Inmunología Radioinmunoensayo, ELISA, ELISPOT, Western Blotting, Citometría de flujo y Fluorescencia
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- 1. Inmunología…cap6 pate2 PabLo Hernández Castillo Grupo 3-2
- 2. Radioinmunoensayo 3 3 1960 S.A. Bersony Rosalyn Yalow 1 3 1977 Premio Nobel 2 Unión Competitiva Isotopo emisor de partículas gamma y beta 4
- 4. La primera etapa para llevar a cabo un RIA es: Determinar la cantidad de antígeno necesaria para unir de un 50 a 70 % la cantidad fija de un Ag*. Para determinar la cantidad de Ag marcado unida, el complejo Ag-Ab se precipita para separarlo del Ag libre…se mide la radiactividad y puede generarse una curva estándar.
- 5. Antisuero Antiisotipo secundario Proteína A Staphylococus Areus Métodos Para Separar Ag RIA de fase solida Ab a cuentas de Sepharose Inmovilización de Ab (fosos)
- 7. Ensayo de Inmunosorbente ligado a enzima ELISA Indirecto ELISA (EIA) ELISA en Sándwich ELISA Competitivo
- 9. Quimioluminiscencia Limite de Detección aumenta Sustrato Luxógeno Medicion ELISA Ab-HRP + Ag Ab-HRP-Ag Luz Luminol + H2O2
- 10. Prueba ELISPOT Modificación de la prueba ELISA, Placas se recubren con Ag-captura AB-captura. El revelado Ulterior del ensayo por la adición de un sustrato Cromógeno o Luxógeno
- 12. También se utiliza para detectar Ab…prueba de confirmación VIH Identificación de una proteína en Una mezcla compleja. Western Blotting Ab-Radiomarcado/Rayos X Ab-ligado a enzima /sustratos La mezcla se separa por Medios Electroforéticos Gel de SDS-policrilamida Complejos pueden Visualizarse por varios Métodos. Membrana nitrocelulosa Bandas sumergidas en Ab-mono, policlonales… Western Blotting
- 16. Inmunoprecipitación Permite el aislamiento Del Ag para análisis Mas amplios Extracto obtenido por rotura De células o de un tejido Se mezcla con Ab para Formar complejo Ag-Ab Si la concentración de Ag es baja el ensamblaje Puede requerir horas o días
- 18. Apoyo solido: cuenta sintética
- 22. Inmunofluorescencia En 1944 Albert Coons Las moléculas absorben luz y emiten a dif. Long de onda Fluorocromo Fluoresceina,rodamina y Ficoeritrina
- 24. Citometría de flujo y fluorescencia Las técnicas de Ab fluorescentes son instrumentos cualitativos extremadamente valiosos… Citómetrode Flujo Automatizar el análisis y separación de células Rayo laser y detector de luz Forma sencilla y mas complicadas
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- 34. Bibliografía Inmunología de Kuby 6ta Edición Gracias !