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INTEGRANTES:
● Arce Mary
● Chipana Sergio
● Leiva Mirella
● Molleda Shantall
● Rodas Brenda
● Vidal Alessandra
● Vigo Lizbeth
Generalidades de los hongos
● Células eucariotas con núcleo
● Organelas como: mitocondria, retículo
endoplasmático
● Membrana citoplásmica presenta
esteroles característicos (ergosterol),
la pared celular -> glucanos
específicos y quitina.
● Tratamiento de las micosis: se usan
antifúngicos.
● En los hongos con relevancia clínica,
la reproducción asexual es eficaz y
frecuente.
Mohos u hongos filamentosos: el
género Aspergillus.
Hongos levaduriformes:Candida
albicans.
Son unidades anatómicas y de crecimiento: la hifa, en hongos pluricelulares, y la
levadura, en hongos unicelulares
● Las hifas: estructuras cilíndricas, cenocíticas (aseptadas) o tabicadas (con septos),
generalmente multinucleadas. Crecen por el ápice (elongación) y pueden hacerlo
en cualquier dirección, incluso dentro del sustrato. Conjunto de hifas: micelio y
cuando alcanzan cierto tamaño se dice que forma colonias.
● Las levaduras: tiene diversas formas, esférica, ovoide, elipsoidal y cilíndrica; crecen
de forma isodiamétrica (por todos lados) constituyendo la parte vegetativa y en
poco tiempo se reproducen asexualmente por gemación, fisión binaria o
fragmentación. Algunas levaduras forman cadenas, estructuras a las que se
denomina seudohifas, conjunto de varias de ellas: seudomicelio. Las colonias son
poco elevadas y de consistencia suave, cremosa, y su color oscila, en general,
entre el blanco – amarillo, aunque algunas contienen pigmentos carotenoides.
En la Micología Médica se consideran los hongos dimórficos. En estos casos, se
identifica una forma infectiva ( en naturaleza), y una forma parasitaria ( en hospedero).
Morfología
Estructura de una levaduras
Estructura de una hifa
● Los factores de virulencia serán aquellas “propiedades”,
generalmente moléculas, que permiten al hongo causar daño o
enfermedad en quien lo hospeda.
● El desarrollo de tales factores, comienza por estímulos externos a la
célula fúngica.
● Esos estímulos activan cascadas de señalización que provocan
compuestos protectores (p. ej: enzimas, determinantes antigénicos,
receptores), causantes a su vez del desarrollo de la patogénesis.
● Existe una compleja red de interacciones que incluyen la
participación de muchas moléculas, tanto por parte del huésped
como del hongo, que permiten la expresión de diversas vías; el
resultado de esa interacción, será evaluado (enfermedad o no)
según el nivel de daño causado en el huésped.
Factores de virulencia
● De las más de 500.00 especies de hongos, 250
son capaces de producir enfermedad en
humanos.
Identificación de hongos
Factores:
1) El tropismo
2) La situación
inmunitaria del huésped
La micosis en:
● El paciente
inmunocompetente
● El paciente
inmunodeprimido
● Mediante cultivo
del material infectado.
● Medios de cultivo
adecuados, como:
agar Sabouraud, agar
patata-dextrosa.
● Características macroscópicas de las colonias (pigmento,
aspecto, velocidad de crecimiento, etc.) y microscópicas
(esporas,estructuras especiales, etc.).
● Mayor avance en la identificación de hongos oportunistas:
amplificación de genes conservados por medio de PCR, y su
posterior secuenciación.
● Se puede observar los hongos directamente a partir del
material infectado.
● La tinción con calcoflúor: observar con gran seguridad
elementos fúngicos en preparaciones en fresco pero requiere
de un microscopio de fluorescencia.
● La presencia de hongos en tejidos (biopsias): tinciones
específicas como PAS, plata metenamina u otras.
Tinción con blanco de calcoflúor de B dermatitidis
Tinción con blanco de calcoflúor de una
pitiriasis versicolor
Microscopía de dermatofitos en
escamas de piel en una preparación tratada con
KOH al 10%.
Tipos de micosis
● Principal grupo: DERMATÓFITOS, tienen tropismo
especial por el tej. queratinizado.
● Especies: antropofílicas, geofílicas y zoofílicas.
● Transmisión: contacto directo, fomites, medios
contaminados.
● Géneros de hongos dermatófitos: Trichophyton,
Microsporum y Epidermophyton.
Micosis superficiales
Tratamiento: antifúngicos tópicos u
orales
Tinea capitis
Onicomicosis
Tinea pedis
Tinea corporis
Tinea cruris
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
-En examen microscopico de muestras de raspado de piel tratadas con
(KOH 10 -20 %).
-Se detectan con cortes teñidos con H-E.
-Se introducen las muestras de raspado de piel en medios micologicos con
antibioticos cuando se haya detectado la presencia de elementos fungicos en
dichas muestras.
-En 3 semanas aparecen una colonia dermatiacea.
TRATAMIENTO
-Tratamiento tópico con :
pomada de Whitfield.
Azoles.
Terbinafina .
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
Cuando el examen microscópico revele la presencia de hi-
fas, artroconidios y/o células levaduriformes en gemación,
se introducirá el cabello infectado en medios micológicos
carentes de cicloheximida (que inhibe la proliferación de los
hongos del género Trichosporon .Las especies de este género
forman colonias arrugadas secas de color crema a lo largo de
un período de incubación de 48 a 72 horas a temperatura
ambiente. Las distintas especies de Trichosporon
se identifican de manera semejante a las cepas de levaduras.
Se deben llevar a cabo pruebas bioquímicas de asimilación de
carbohidratos,asimilación de nitrato potásico (KNO 3
(negativa), produción de ureasa (positiva) y morfología en
agar harina de maíz.
TRATAMIENTO
El tratamiento se compone de azoles tópicos.
La mejora de las medidas higiénicas ,
El afeitado del cabello afectado también son eficaces y suelen obviar la necesidad
de un tratamiento farmacológico.
DERMATOFITOSIS
La dermatofitosis ( Tiña. Tinea) es una infección superficial de la piel ocasionada
por hongos queratinofílicos que afectan estructuras que contienen queratina: piel,
pelo y uñas.
❖ Son hongos filamentosos pluricelulares.
❖ Potencialmente patógenos para hombres y animales.
❖ Capacidad de adaptación a las condiciones ambientales diversas.
❖ Capacidad para parasitar las estructuras queratinizadas
❖ Reciben el nombre de hongos queratinofílicos.
❖ No afectan las mucosas ni semimucosas.
❖ Afectan a cualquier persona (edad, sexo, raza)
Géneros
Piel y pelo
Piel, uñas y pelos
Piel y uñas
Trichophyton
Microsporum
Epidermophyton
Clasificación
De acuerdo al hábitat natural
Antropofílicos
Zoofílicos
Geofílicos
Afectan exclusivamente al ser humano. Se transmite de ser
humano a ser humano directamente o indirectamente por fómites.
Usualmente afectan animales, pero también puede afectar al ser
humano, la transmisión puede ocurrir por contacto directo con el
animal infectado o indirectamente.
Tienen su hábitat en el suelo, en especial en restos de queratina
que caen en el suelo y están en proceso de descomposición y son
fuente de infección para los humanos y animales.
Diagnóstico de las infecciones micóticas
superficiales.
★ Examen de luz de Wood
★ Procedimientos micológicos
■ Examen microscópico directo
■ Procedimiento de cultivo
Factores predisponentes.
❖ Clima
❖ Malos hábitos de higiene.
❖ Hacinamiento.
❖ Calzado
❖ Ropa sintética.
❖ Traumatismos.
❖ Diabetes
❖ Corticoides.
❖ Prácticas deportivas.
❖ Infecciones por HIV
Tiña Capitis
Tiña de la cabeza es una infección del cuero
cabelludo, pelo y anexos (cejas o pestañas)
causadas por las especies del género
Trichophyton y Microsporum, caracterizada
por placas eritematosas, escamosas y
tonsurantes.
Diagnóstico
El examen con lámpara de Wood
El examen micológico directo de raspado de la lesión aclarada con hidróxido de
potasio al 10% a 20% permite observar hifas septadas (dermatofitosis), esporas
dentro (endothrix) o fuera (extothrix) del tallo piloso.
Cultivo para identificar la especie se utilizan medios de agar glucosado. El medio de
Sabouraud con antibióticos y antifúngicos que inhiben el crecimiento de las
especies contaminantes permite identificar la mayoría de las especies que
producen tiña capitis.
Tiña de la cara
La tiña de la cara ( Tiña facial, tiña faciei, tiña faciale), es una infección superficial
por dermatofitos limitada a la piel glabra de la cara.
La infección se adquiere con frecuencia de las mascotas del hogar infectadas
habitualmente, pero la autoinoculación a partir de otro foco (tiña capitis, tiña
corporis y tiña pedis) también es posible. Los dermatofitos liberan varias enzimas,
incluyendo queratinasas, que les permiten invadir el estrato córneo de la
epidermis.
Tiña del cuerpo
La tiña del cuerpo (tiña corporis, tiña circinada, herpes circinado, tiña de la piel
lampiña), es la infección superficial de la piel lampiña ( glabra, sin pelo), tórax,
abdomen y miembros por dermatofitos, excepto las ingles, palmas y plantas.
Los agentes causales más frecuentemente implicados son: M. canis, T. rubrum y
T. mentagrophytes. Menos frecuentemente M. audouinii, T. verrucosum, T.
tonsuran y E. floccosum
Debido a que los signos clínicos son variables, en muchos casos de tiña corporis,
el clínico a menudo debe basarse en los hallazgos de laboratorio para establecer
el diagnóstico correcto..
Tratamiento
En el caso de lesiones aisladas, la medicación tópica sola es muy eficaz. Se
emplean los agentes imidazólicos tópicos, la terbinafina tópica o la amorolfina
tópica. En caso de lesiones más diseminadas o inflamatorias se utilizan la
grisiofulvina, terbinafina, itraconazol, fluconazol o ketoconazol vía oral.
Tiña de la ingle
Es una infección dermatofítica de la región inguinal e incluye las infecciones de
los genitales, la región pubiana y la piel de las zonas perineal y perianal producida
por hongos dermatofitos.
Los agentes etiológicos involucrados incluyen T. rubrum, mentagrophytes, E.
floccosum, T. y menos frecuentemente T. tonsuran, M. canis, T. verrucosum, y M.
gypseum; pero puede haber variaciones regionales
Diagnóstico
● El examen micológico directo
● Cultivo para identificar la especie
● La luz de Wood
Tratamiento
Las tiña de la ingle responden a los antimicóticos tópicos, principalmente a los
derivados azólicos.
En casos rebeldes y extensos se puede recurrir a la griseofulvina 500 a 1000
mg/día en una a dos tomas por4a6 semanas.
Como alternativas se pueden emplear itraconazol 200 mg/día por2a4 semanas,
terbinafina 250 mg/día por 4 semanas
Tiña de los pies
Es una infección dermatofítica superficial que afecta los pies, sobre todo los
pliegues interdigitales, plantas y esporádicamente el dorso,evolucionando en
forma crónica, muchas veces subclínica con brotes irregulares y prurito de
intensidad variable.
Los agentes causales más frecuentes son el T. rubrum, T. mentagrophytes ,
epidermophyton floccosum y T. mentagrophytes var. Interddigitale. Habitualmente
puede haber colonización de bacterias grampositivoas, gramnegativas y cándida.
El tratamiento de la tiña pedis es fundamentalmente tópico, según la forma clínica
de presentación; y el tratamiento sistémico es excepcional. Además se debe
corregir los factores predisponentes, uso diario de polvos antifúngicos.
Tiña de manos
La tiña de las manos (Tiña manuum), es una dermatofitosis superficial de la piel
de las manos (palma y dorso de manos), causadas generalmente por especies de
trichophyton.
El agente causal más frecuente es el T. rubrum. En la forma hiperqueratósica
pueden hallarse además del T. rubrum, T. mentagrophytes var. Interdigitale, E.
floccosum.
Las formas inflamatorias son causadas por especies geofílicas y zoofílicas como:
T. verrucosum (ganado), M. canis (perro, gato) y M. gypseum (suelo).
El diagnóstico clínico se debe confirmar mediante el examen micológico, directo,
cultivo e identificación de especie en microcultivo. El examen directo con KOH es
útil como primer método para iniciar el tratamiento antifúngico temprano.
Tiña ungueal
La tiña de las uñas (tiña
ungueal, onicomicosis
dermatofítica), es la infección de
las uñas de los pies y la mano
producida por dermatofitos.
Los dermatofitos más
comúnmente aislados son T.
rubrum (85%), T.
mentagrophytes (10%), y
excepcionalmente se aíslan T.
tonsurans, M. gypseum y M.
canis.
● Afectan a planos más profundos de la piel.
● La más frecuente: la esporotricosis, causada
principalmente por el hongo dimórfico Sporothrix
schenckii.
● Los micetomas son micosis producidas por hongos
que invaden el tejido celular subcutáneo. Son
comunes en países tropicales, aunque
excepcionales en nuestro medio.
.
Micosis subcutáneas
Tratamiento: por vía oral,
normalmente de 2-4 semanas, se
puede extender de 3 - 6 meses.
Rinosporidiosis
Cromomicosis
Esporotricosis
● Micosis que afectan a órganos profundos.
● Las principales micosis sistémicas: hongos dimórficos y
se denominan también micosis regionales por ser típicas
casi exclusivamente del continente americano.
● En pacientes inmunodeprimidos se producen formas
clínicas diseminadas que requieren tratamiento
antifúngico.
Micosis sistémicas o profundas
Coccidioidomicosis
Cryptococcus neoformans Blastomicosis
Histoplasmosis
Paracoccidioidocosis
Cryptococcus gattii
Tratamiento: Itraconazol (enfermedad leve o
moderada) , Fluconazol (como alternativa), Anfotericina
B y Azoles(para infección diseminada) *Anfotericina B
para la enfermedad meníngea (potencialmente mortal).
Candidiasis
● Levaduras del género Candida, siendo
Candida albicans la especie más
frecuente
● Puede localizarse en la mucosa oral
(muguet),vaginal, esofágica, etc.
● Candidiasis invasoras: invasión a órganos
profundos. Meningitis, bronconeumonía y
candidemia son las manifestaciones más
frecuentes.
Micosis oportunistas
Tratamiento para la candidiasis
invasoras: azoles (fluconazol,
voriconazol), anfotericina B o
cualquiera de las tres equinocandinas.
Aspergilosis
● Forma clínica muy grave causada por distintas especies del
moho Aspergillus ---> Aspergillus fumigatus la especie
responsable de más del 80% de casos
● La enfermedad más frecuente es la pulmonar,
● Sobre todo en pacientes profundamente inmunodeprimidos,
Aspergillus puede diseminarse a otros órganos,destacando
el SNC
● Aspergilosis invasiva: Enfermos inmunodeprimidos
● Aspergilosis semiinvasiva: Personas tratadas prolongadamente
con corticoides en pacientes con enfermedad pulmonar
obstructiva crónica, con artritis reumatoide entre otras.
● El diagnóstico de la aspergilosis pulmonar (y de otras
micosis invasivas) puede ser extraordinariamente difícil.
● Galactomanano, componente celular casi exclusivo de
Aspergillus.
Mucormicosis
● Se trata de una micosis filamentosa causada por
hongos de géneros del orden Mucorales, entre los
que destacan Mucor,Rhizopus, Rhizomucor y Absidia.
● Una forma común de presentación clínica de esta
infección es la mucormicosis rinocerebral.
● La mucormicosis puede presentarse también como
una infección pulmonar, e incluso diseminarse a otros
órganos.
● La mucormicosis de herida también puede aparecer en
individuos inmunocompetentes.
Mucormicosis
rinocerebral
Tratamiento para la aspergilosis
o mucormicosis:
Los antifúngicos más utilizados
son la anfotericina B y los nuevos
triazoles, entre los
que destacan voriconazol y
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Diagnóstico microscópica directa
Candidiasis: La infección invasora por C. albicans
puede sospecharse en preparaciones histológicas
teñidas con PAS o Platametenamina. Aumento de
la sensibilidad de estas técnicas con: la utilización
de fluorocromos como el Blanco de Calcoflúor, el
Blankophor P y el Rojo Congo
Criptococosis: La elección de la técnica de
visualización empleada (microscopía directa, tinta
china o Calcoflúor) varía según la experiencia del
observador, pero sin olvidar que la detección de
antígeno es mucho más sensible.
Aspergilosis: Aunque las muestras clínicas del
tracto respiratorio más frecuentes son los esputos,
las que presentan una mayor rentabilidad
diagnóstica son las obtenidas mediante
fibrobroncoscopia, como el LBA
El hidróxido de potasio es un medio de montaje de las muestras clínicas,
compuesto químico inorgánico de base fuerte y común, a la solución de KOH se
le puede añadir Glicerol, DMSO o algún colorante. Se usa de manera
complementaria para diagnosticar micosis, detección de bacterias gram negativas
y enfermedades vulvo/vaginales.
Técnicas de microscopía con campo brillante: KOH
FUNDAMENTOS DE KOH
. Es el medio de montaje de muestras más aceptado
. Disuelve rápido los elementos celulares permitiendo observar los hongos
. El efecto clarificador puede demorar 10 minutos o 1 hora en muestras de uñas y
puede reducir el tiempo calentando la muestra
. Se usan 2 concentraciones: una fuerte para las uñas del 20-30% y una suave
del 10-15% para las otras muestras.
Desventajas del KOH:
La principal desventaja es su reacción con la muestra pueden crear formas
parecidas a los hongos lo cual puede causar confusión y errores en los resultados
Fundamentos de KOH
KOH examen directo para
diagnóstico de micosis
KOH Glicerol KOH - Dimetilsulfóxido
KOH - Colorante de Cobre
(tinta Parker)
KOH Blanco de Calcofluor
KOH Azul Algodón de
Lactofenol
La tinción negativa se usa para la detección de la cápsula extracelular de algunos
hongos se utilizan suspensiones coloidales de partículas de carbón, su fin es teñir
el fondo y dejar las bacterias incoloras. Las más utilizadas son la Tinta China y la
Nigrosina.
Desventajas:
Los problemas con esta técnica tienen, sobre todo, que ver con la experiencia del
observador, ya que existen numerosos artefactos (hematíes, burbujas de aire,
leucocitos, partículas de talco y gotas de grasa) que pueden confundir al
observador y dar un diagnóstico erróneo.
Tinción negativa
tinción tinta china
Se usa tinta china para teñir el fondo de color oscuro y dejar incoloras a las
bacterias, es usada para observar S. pneumoniae y Cryptococcus neoformans en
LCR.
tinción nigrosina
Similar a la tinción tinta china, se usa para teñir el fondo y dejar incolora a las
bacterias y poder observar su cápsula, esporas, bacterias flageladas y bacterias
difíciles de teñir como los espirilos.
tinción gram
Método de tinción más usado, en los hongos se usa para ver detalles que no se
ven en otras tinciones, se usa para determinar si una bacteria es gram negativa o
positiva en varios tipos de microbios
Tinción gram
Tinción Nigrosina
Tinción tinta China
Microscopía de Fluorescencia
PRIMARIA O NATURAL SECUNDARIA
-Los hongos tienen la capacidad de emitir radiación tras ser
irradiados con luz UV, pero la debilidad de
esta fluorescencia natural la hacen inútil desde el
punto de vista del diagnóstico práctico.
-Importante autofluorescencia en algunos hongos incluidos
en parafina y teñidos con hematoxilina-eosina y de P.
jiroveci en preparaciones teñidas con Papanicolaou
-Se basan en la visualización de objetos no
fluorescentes tras marcado con moléculas
fluorescentes.
-Cambio radical en el escenario de su implicación en
el diagnóstico micológico,ya que los fluorocromos
son herramientas de cribado ideales que permiten
una visualización inmediata de las dianas
fluorescentes, contra un fondo oscuro.
QUIMIOFLUORESCENCIA
Marca de modo general las estructuras fúngicas (naranja de acridina,
rojo Congo y agentes blanqueantes)
NARANJA DE ACRIDINA
Reactivo
Procedimiento
-El fluorocromo se liga a macromoléculas polianiónicas,
como los mucopolisacáridos y los ácidos nucleicos.
-En función de la dilución empleada, se
puede resaltar la fluorescencia de la pared celular
(diluciones bajas) o de las estructuras intracitoplasmáticas
(altas diluciones).
-Una solución stock 1 % p/v de Naranja de
Acridina en
agua destilada.
-Se puede almacenar en la oscuridad a 4 ºC
hasta 6 meses.
-La solución se prepara, añadiendo 0,5 ml de la
solución stock a 5 ml de un tampón acetato.
-Se fija con metanol o calor.
-Teñir el frotis con solución de trabajo durante 2
min, lavar con agua y dejar secar.
-Observar inmediatamente con microscopio de
fluorescencia con los filtros habituales
de Inmunofluorescencia y Auramina
-Las bacterias y los hongos se tiñen de color
naranja y los núcleos de los leucocitos se tiñen
de color verde.
ROJO CONGO
Este fluorocromo se empezó a utilizar para la detección de celulosa en cereales
y, en histopatología, para la detección de amiloide.
AGENTES BLANQUEADORES
-Son compuestos orgánicos heterocíclicos que en solución
o aplicados a un sustrato, absorben la radiación en el
ultravioleta cercano (350 nm) y emiten la mayoría de la
energía absorbida en la región azul del espectro visible
(430 nm).
-Presentan una peculiar y gran afinidad por polisacáridos
constituidos por uniones beta-glucosídicas (glucanos,
quitina, celulosa) presentes en los hongos y otros
organismos, pero ausentes en los tejidos de mamíferos
TINCIÓN DE
RECOMENDACIÓN:
- ABF
- Sistema de iluminación
- Sistema de filtros
INMUNOFLUORESCENCIA
● En la IFD el antígeno se expone directamente al
anticuerpo fluorescente durante un tiempo adecuado,
luego se lava y se observa al microscopio de
fluorescencia.
● En la IFI la presencia de un antígeno se revela primero por
su exposición a anticuerpos no marcados, luego se lava y
se marcan estos con anti-anticuerpos conjugados a FITC,
se lava de nuevo y se examina al microscopio de
fluorescencia.
● Las células fúngicas que expresan el antígeno reconocido
por el anticuerpo monoclonal utilizado presentarán
fluorescencia amarillo-verde.
*Esta técnica puede utilizarse en combinación con la
tinción con quimio fluorescentes
Tinciones para Pneumocystis jiroveci
Preparación de la muestra Clasificación
1. Tinciones de formas tróficas (trofozoitos)
Tinciones Romanowsky-Giemsa o alguna modificación más
rápida como el Diff-Quik (< 5 min) que tiñen P. jiroveci y otros
hongos,Cryptococcus e Histoplasma, así como protozoos.
2. Tinciones de la pared quística
Tinciones Argénticas, Azul de Toluidina O y Tinciones con
Quimio Fluorescentes que tiñen los engrosamientos de la
pared en forma de doble coma que los caracteriza y facilita su
detección.
3. Tinciones Inmunofluorescentes
Tiñen las formas tróficas y los quistes.Su mayor utilidad es
cuando no se dispone de la muestra más idónea (Ej. esputo
inducido) o cuando el número de organismos
sea bajo, como en la neumocistosis extrapulmonar.
Tinción rápida de Giemsa
1. Se añaden 1 ó 2 gotas de la solución roja
(solución 1) sobre la muestra, se deja actuar
durante 10 segundos y se escurre.
2. Se añaden 1 ó 2 gotas de la solución azul
(solución 2), se deja durante 10 segundos, se
escurre y se lava muy ligeramente con agua
desionizada.
3. Se deja secar y se procede a la
observación de la muestra.
Se pueden utilizar técnicas comerciales como
Diff-Quik o Giemsa Plus.
Azul Toluidina O modificada
1. Fijación con etanol absoluto durante 1 min y
secado al aire.
2. Cubrir 10 min con reactivo de sulfatación.
3. Escurrir, lavar 5 min con agua corriente.
4. Teñir con la solución de ATO durante 3 min.
5. Inmersión en etanol 95% unos segundos
hasta que deje de escurrir colorante azul (10
segundos).
6. Inmersión en etanol 100% durante 10
segundos.
7. Inmersión en xilol durante 10 segundos.
8. Montaje con Permount.
Tinción con quimiofluorescentes Tinciones con anticuerpos
Permite reconocer fácilmente, y a muy bajos
aumentos (x100), el
material eosinofílico esponjoso y los quistes
característicos.
Técnica
1. Teñir las extensiones con la
solución de trabajo
de CW durante 1-3 min.
2. Lavar con agua y montar.
Escasa sensibilidad
cuando el hongo se
encuentra en una baja
concentración
MonofluoTM Kit P.
carinii (Bio-Rad)
Mediante anticuerpos
monoclonales que
reaccionan específicamente
con antígenos de la pared
del quiste y de las formas
tróficas de P. jiroveci
SEROLÓGICA
CRIPTOCOCOSIS :
● LCR
● tiempo de prueba 10-15min
● requiere varios por tener
crecimiento lento
● 2 técnicas : Cualitativa y
cuantitativa
CANDIDIASIS :
● método de detección:
Platelia Candida Ag
● Es un ELISA que detecta
manano en suero utilizando
el anticuerpo monoclonal
EBCA1.
● El límite de detección de la
prueba es 0,25 ng/ml de
suero.
ASPERGILOSIS:
● Platelia Aspergillus EIA
● una especificidad del 89,6%
y una sensibilidad del 87,5%
● + antes de que aparezca la
sintomatología clínica
● El límite de detección de la
prueba es 1 ng/ml de suero
BIBLIOGRAFÍAS:
1. Sanchez, L., Matos, R. y Kumakawa, H.(2009). Infecciones micóticas superficiales. Dermatología
Peruana vol19 (3), 226-252.
2. Manuel de la Rosa,Jose Prieto & Jose Maria Navarro.Microbiología en ciencias de la salud.3 er
Edición.Barcelona:Elsevier;2011
3. Llovo J. & Pontón J. Diagnóstico microscópico de la micosis .Revista Iberoamericana de Micología.
2007 .
4. Alejo, P. KOH [Internet].Slideshare.(2015). Recuperado de:https://es.slideshare.net/paul_alejo/koh
5. Murray. R. Microbiologia médica. 7ma Edición. Barcelona: Elsevier.2013
6. G. Prats. Microbiologia y Parasitologia medica. 1era Edicion Madrid 2013

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  • 1. INTEGRANTES: ● Arce Mary ● Chipana Sergio ● Leiva Mirella ● Molleda Shantall ● Rodas Brenda ● Vidal Alessandra ● Vigo Lizbeth
  • 2. Generalidades de los hongos ● Células eucariotas con núcleo ● Organelas como: mitocondria, retículo endoplasmático ● Membrana citoplásmica presenta esteroles característicos (ergosterol), la pared celular -> glucanos específicos y quitina. ● Tratamiento de las micosis: se usan antifúngicos. ● En los hongos con relevancia clínica, la reproducción asexual es eficaz y frecuente. Mohos u hongos filamentosos: el género Aspergillus. Hongos levaduriformes:Candida albicans.
  • 3. Son unidades anatómicas y de crecimiento: la hifa, en hongos pluricelulares, y la levadura, en hongos unicelulares ● Las hifas: estructuras cilíndricas, cenocíticas (aseptadas) o tabicadas (con septos), generalmente multinucleadas. Crecen por el ápice (elongación) y pueden hacerlo en cualquier dirección, incluso dentro del sustrato. Conjunto de hifas: micelio y cuando alcanzan cierto tamaño se dice que forma colonias. ● Las levaduras: tiene diversas formas, esférica, ovoide, elipsoidal y cilíndrica; crecen de forma isodiamétrica (por todos lados) constituyendo la parte vegetativa y en poco tiempo se reproducen asexualmente por gemación, fisión binaria o fragmentación. Algunas levaduras forman cadenas, estructuras a las que se denomina seudohifas, conjunto de varias de ellas: seudomicelio. Las colonias son poco elevadas y de consistencia suave, cremosa, y su color oscila, en general, entre el blanco – amarillo, aunque algunas contienen pigmentos carotenoides. En la Micología Médica se consideran los hongos dimórficos. En estos casos, se identifica una forma infectiva ( en naturaleza), y una forma parasitaria ( en hospedero). Morfología Estructura de una levaduras Estructura de una hifa
  • 4. ● Los factores de virulencia serán aquellas “propiedades”, generalmente moléculas, que permiten al hongo causar daño o enfermedad en quien lo hospeda. ● El desarrollo de tales factores, comienza por estímulos externos a la célula fúngica. ● Esos estímulos activan cascadas de señalización que provocan compuestos protectores (p. ej: enzimas, determinantes antigénicos, receptores), causantes a su vez del desarrollo de la patogénesis. ● Existe una compleja red de interacciones que incluyen la participación de muchas moléculas, tanto por parte del huésped como del hongo, que permiten la expresión de diversas vías; el resultado de esa interacción, será evaluado (enfermedad o no) según el nivel de daño causado en el huésped. Factores de virulencia
  • 5.
  • 6. ● De las más de 500.00 especies de hongos, 250 son capaces de producir enfermedad en humanos. Identificación de hongos Factores: 1) El tropismo 2) La situación inmunitaria del huésped La micosis en: ● El paciente inmunocompetente ● El paciente inmunodeprimido ● Mediante cultivo del material infectado. ● Medios de cultivo adecuados, como: agar Sabouraud, agar patata-dextrosa.
  • 7. ● Características macroscópicas de las colonias (pigmento, aspecto, velocidad de crecimiento, etc.) y microscópicas (esporas,estructuras especiales, etc.). ● Mayor avance en la identificación de hongos oportunistas: amplificación de genes conservados por medio de PCR, y su posterior secuenciación. ● Se puede observar los hongos directamente a partir del material infectado. ● La tinción con calcoflúor: observar con gran seguridad elementos fúngicos en preparaciones en fresco pero requiere de un microscopio de fluorescencia. ● La presencia de hongos en tejidos (biopsias): tinciones específicas como PAS, plata metenamina u otras. Tinción con blanco de calcoflúor de B dermatitidis Tinción con blanco de calcoflúor de una pitiriasis versicolor Microscopía de dermatofitos en escamas de piel en una preparación tratada con KOH al 10%.
  • 9. ● Principal grupo: DERMATÓFITOS, tienen tropismo especial por el tej. queratinizado. ● Especies: antropofílicas, geofílicas y zoofílicas. ● Transmisión: contacto directo, fomites, medios contaminados. ● Géneros de hongos dermatófitos: Trichophyton, Microsporum y Epidermophyton. Micosis superficiales Tratamiento: antifúngicos tópicos u orales Tinea capitis Onicomicosis Tinea pedis Tinea corporis Tinea cruris
  • 10.
  • 11.
  • 12.
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  • 17.
  • 18.
  • 19.
  • 20.
  • 21. DIAGNOSTICO DE LABORATORIO -En examen microscopico de muestras de raspado de piel tratadas con (KOH 10 -20 %). -Se detectan con cortes teñidos con H-E. -Se introducen las muestras de raspado de piel en medios micologicos con antibioticos cuando se haya detectado la presencia de elementos fungicos en dichas muestras. -En 3 semanas aparecen una colonia dermatiacea.
  • 22. TRATAMIENTO -Tratamiento tópico con : pomada de Whitfield. Azoles. Terbinafina .
  • 23.
  • 24.
  • 25. DIAGNOSTICO DE LABORATORIO Cuando el examen microscópico revele la presencia de hi- fas, artroconidios y/o células levaduriformes en gemación, se introducirá el cabello infectado en medios micológicos carentes de cicloheximida (que inhibe la proliferación de los hongos del género Trichosporon .Las especies de este género forman colonias arrugadas secas de color crema a lo largo de un período de incubación de 48 a 72 horas a temperatura ambiente. Las distintas especies de Trichosporon se identifican de manera semejante a las cepas de levaduras. Se deben llevar a cabo pruebas bioquímicas de asimilación de carbohidratos,asimilación de nitrato potásico (KNO 3 (negativa), produción de ureasa (positiva) y morfología en agar harina de maíz.
  • 26. TRATAMIENTO El tratamiento se compone de azoles tópicos. La mejora de las medidas higiénicas , El afeitado del cabello afectado también son eficaces y suelen obviar la necesidad de un tratamiento farmacológico.
  • 27.
  • 28.
  • 29.
  • 30.
  • 31.
  • 32. DERMATOFITOSIS La dermatofitosis ( Tiña. Tinea) es una infección superficial de la piel ocasionada por hongos queratinofílicos que afectan estructuras que contienen queratina: piel, pelo y uñas. ❖ Son hongos filamentosos pluricelulares. ❖ Potencialmente patógenos para hombres y animales. ❖ Capacidad de adaptación a las condiciones ambientales diversas. ❖ Capacidad para parasitar las estructuras queratinizadas ❖ Reciben el nombre de hongos queratinofílicos. ❖ No afectan las mucosas ni semimucosas. ❖ Afectan a cualquier persona (edad, sexo, raza)
  • 33. Géneros Piel y pelo Piel, uñas y pelos Piel y uñas Trichophyton Microsporum Epidermophyton
  • 34. Clasificación De acuerdo al hábitat natural Antropofílicos Zoofílicos Geofílicos Afectan exclusivamente al ser humano. Se transmite de ser humano a ser humano directamente o indirectamente por fómites. Usualmente afectan animales, pero también puede afectar al ser humano, la transmisión puede ocurrir por contacto directo con el animal infectado o indirectamente. Tienen su hábitat en el suelo, en especial en restos de queratina que caen en el suelo y están en proceso de descomposición y son fuente de infección para los humanos y animales.
  • 35. Diagnóstico de las infecciones micóticas superficiales. ★ Examen de luz de Wood ★ Procedimientos micológicos ■ Examen microscópico directo ■ Procedimiento de cultivo
  • 36. Factores predisponentes. ❖ Clima ❖ Malos hábitos de higiene. ❖ Hacinamiento. ❖ Calzado ❖ Ropa sintética. ❖ Traumatismos. ❖ Diabetes ❖ Corticoides. ❖ Prácticas deportivas. ❖ Infecciones por HIV
  • 37. Tiña Capitis Tiña de la cabeza es una infección del cuero cabelludo, pelo y anexos (cejas o pestañas) causadas por las especies del género Trichophyton y Microsporum, caracterizada por placas eritematosas, escamosas y tonsurantes.
  • 38.
  • 39.
  • 40.
  • 41.
  • 42. Diagnóstico El examen con lámpara de Wood El examen micológico directo de raspado de la lesión aclarada con hidróxido de potasio al 10% a 20% permite observar hifas septadas (dermatofitosis), esporas dentro (endothrix) o fuera (extothrix) del tallo piloso. Cultivo para identificar la especie se utilizan medios de agar glucosado. El medio de Sabouraud con antibióticos y antifúngicos que inhiben el crecimiento de las especies contaminantes permite identificar la mayoría de las especies que producen tiña capitis.
  • 43.
  • 44. Tiña de la cara La tiña de la cara ( Tiña facial, tiña faciei, tiña faciale), es una infección superficial por dermatofitos limitada a la piel glabra de la cara.
  • 45. La infección se adquiere con frecuencia de las mascotas del hogar infectadas habitualmente, pero la autoinoculación a partir de otro foco (tiña capitis, tiña corporis y tiña pedis) también es posible. Los dermatofitos liberan varias enzimas, incluyendo queratinasas, que les permiten invadir el estrato córneo de la epidermis.
  • 46.
  • 47. Tiña del cuerpo La tiña del cuerpo (tiña corporis, tiña circinada, herpes circinado, tiña de la piel lampiña), es la infección superficial de la piel lampiña ( glabra, sin pelo), tórax, abdomen y miembros por dermatofitos, excepto las ingles, palmas y plantas. Los agentes causales más frecuentemente implicados son: M. canis, T. rubrum y T. mentagrophytes. Menos frecuentemente M. audouinii, T. verrucosum, T. tonsuran y E. floccosum Debido a que los signos clínicos son variables, en muchos casos de tiña corporis, el clínico a menudo debe basarse en los hallazgos de laboratorio para establecer el diagnóstico correcto..
  • 48. Tratamiento En el caso de lesiones aisladas, la medicación tópica sola es muy eficaz. Se emplean los agentes imidazólicos tópicos, la terbinafina tópica o la amorolfina tópica. En caso de lesiones más diseminadas o inflamatorias se utilizan la grisiofulvina, terbinafina, itraconazol, fluconazol o ketoconazol vía oral.
  • 49.
  • 50. Tiña de la ingle Es una infección dermatofítica de la región inguinal e incluye las infecciones de los genitales, la región pubiana y la piel de las zonas perineal y perianal producida por hongos dermatofitos. Los agentes etiológicos involucrados incluyen T. rubrum, mentagrophytes, E. floccosum, T. y menos frecuentemente T. tonsuran, M. canis, T. verrucosum, y M. gypseum; pero puede haber variaciones regionales
  • 51. Diagnóstico ● El examen micológico directo ● Cultivo para identificar la especie ● La luz de Wood
  • 52. Tratamiento Las tiña de la ingle responden a los antimicóticos tópicos, principalmente a los derivados azólicos. En casos rebeldes y extensos se puede recurrir a la griseofulvina 500 a 1000 mg/día en una a dos tomas por4a6 semanas. Como alternativas se pueden emplear itraconazol 200 mg/día por2a4 semanas, terbinafina 250 mg/día por 4 semanas
  • 53. Tiña de los pies Es una infección dermatofítica superficial que afecta los pies, sobre todo los pliegues interdigitales, plantas y esporádicamente el dorso,evolucionando en forma crónica, muchas veces subclínica con brotes irregulares y prurito de intensidad variable. Los agentes causales más frecuentes son el T. rubrum, T. mentagrophytes , epidermophyton floccosum y T. mentagrophytes var. Interddigitale. Habitualmente puede haber colonización de bacterias grampositivoas, gramnegativas y cándida. El tratamiento de la tiña pedis es fundamentalmente tópico, según la forma clínica de presentación; y el tratamiento sistémico es excepcional. Además se debe corregir los factores predisponentes, uso diario de polvos antifúngicos.
  • 54.
  • 55. Tiña de manos La tiña de las manos (Tiña manuum), es una dermatofitosis superficial de la piel de las manos (palma y dorso de manos), causadas generalmente por especies de trichophyton. El agente causal más frecuente es el T. rubrum. En la forma hiperqueratósica pueden hallarse además del T. rubrum, T. mentagrophytes var. Interdigitale, E. floccosum. Las formas inflamatorias son causadas por especies geofílicas y zoofílicas como: T. verrucosum (ganado), M. canis (perro, gato) y M. gypseum (suelo).
  • 56. El diagnóstico clínico se debe confirmar mediante el examen micológico, directo, cultivo e identificación de especie en microcultivo. El examen directo con KOH es útil como primer método para iniciar el tratamiento antifúngico temprano.
  • 57. Tiña ungueal La tiña de las uñas (tiña ungueal, onicomicosis dermatofítica), es la infección de las uñas de los pies y la mano producida por dermatofitos. Los dermatofitos más comúnmente aislados son T. rubrum (85%), T. mentagrophytes (10%), y excepcionalmente se aíslan T. tonsurans, M. gypseum y M. canis.
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  • 62. ● Afectan a planos más profundos de la piel. ● La más frecuente: la esporotricosis, causada principalmente por el hongo dimórfico Sporothrix schenckii. ● Los micetomas son micosis producidas por hongos que invaden el tejido celular subcutáneo. Son comunes en países tropicales, aunque excepcionales en nuestro medio. . Micosis subcutáneas Tratamiento: por vía oral, normalmente de 2-4 semanas, se puede extender de 3 - 6 meses. Rinosporidiosis Cromomicosis Esporotricosis
  • 63. ● Micosis que afectan a órganos profundos. ● Las principales micosis sistémicas: hongos dimórficos y se denominan también micosis regionales por ser típicas casi exclusivamente del continente americano. ● En pacientes inmunodeprimidos se producen formas clínicas diseminadas que requieren tratamiento antifúngico. Micosis sistémicas o profundas Coccidioidomicosis Cryptococcus neoformans Blastomicosis Histoplasmosis Paracoccidioidocosis Cryptococcus gattii Tratamiento: Itraconazol (enfermedad leve o moderada) , Fluconazol (como alternativa), Anfotericina B y Azoles(para infección diseminada) *Anfotericina B para la enfermedad meníngea (potencialmente mortal).
  • 64. Candidiasis ● Levaduras del género Candida, siendo Candida albicans la especie más frecuente ● Puede localizarse en la mucosa oral (muguet),vaginal, esofágica, etc. ● Candidiasis invasoras: invasión a órganos profundos. Meningitis, bronconeumonía y candidemia son las manifestaciones más frecuentes. Micosis oportunistas Tratamiento para la candidiasis invasoras: azoles (fluconazol, voriconazol), anfotericina B o cualquiera de las tres equinocandinas.
  • 65. Aspergilosis ● Forma clínica muy grave causada por distintas especies del moho Aspergillus ---> Aspergillus fumigatus la especie responsable de más del 80% de casos ● La enfermedad más frecuente es la pulmonar, ● Sobre todo en pacientes profundamente inmunodeprimidos, Aspergillus puede diseminarse a otros órganos,destacando el SNC ● Aspergilosis invasiva: Enfermos inmunodeprimidos ● Aspergilosis semiinvasiva: Personas tratadas prolongadamente con corticoides en pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica, con artritis reumatoide entre otras. ● El diagnóstico de la aspergilosis pulmonar (y de otras micosis invasivas) puede ser extraordinariamente difícil. ● Galactomanano, componente celular casi exclusivo de Aspergillus.
  • 66. Mucormicosis ● Se trata de una micosis filamentosa causada por hongos de géneros del orden Mucorales, entre los que destacan Mucor,Rhizopus, Rhizomucor y Absidia. ● Una forma común de presentación clínica de esta infección es la mucormicosis rinocerebral. ● La mucormicosis puede presentarse también como una infección pulmonar, e incluso diseminarse a otros órganos. ● La mucormicosis de herida también puede aparecer en individuos inmunocompetentes. Mucormicosis rinocerebral Tratamiento para la aspergilosis o mucormicosis: Los antifúngicos más utilizados son la anfotericina B y los nuevos triazoles, entre los que destacan voriconazol y posaconazol.
  • 67. Diagnóstico microscópica directa Candidiasis: La infección invasora por C. albicans puede sospecharse en preparaciones histológicas teñidas con PAS o Platametenamina. Aumento de la sensibilidad de estas técnicas con: la utilización de fluorocromos como el Blanco de Calcoflúor, el Blankophor P y el Rojo Congo Criptococosis: La elección de la técnica de visualización empleada (microscopía directa, tinta china o Calcoflúor) varía según la experiencia del observador, pero sin olvidar que la detección de antígeno es mucho más sensible. Aspergilosis: Aunque las muestras clínicas del tracto respiratorio más frecuentes son los esputos, las que presentan una mayor rentabilidad diagnóstica son las obtenidas mediante fibrobroncoscopia, como el LBA
  • 68. El hidróxido de potasio es un medio de montaje de las muestras clínicas, compuesto químico inorgánico de base fuerte y común, a la solución de KOH se le puede añadir Glicerol, DMSO o algún colorante. Se usa de manera complementaria para diagnosticar micosis, detección de bacterias gram negativas y enfermedades vulvo/vaginales. Técnicas de microscopía con campo brillante: KOH
  • 69. FUNDAMENTOS DE KOH . Es el medio de montaje de muestras más aceptado . Disuelve rápido los elementos celulares permitiendo observar los hongos . El efecto clarificador puede demorar 10 minutos o 1 hora en muestras de uñas y puede reducir el tiempo calentando la muestra . Se usan 2 concentraciones: una fuerte para las uñas del 20-30% y una suave del 10-15% para las otras muestras. Desventajas del KOH: La principal desventaja es su reacción con la muestra pueden crear formas parecidas a los hongos lo cual puede causar confusión y errores en los resultados Fundamentos de KOH
  • 70. KOH examen directo para diagnóstico de micosis KOH Glicerol KOH - Dimetilsulfóxido KOH - Colorante de Cobre (tinta Parker) KOH Blanco de Calcofluor KOH Azul Algodón de Lactofenol
  • 71. La tinción negativa se usa para la detección de la cápsula extracelular de algunos hongos se utilizan suspensiones coloidales de partículas de carbón, su fin es teñir el fondo y dejar las bacterias incoloras. Las más utilizadas son la Tinta China y la Nigrosina. Desventajas: Los problemas con esta técnica tienen, sobre todo, que ver con la experiencia del observador, ya que existen numerosos artefactos (hematíes, burbujas de aire, leucocitos, partículas de talco y gotas de grasa) que pueden confundir al observador y dar un diagnóstico erróneo. Tinción negativa
  • 72. tinción tinta china Se usa tinta china para teñir el fondo de color oscuro y dejar incoloras a las bacterias, es usada para observar S. pneumoniae y Cryptococcus neoformans en LCR. tinción nigrosina Similar a la tinción tinta china, se usa para teñir el fondo y dejar incolora a las bacterias y poder observar su cápsula, esporas, bacterias flageladas y bacterias difíciles de teñir como los espirilos. tinción gram Método de tinción más usado, en los hongos se usa para ver detalles que no se ven en otras tinciones, se usa para determinar si una bacteria es gram negativa o positiva en varios tipos de microbios Tinción gram Tinción Nigrosina Tinción tinta China
  • 73. Microscopía de Fluorescencia PRIMARIA O NATURAL SECUNDARIA -Los hongos tienen la capacidad de emitir radiación tras ser irradiados con luz UV, pero la debilidad de esta fluorescencia natural la hacen inútil desde el punto de vista del diagnóstico práctico. -Importante autofluorescencia en algunos hongos incluidos en parafina y teñidos con hematoxilina-eosina y de P. jiroveci en preparaciones teñidas con Papanicolaou -Se basan en la visualización de objetos no fluorescentes tras marcado con moléculas fluorescentes. -Cambio radical en el escenario de su implicación en el diagnóstico micológico,ya que los fluorocromos son herramientas de cribado ideales que permiten una visualización inmediata de las dianas fluorescentes, contra un fondo oscuro.
  • 74. QUIMIOFLUORESCENCIA Marca de modo general las estructuras fúngicas (naranja de acridina, rojo Congo y agentes blanqueantes) NARANJA DE ACRIDINA Reactivo Procedimiento -El fluorocromo se liga a macromoléculas polianiónicas, como los mucopolisacáridos y los ácidos nucleicos. -En función de la dilución empleada, se puede resaltar la fluorescencia de la pared celular (diluciones bajas) o de las estructuras intracitoplasmáticas (altas diluciones). -Una solución stock 1 % p/v de Naranja de Acridina en agua destilada. -Se puede almacenar en la oscuridad a 4 ºC hasta 6 meses. -La solución se prepara, añadiendo 0,5 ml de la solución stock a 5 ml de un tampón acetato. -Se fija con metanol o calor. -Teñir el frotis con solución de trabajo durante 2 min, lavar con agua y dejar secar. -Observar inmediatamente con microscopio de fluorescencia con los filtros habituales de Inmunofluorescencia y Auramina -Las bacterias y los hongos se tiñen de color naranja y los núcleos de los leucocitos se tiñen de color verde.
  • 75. ROJO CONGO Este fluorocromo se empezó a utilizar para la detección de celulosa en cereales y, en histopatología, para la detección de amiloide. AGENTES BLANQUEADORES -Son compuestos orgánicos heterocíclicos que en solución o aplicados a un sustrato, absorben la radiación en el ultravioleta cercano (350 nm) y emiten la mayoría de la energía absorbida en la región azul del espectro visible (430 nm). -Presentan una peculiar y gran afinidad por polisacáridos constituidos por uniones beta-glucosídicas (glucanos, quitina, celulosa) presentes en los hongos y otros organismos, pero ausentes en los tejidos de mamíferos TINCIÓN DE RECOMENDACIÓN: - ABF - Sistema de iluminación - Sistema de filtros
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  • 78. INMUNOFLUORESCENCIA ● En la IFD el antígeno se expone directamente al anticuerpo fluorescente durante un tiempo adecuado, luego se lava y se observa al microscopio de fluorescencia. ● En la IFI la presencia de un antígeno se revela primero por su exposición a anticuerpos no marcados, luego se lava y se marcan estos con anti-anticuerpos conjugados a FITC, se lava de nuevo y se examina al microscopio de fluorescencia. ● Las células fúngicas que expresan el antígeno reconocido por el anticuerpo monoclonal utilizado presentarán fluorescencia amarillo-verde. *Esta técnica puede utilizarse en combinación con la tinción con quimio fluorescentes
  • 79. Tinciones para Pneumocystis jiroveci Preparación de la muestra Clasificación 1. Tinciones de formas tróficas (trofozoitos) Tinciones Romanowsky-Giemsa o alguna modificación más rápida como el Diff-Quik (< 5 min) que tiñen P. jiroveci y otros hongos,Cryptococcus e Histoplasma, así como protozoos. 2. Tinciones de la pared quística Tinciones Argénticas, Azul de Toluidina O y Tinciones con Quimio Fluorescentes que tiñen los engrosamientos de la pared en forma de doble coma que los caracteriza y facilita su detección. 3. Tinciones Inmunofluorescentes Tiñen las formas tróficas y los quistes.Su mayor utilidad es cuando no se dispone de la muestra más idónea (Ej. esputo inducido) o cuando el número de organismos sea bajo, como en la neumocistosis extrapulmonar.
  • 80. Tinción rápida de Giemsa 1. Se añaden 1 ó 2 gotas de la solución roja (solución 1) sobre la muestra, se deja actuar durante 10 segundos y se escurre. 2. Se añaden 1 ó 2 gotas de la solución azul (solución 2), se deja durante 10 segundos, se escurre y se lava muy ligeramente con agua desionizada. 3. Se deja secar y se procede a la observación de la muestra. Se pueden utilizar técnicas comerciales como Diff-Quik o Giemsa Plus.
  • 81. Azul Toluidina O modificada 1. Fijación con etanol absoluto durante 1 min y secado al aire. 2. Cubrir 10 min con reactivo de sulfatación. 3. Escurrir, lavar 5 min con agua corriente. 4. Teñir con la solución de ATO durante 3 min. 5. Inmersión en etanol 95% unos segundos hasta que deje de escurrir colorante azul (10 segundos). 6. Inmersión en etanol 100% durante 10 segundos. 7. Inmersión en xilol durante 10 segundos. 8. Montaje con Permount.
  • 82. Tinción con quimiofluorescentes Tinciones con anticuerpos Permite reconocer fácilmente, y a muy bajos aumentos (x100), el material eosinofílico esponjoso y los quistes característicos. Técnica 1. Teñir las extensiones con la solución de trabajo de CW durante 1-3 min. 2. Lavar con agua y montar. Escasa sensibilidad cuando el hongo se encuentra en una baja concentración MonofluoTM Kit P. carinii (Bio-Rad) Mediante anticuerpos monoclonales que reaccionan específicamente con antígenos de la pared del quiste y de las formas tróficas de P. jiroveci
  • 83. SEROLÓGICA CRIPTOCOCOSIS : ● LCR ● tiempo de prueba 10-15min ● requiere varios por tener crecimiento lento ● 2 técnicas : Cualitativa y cuantitativa CANDIDIASIS : ● método de detección: Platelia Candida Ag ● Es un ELISA que detecta manano en suero utilizando el anticuerpo monoclonal EBCA1. ● El límite de detección de la prueba es 0,25 ng/ml de suero. ASPERGILOSIS: ● Platelia Aspergillus EIA ● una especificidad del 89,6% y una sensibilidad del 87,5% ● + antes de que aparezca la sintomatología clínica ● El límite de detección de la prueba es 1 ng/ml de suero
  • 84. BIBLIOGRAFÍAS: 1. Sanchez, L., Matos, R. y Kumakawa, H.(2009). Infecciones micóticas superficiales. Dermatología Peruana vol19 (3), 226-252. 2. Manuel de la Rosa,Jose Prieto & Jose Maria Navarro.Microbiología en ciencias de la salud.3 er Edición.Barcelona:Elsevier;2011 3. Llovo J. & Pontón J. Diagnóstico microscópico de la micosis .Revista Iberoamericana de Micología. 2007 . 4. Alejo, P. KOH [Internet].Slideshare.(2015). Recuperado de:https://es.slideshare.net/paul_alejo/koh 5. Murray. R. Microbiologia médica. 7ma Edición. Barcelona: Elsevier.2013 6. G. Prats. Microbiologia y Parasitologia medica. 1era Edicion Madrid 2013