prueba de coombs

1. PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
(TEST DE COOMBS)
SHERLY QUISPE SOLIS
MR1 PATOLOGÍA CLÍNICA

2. 1945 Robin Coombs lo introdujo en la medicina
clínica
HISTORIA
Objetivo:
Estudiar las características de los anticuerpos
involucrados en la eritroblastosis fetal (enfermedad
hemolítica RN)

3. PRINCIPIO
Se inyectan inmunoglobulinas
de la clase Ig G y del
complemento de origen
humano en diferentes conejos
Producen anticuerpos Ig G
contra estas globulinas
Se mezcla en el laboratorio y
se produce el reactivo de
coombs de amplio espectro

4. PRINCIPIO
Fab
Fc

5. PRINCIPIO
La AHG se une, a través de sus fragmentos
Fab, a la porción Fc de los anticuerpos que se
han sensibilizado a los hematíes
La misma reacción se produce cuando los
hematíes están recubiertos por otras
proteínas, siempre que el suero posea esa
reactividad.
Puede verse en un tubo de ensayo o en
una tarjeta de gel, interpretada como positiva.

6. REACTIVOS ANTIGLOBULINA HUMANA
.
 Poliespecífica: detecta inmunoglobulinas y fracciones del complemento
 Monoespecífica: detecta solo una proteína (IgG, C3, IgM, IgA…)
Los antisueros específicos frente a otras
inmunoglobulinas (IgA, IgM) o subclases
(IgG1, IgG3, etc) existen, pero no suelen
estar estandarizados para técnicas de
rutina en tubo, y deben ser utilizados
con rigurosos controles.

7. REACTIVOS ANTIGLOBULINA HUMANA
ANTIGLOBULINA POLIESPECÍFICA
 Uso: realización de la prueba directa de antiglobulina (PDAG)
 Contienen anticuerpos frente: IgG y C3d
 Los anticuerpos de mayor significado clínico:
 IgG
 En la mayoría de técnicas: detectar este tipo de anticuerpos incompletos
 La actividad anti-C3d
 Importante en el estudio de la prueba directa de antiglobulina
 Investigación de la anemia hemolítica autoinmune (AHAI)

8. REACTIVOS ANTIGLOBULINA HUMANA
ANTIGLOBULINA MONOESPECIFICA
 Los antisueros monoespecíficos de origen animal: policlonales.
 Se pueden obtener reactivos monoespecíficos monoclonales: tecnología de hibridomas.
 Su componente principal: anticuerpo que reconoce las cadenas pesadas gamma humanas.
 Pueden exhibir cierta reactividad frente a las cadenas ligeras: comunes a todas las clases de IG
 Anti-IgG

9. REACTIVOS ANTIGLOBULINA HUMANA
Anti-C3b, C3d
 No tienen actividad frente a las inmunoglobulina
 Posiblemente reconocen cualquier fracción de C3 que esté recubriendo la membrana GR.

10. INDICACIONES
Autoinmunidad a los glóbulos rojos en el diagnóstico diferencial, incluida la anemia hemolítica fría y caliente
 Anemia hemolítica autoinmune
 Anemia hemolítica inmune inducida por fármacos
 Reacciones de transfusión hemolíticas mediadas por aloanticuerpos
 Enfermedad hemolítica del recién nacido.
 Lupus eritematoso sistémico (sin anemia hemolítica)

11. TIPOS DE PRUEBA DE ANTIGLOBULINA
Objetivo
Estudiar la unión antígeno-anticuerpo producida in vivo, permite detectar la presencia de inmunoglobulinas y/o
fracciones del complemento adheridas in vivo a los hematíes.
Anemia hemolítica autoinmune
Reacción hemolítica postransfusional
Enfermedad hemolítica del feto y del recién nacido
Prueba cruzada incompatible
Estudio de donantes con SCR positivo o con Rh(D) negativo, pero positivo en técnica de antiglobulina

12. PRUEBA DIRECTA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
MÉTODO DE TUBO

13. De acuerdo con Garraty y col.,1 el umbral para la
detección de IgG varía de 120 moléculas/hematíe a 500
moléculas/hematíe y para C3d, de 400 moléculas/hematíe
a 1000 moléculas/ hematíe (valores aproximados).
RESULTADOS

14. PRUEBA DIRECTA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
Importante tener en cuenta:
 Es necesario lavar correctamente los hematíes con solución salina.
 No debe realizarse una centrifugación excesiva = Para evitar falsos positivos.
 Lectura inmediata = Para evitar resultados erróneos (falsos negativos)
 Si el resultado es negativo con los reactivos que detectan C3d:
 Realizar una incubación de 5 min y una nueva lectura para favorecer la reactividad del complemento

15. PRUEBA DIRECTA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
Método de gel-microcolumna
 Si se trabaja en tarjetas de gel de antiglobulina:
 Únicamente se han de dispensar los hematíes y
 Realizar la lectura tras una centrifugación
 Este método ha demostrado tener mayor sensibilidad y menor especificidad que la técnica de tubo,
 El significado clínico de esta prueba no está bien establecido cuando es únicamente positiva en técnica de gel

16. PRUEBA DIRECTA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
Método de gel-microcolumna

17. PRUEBA INDIRECTA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
Objetivo : Estudiar la unión antígeno-anticuerpo tras incubación in vitro.
Fundamento:
 Se ponen en contacto anticuerpos y antígenos y se realiza una incubación a 37 °C.
 El tipo de muestra y de reactivo variará según sea la prueba a realizar.
 En una prueba cruzada: hematíes del donante y suero/plasma del paciente.
 En un estudio de anticuerpos irregulares: hematíes comerciales y suero/plasma del paciente.
 En un estudio de fenotipo eritrocitario, hematíes del paciente y antisueros comerciales.

18. Usos
 El estudio de anticuerpos irregulares
 Pruebas de escrutinio
 Puebas de identificación y titulación.
 La determinación del fenotipo eritrocitario
 Las pruebas cruzadas pre-transfusionales.
 El estudio de anticuerpos irregulares tras procesos de elución y adsorción.
 El estudio de fenotipos Rh(D) débiles.
PRUEBA INDIRECTA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

19. PRUEBA INDIRECTA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
Método de tubo
Se dispensan anticuerpos y antígenos en el tubo y se
realiza una incubación a 37 °C durante 30 min.
Posteriormente, se añade la antiglobulina, se centrifuga
y se leen los resultados de forma inmediata.

20.  Utilizando una tarjeta de gel de antiglobulina poliespecífica.
 Se añade una gota de hematíes y otra de plasma/reactivo comercial.
 Se incuba a 37 °C,
 Se centrifuga y
 Se lee el resultado
PRUEBA INDIRECTA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
Método de Gel - Microcolumna