Este documento describe la técnica de Enzima Inmunoanálisis (EIA), también conocida como ELISA. Explica que EIA usa una molécula marcada con enzima para detectar de manera cuantitativa un antígeno o anticuerpo. Se clasifican los EIAs en competitivos o no competitivos (sandwich o indirecto). También cubre cálculo de cut-off, aplicaciones clínicas como diagnóstico de infecciones y monitoreo de hormonas, y posibles causas de resultados falsos positivos o negativos.

1. ENZIMA INMUNOANÁLISIS (EIA) Lcda. Griselda Arteaga Departamento de Microbiología Inmunología

2. Enzima Inmuno Ensayo Objetivo: Comprender el principio inmunológico de la técnica de EIA, sus aplicaciones y limitantes en el diagnóstico clínico por el laboratorio.

3. Contenido Principios del ELISA Clasificación de las técnicas de ELISA Procedimiento Cálculo de Cut off Aplicaciones Clínicas Ejemplos de aplicaciones clínicas Flujograma diagnóstico panameño del VIH. Flujograma diagnóstico panameño del VIH en niños menores de 18 meses.

4. EIA ELISA: Enzyme linked immunosorbent assay Análisis de inmunoabsorción enzimática PRINCIPIO : Determinación cuantitativa de un antígeno o un anticuerpo por medio de una molécula indicadora, la cual se encuentra unida covalentemente a una enzima.

5. CONJUGADO ANTICUERPO MARCADO CON ENZIMA ANTIGENO MARCADO CON ENZIMA ENZIMA: Peroxidasa de rabano, FAL, Glucosa oxidasa,Catalasa, AC, etc

6. Clasificación de las técnicas de ELISA Análisis Competitivo empleando: Conjugado antígeno-enzima Conjugado anticuerpo marcado con enzima Análisis No Competitivos Sandwich Indirecto para medir anticuerpos

7. ELISA Competitivo con Ag marcado Anticuerpo en fase solida Ag libre Ag-E lavado Añadir substrato, Incubar y medir actividad enzimática

8. ELISA tipo Sandwich Ag Ac en fase sólida Lavar + + conjugado lavar Medición de act. enz .

9. ELISA INDIRECTO, para medir anticuerpo

10. REACTIVOS

11. LECTOR DE ELISA

12. Cálculo del Cut-off y Zona Gris Valor de corte o Cut Off CO=NCx +0.3 Zona Gris o Equivoca CO +/- 10%CO

13. RESULTADOS FALSOS POSITIVOS Reacciones cruzadas entre anticuerpos con especificidades similares. Enfermedades Autoinmunes Embarazadas Presencias de virus como Epstein Barr, VIH, etc. Contaminación cruzada entre muestras. Deterioro de los reactivos Errores Técnicos

14. Resultados Falsos Negativos Paciente no ha generado los anticuerpos en estudio Los anticuerpos de la muestra no tienen especificidad contra el antígeno de la prueba o viceversa. Deterioro de los reactivos Errores Técnicos

15. APLICACIONES CLINICAS Diagnósticos de infecciones por microorganismos: al detectar la presencia de antígenos del agente infeccioso. Confirmación de la presencia de anticuerpos: pueden ser anticuerpos contra cualquier microorganismo, inclusive vacunas, autoanticuerpos, etc. Cuantificación de metabolitos: hormonas, medicamentos, etc

16. Ejemplos En mujeres embarazadas: Medición de HGC-cualitativa y cuantitativa Toxo IgG, IgM Rubeola IgG, IgM VIH CMV Diagnóstico de VIH Monitoreo de hormonas-tratamiento