sanos, aumenta con hospitalizaciones prolongadas y alcanza el 60-75% en enfermos críticos ingresados en unidades especiales.
- #6 Los virus influenza pertenecen a la familia Orthomyxoviridae. Se conocen 3 serotipos: Influenza A, Influenza B e Influenza C, siendo el primero el más importante como causa de enfermedad3. Son virus envueltos, con un genoma de ARN segmentado de polaridad negativa.
- #7 - PROMO MIX 1 - SALADO 4
- #8 Motivo de consulta ambulatoria, es u proceso inflamatorio de la mucosa y extructuras del área faringoamigdalina, caracterizada x dolor de garganta, fiebvre, exudado, ulceras. Un cultivo de exudado faríngeo, o prueba estreptocócica, se hace frotando la garganta con un hisopo para detectar la presencia de bacterias de Streptococcus del grupo A, la causa más frecuente de la faringitis estreptocócica. La antiestreptolisina O es un examen de sangre para medir los anticuerpos contra estreptolisina O (ASO, por sus siglas en inglés), una sustancia producida por la bacteria estreptococo del grupo A.
- #9 ¿Qué es el EbhGA? EbhGA: estreptococo beta hemolítico del grupo A; FAA: faringoamigdalitis aguda. Son sugestivos de origen estreptocócico el dolor de garganta de comienzo brusco, la fiebre, el malestar general y la cefalea; también lo son el dolor abdominal, las náuseas y los vómitos, especialmente en los niños más pequeños.
- #12 La clasificación de los estreptococos de Lancefield se basa en las reacciones serológicas de los carbohidratos de la pared celular de la bacteria, es decir, en la distinta naturaleza antigénica de los polisacáridos de la pared. Es un método muy útil para clasificar a muchos de los estreptococos patógenos, pero no tanto para el resto. Los antígenos de Lancefield son llamados con letras desde la A hasta la W, con la excepción de la I y la J. Estos antígenos de grupo se pueden demostrar mediante sencillos métodos como la precipitación, aglutinación o anticuerpos marcados
- #16 Muestra biológica: Sangre : Hemocultivos seriados (HiB), PCR. Estudios serológicos: detección Ag capsular de Hib (orina) Toma de muestras faríngeas o nasofaríngeas contraindicadas.
- #17 Presencia de liquido (mucoso, exudado o mixto) en la cavidad media del oído asociado a síntomas y signos agudos. Se produce x la obstrucción de la tropa de eustaqui, facilitando entrada de M.O
- #18 DIPLOCOCO GRAM POSITIVO LACEOLADO ( DCGP L)
- #19 Estas enzimas producen cambios visibles en las placas de agar sangre: – Hemólisis alfa: Zona de hemólisis incompleta de los eritrocitos con formación de un halo verdoso alrededor de la colonia. – Hemólisis beta: Zona de hemólisis completa de los eritrocitos y reducción de la hemoglobina con formación de un halo transparente o claro alrededor de la colonia. – Ausencia de hemólisis o hemólisis gamma: Ausencia de daño de los eritrocitos
- #21 El tracoma es una enfermedad ocular que resulta de la infección por Chlamydia trachomatis, una bacteria. La conjuntivitis por virus herpes simple (VHS)
- #23 la inmunofluorescencia directa (IFD) para el diagnóstico de C. trachomatis en relación con el cultivo celular.
- #30 Debido al fenómeno fisiológico de la ventilación, el pulmón y las vías aéreas están continuamente expuestos a microorganismos ambientales que, en ocasiones, alteran o superan las barreras anatómicas naturales con las que cuenta el sistema respiratorio.
- #32 El estudio microbiológico del esputo es un tema controversial ya que muchos autores lo consideran de valor nulo o muy escaso, mientras que otros sostienen que puede que puede brindar información muy útil si se toman medidas adecuadas para su recolección. – El correcto estudio del esputo puede ayudar al diagnóstico de infecciones tales como la neumonía, la bronquitis crónica y la tuberculosis pulmonar. Excepto Mycobacterium tuberculosis, prácticamente todos los patógenos pulmonares pueden aislarse del tracto respiratorio superior de individuos sanos, por lo que su presencia en escasa cantidad en el esputo no es, pues, evidencia de que estén causando una infección.
- #35 a coloración clásica de Ziehl-Neelsen se basa en el calentamiento inicial que permite aumentar tanto la energía cinética de las moléculas del colorante (fuscina de Ziehl Nielsen), como alcanzar rompimiento de las estructuras cristalinas de las ceras, favoreciendo así el ingreso del colorante a la pared bacteriana y al interior de la célula. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, se provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos (ceras) de modo que el colorante queda atrapado dentro de dichas estructuras cristalinas y ya no puede salir de las bacterias 39,45.
- #36 Todas las bacterias se tiñen con el colorante fucsina en presencia de calor. Sin embargo, la mayoría de las bacterias se decoloran después del tratamiento con etanol/HCl, excepto las micobacterias y géneros relacionados que resisten al tratamiento decolorante y retienen al colorante. Esta ácido alcohol resistencia se debe al alto contenido de sustancias hidrofóbicas (ácidos micólicos) en la pared celular.
- #37 Es una tinción diferencial utilizada para la identificación de bacterias que cuentan con la propiedad fisicoquímica de ser ácidos alcoholes resistentes (BAAR); y por lo tanto, no son reactivas con la fuscina básica. Un ejemplo lo constituye el género Mycobacterium. La pared de estas bacterias está constituida por péptidoglicano unido mediante enlaces covalentes a un polímero de ácidos micólicos que a su vez se asocian a unidades de azúcar como galactosa-arabinosa. A este tipo de macromoléculas se les ha asignado el nombre general de “arabinogalactano”, el cual debido al tamaño y al efecto estérico le confiere carácter hidrofóbico a la bacteria.
- #42 La tinción de Kinyoun es una variante de la tinción clásica de Ziehl-Neelsen que utiliza como colorante primario Fucsina básica con fenol a concentraciones altas, lo que permite la coloración en frío, mientras que la tinción clásica de Ziehl-Neelsen precisa la utilización de calor en la etapa de la coloración primaria
- #43 Rodamina-auramina Los ácidos micólicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad por los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El permanganato de potasio (KMnO4), empleado como contraste, evita la fluorescencia inespecífica.
- #44 se hace inyectando 0.1 ml de un derivado proteico purificado de tuberculina (PPD, por sus siglas en inglés) en la cara anterior del antebrazo