El documento describe los principios fundamentales de la espectroscopía UV-visible. Explica que los espectrofotómetros miden la absorción de la luz por analitos en función de la longitud de onda. También describe que la absorción sigue la Ley de Beer, donde la absorbancia es directamente proporcional a la concentración del analito y el coeficiente de extinción. Finalmente, señala la importancia de la calibración, la exactitud, la precisión y la sensibilidad para la confiabilidad de las mediciones espectrofotométricas.

1. Espectroscopía
UV -VISIBLE

2. Antecedentes

3. Los Métodos y/o Técnicas que emplean
instrumentos , analizan las muestras con el
proposito de conocer alguna característica
física o química del analito y esto permite
caracterizarlo, identificarlo o cuantificarlo.
A)Señal o Respuesta
B)Tiempo de respuesta
C)Resolución
(purificación)
El equipo genera :

4. Actividad iónica Electrodo (VOLTAJE)
(Muestra)
A)
Luz (Muestra) Fototubo (CORRIENTE)B)
Cuando el Analito es sometido a un estudio bajo un
instrumento, existen dos formas de generar una señal.
Estas son : A)
midiendo directamente la actividad del analito B)
con un estimulo y midendo su respuesta

5. Componentes básicos de un instrumento analítico
Generador
de señal
Generador
de señal
Transductor
De entrada
Transductor
De entrada
Transformador
de señales
Transformador
de señales
Transductor
De salida
Transductor
De salida
Señal
De Salida
Señal
Eléctrica ,
luminosa o
Mecánica
Señal
Analítica
Medidor
o escala
Registrador
12.301 Unidad
Digital
Luz
Fuente Mta
Detector
ElectricidadLuz
Dispositivo
de lectura
EJEMPLO

6. Componentes básicos de un instrumento analítico
Generador
de señal
Generador
de señal
Transductor
De entrada
Transductor
De entrada
Transformador
de señales
Transformador
de señales
Transductor
De salida
Transductor
De salida
1. Fuente luminosa
2. Estimulo
eléctrico
Dispositivos Analógicos
1. Electrodo
2. Fototubo
3. Termopar
1. Amplificador
2.
Convertidor
3. Filtro
4. Integrador
1. Impresora alfa numérica
2. Medidores (A/D)
3. Monitor
4. Osciloscopio
5. Registrador

7. Ejemplos de Instrumentos Analíticos
Balanza pHmetro Microondas Refractómetro
Espectrofotómetro GC HPLC AA
IR HRMN Turbidimetro Fluorómetro

8. ESPECTROFOTOMETRO

9. Radiación electromagnética
ν
C= λ ν
(Ciclos/s)
(Hz)
E = h ν
λ(nm)
Ciclo
Longitud de onda
Frecuencia

10. Radiación electromagnética
C= λ ν E = h ν
λ = 450
nmC = 3 X1017
nm/s
ν = 6.6 X 1014
Hz
C/λ = ν
h = 6.62 X10-27
ergs-s
E = 4.36 X10-12
ergs

11. REFRACCIÓN

12. Radiación
monocromática
Luz blanca
Refracción
Radiación
monocromática
Prisma
630 – 780
590 – 630
560 – 590
490 – 560
450 – 490
380 - 450
Espectro visible
λ (nm)Color

13. REFRACCIÓN

14. Rayos γ Rayos X Ultravioleta Visible Infrarojo Microondas
Longitud de onda (λ)
Fracción VIS del Espectro EM
T V Radio

15. Espectrofotómetro
Lámpara
Selector
Celda
Detector
computadora
Payala@campus.cob.itesm.mx

16. Espectrofotometro
Lampara
Selector
Celda
Detector
computadora
Payala@campus.cob.itesm.mx

17. Espectrofotometro
Lampara
Celda
Detector
computadora
Payala@campus.cob.itesm.mx
Selector

20. Espectrofotómetro (doble haz)
Lámpara
computadora
Detector
Celdade
muestra
Celdade
referencia
IR IM
Absorbancia y
Transmitancia A
= Log I /Io A= -
log T A= - log
(%T/100)
I = Intensidad
A= Absorbancia
T= transmitancia
Log IR/IM= A
Selector

21. Absorbancia y Transmitancia
Absorbancia
A = Log I o/ I
Lámpara Celdade
muestra
Selector
Io I
Transmitancia
T = I / Io
Absorbancia y transmitancia
A = Log 1/T
Absorbancia y transmitancia
A = - Log T

22. ?
Absorbancia
A = - Log (%T/100)
transmitancia
%T = (100) (AntiLog –A)
A =
Ejercicio
0.251
%T = 56
ABSORBANCIA
%TRANSMITANCIA
0 100
2 050
0.3
1

23. Absorbancia
Lámpara Celdademuestra
Selector
Io I
A= - log T
A= εcl
Ley de Beer
1)
2)

24. Absorbancia
A= Absorbancia
ε =coeficiente de extinción
C= concentración molar
l= longitud de celda (cm)
En función de la naturaleza y de
la concentración de la muestra
A= εcl
Ley de Lambert- Beer
POR EJEMPLO.
¿Cuál es la A de una substancia al 2.5 X 10-5
M ,
con un ε = 7,500 M-1
cm-1
?. A= 0.18

25. Curva de calibración
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Concentración
A

26. ¿ABSORBANCIA?
Muestra Problema

27. Conc. Prob = (A Prob/A Patrón)(Conc. Patrón)
Problema Patrón
A Problema = 0.458 A
Patrón = 0.765 Conc.
Patrón= 145mg% Conc.
Problema= ?
Conc. Problema = (0.458/0.765)(145mg%)
Conc. Problema= 86.8 mg%

28. Espectro de Absorción
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Longitud de onda (nm)
λ
A
25 mM
5 mM
λ Max

29. Azul de metileno
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Longitud de onda (nm)λ
A
λ Max
660 nm
En general un compuesto puede absorber en la región VIS si contiene al menos 5
grupos cromoforos conjugados y grupos auxocrómicos.

30. CONFIABILIDAD
Debe existir:
1. Exactitud
2. Precisión
3. Sensibilidad
4. Especificidad
Calibración
Exactitud
Incertidumbre
(Límite de detección)

31. Fin