Clase teórica

1. NOXAS I
SEMANA 11

2. PLAN DE CLASE
Género Haemophilus
Género Legionella
Género Bordetella

3. Haemophilus spp
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gammaproteobacteria
Orden: Pasteurellales
Familia: Pasteurellaceae
Género: Haemophilus
Taxonomía

4. Género Haemophilus
 Bacilos cortos circulares “COCOBACILOS”
 Gramnegativos, aeróbicos
 Necesitan medios enriquecidos (CAPNOICOS) con sangre o
productos hemáticos para crecer:
 Factor nicotinamida adenina dinucleótido - V (NAD)
 Factor crecimiento protoporfirina - X (Hemina, hematina)
 Fenómeno de satelitismo con Staphylococcus aureus.
Crecimiento
en agar
chocolate
Fenómeno de
satelitismo

5. Haemophilus - Especies
• Incluye organismos comensales con un cierto
grado de patogenicidad.
• OMS: frecuencia de infecciones graves por H.
influenzae del serogrupo b -> 2 millones de
casos/año.
H. influenzae

6. Haemophilus - Localización
Infecciones

7. Haemophilus – Factor de
Virulencia

8. Haemophilus – Factor de
Virulencia

9. Haemophilus – Identificación
• Identificación presuntiva: dependencia
de factores X y V.
• Prueba de porfirina (factor X)
• H. parainfluenzae:
– No es dependiente del factor X
– Positivo en la prueba de la ONPG
» Orto-nitrofenilgalactopiranosido
» Beta - galactosidasa
– Lactosa negativa
– Fermenta glucosa, sacarosa y
manosa
– No fermenta xilosa, ribosa, manitol y
rafinosa

11. Haemophilus influenzae
 Coco-bacilos Gram (-)
 Cápsula de polisacárido (Polirribitol
fosfato)
 Pittman (años 30’s) identificó seis
serogrupos basados en la composición
de la cápsula polisacárida (a-f).
 95% de la enfermedad invasiva es
causada por el tipo b (Hib)
 En 1988, se aplicaron las primeras
vacunas conjugadas eficaces para
prevenir la infección por H. influenzae
serogrupo b.

12. Haemophilus influenzae
 Anaerobios facultativos.
 Colonias pequeñas, convexas, de borde
regular y aspecto brillante.
 Pruebas bioquímicas: Producción de Indol,
actividad ureasa, fermentador de glucosa,
ni hemolítico, catalasa positivo.
 Crece en agar chocolate pero no en agar
sangre.
 Requiere de los factores X y V.
 Resistente a la ampicilina y al
cloranfenicol.

13. Haemophilus influenzae –
Formas clínicas

15. Definición de Caso
Definición clínica de caso
Enfermedad invasiva causada por
H. influenzae puede producir
cualquiera de los síndromes clínicos
incluyendo meningitis, bacteremia,
epiglotitis o neumonía.
Criterios de laboratorio para el
diagnóstico
Aislamiento de H. influenzae de un
sitio normalmente estéril (ej:
sangre, LCR, líquido articular,
pleural o pericárdico).

16. Haemophilus influenzae –
Pruebas de identificación

17. Microscopía y cultivo

18. Utilización de factores X y V

19. Haemophilus influenzaeTipo b
Infección bacteriana severa,
primariamente en infantes antes de la
vacunación:
• Causa principal de meningitis
bacteriana y enfermedades invasivas
en niños < 5 años.
• Dos tercios de los casos ocurren entre
niños <18 meses.
• Aprox. 1/200 niños desarrolla
enfermedad invasiva Hib antes de los
5 años de edad.
• Con las vacunas conjugadas para Hib
disminuyó hasta en 99% la incidencia
en infantes y niños pequeños.

20. Presentación Clínica
Cellulitis
6%
Arthritis
8% Bacteremia
2%
Meningitis
50%
Epiglottitis
17%
Pneumonia
15%
Osteomyelitis
2%
Haemophilus influenzae type b
Clinical Manifestations*
*prevaccination era

22. Haemophilus influenzae
Modo de Transmisión:
Infección por gotas infectadas y secreciones
del tracto respiratorio superior durante el
período infeccioso.
Período de Incubación:
Desconocido (probablemente corto: 2-4 días).
Período Infeccioso
- Mientras el organismo esté presente, aún en
ausencia de secreción nasal.
- No infeccioso dentro de las 24-48 horas
después de instaurados los antibióticos
efectivos.

23. Haemophilus ducreyi
 Cocobacilos Gram (-)
 Agrupaciones en cardúmenes

24. Haemophilus ducreyi
 Agente causal del chancro blando o
chancroide
 Transmisión sexual: úlceras genitales y
linfadenitis inguinal
 Se vincula con la infección por el virus
de la inmunodeficiencia humana (VIH)
por el papel que desempeña la
ulceración genital en la transmisión del
virus de inmunodeficiencia humana.
 H. ducreyi requiere el factor X
(hemina).

25. Haemophilus ducreyi
- Diagnóstico:
a) Signos clínicos en áreas
endémicas
b) Frotis de una úlcera o
aspiración de un bubón para
Aislar colonias de Hd en agar
chocolate y observar cocobacilos
Gram (-).
- Control:
• a) Relaciones sexuales protegidas (uso de preservativo).
• b) Eritromicina durante 7 días.
• c) Localización de contactos para tratamiento con antibióticos.

26. https://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-pdf-S0213005X20300549

27. VIDEO: HAEMOPHILUS INFLUENZAE TIPO B

28. Legionella
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Orden: Legionellales
Familia: Legio-nellaceae
Género: Legionella
Taxonomía

29. Género Legionella
 Bacteria Gram negativas,
delgados y pleomorfos
 Miden de 0.5 a 1um de ancho
y 2 a 50um de largo
 Se tiñe débilmente con los
reactivos habituales (T. Gram)
Para reproducirse requiere
encontrarse dentro de las
amebas, que están en los
estanques de agua, tuberías,
duchas de hoteles, piscinas, etc.

30. Género Legionella - Historia
Una epidemia de esta enfermedad en Filadelfia (1976),
principalmente entre los participantes de una convención
estatal de la Legión Americana, llevó a que se la llamara
“enfermedad de los Legionarios” por la Legionella
pneumophila y luego se cambió el nombre a la enfermedad
“legionelosis”.

31. Legionella - Especies
 Existen 48 especies
dentro del género
Legionella y un total de
78 serotipos.
 La especie que afecta
más al hombre es la
Legionela pneumophila
de serotipos 1 y 6.

32. Legionella – Características
VIRULENCIA EPIDEMIOLOGÍA
• Capaz de replicarse en los
macrófagos alveolares (y en las
amebas en la naturaleza).
• Evita la fusión del fagosoma.
• Produce infecciones esporádicas,
epidémicas y nosocomiales.
• Se encuentra con frec. En las reservas
naturales de agua, torres de
refrigeración, conducciones de agua
(incluidas las hospitalarias).
• Alto riesgo: Ptes con afectación
pulmonar o con inmunidad celular.

33. Legionella – Manifestación clínica
FIEBRE DE PONTIAC
no neumónica
LEGIONELOSIS
neumónica
Reportada por primera vez en 1968.
Se caracterizaba por fiebre,
escalofríos, mialgias, malestar general
y cefalea, pero no cursa ninguna
evidencia clínica de neumonía.
Enfermedad febril corta entre 2 a 5
días – sin causar ninguna muerte.
Más grave, mortalidad con un 15% de los
individuos sanos y hasta el 75% de los
pacientes inmunodeprimido.
Enfermedad aguda – periodo de
incubación de 2 a 10 días.
Enfermedad multiorgánica – tubo
digestivo, SNC, hígado y riñones.
Manifestación principal: neumonía.
 Infección asintomática por Legionella son relativamente frecuentes.
 Infección sintomática afecta principalmente a los pulmones y se presentan las
siguientes formas:

34. Legionella pnemophila – Periodos
Prepatogénico
Agente: Legionella
pnemophila
Huésped: Mayores de 55
años, fumadores,
inmunodeprimidos
Incubación: 2 a 14 días
Patogénico
Neumonía - Signos y
síntomas: escalofríos, tos,
cefalea, fiebre
Enfermedad avanzada: 3
semanas, tos con flema.
Crónico: más de 3
semanas, falta de aliento,
expectoración con sangre,
dolor de pecho
Muerte/
Recuperación
Peor de los casos, muerte
por neumonía progresiva e
insuficiencia respiratoria.
Tratamiento (eritromicina,
azitromicina, telitromicina,
levofloxacina).
Prevención y control:
mantenimiento de las
instalaciones, control de la
temperatura.

35. Legionella – Fuentes de contagio
 Ambientes como duchas, grifos,
calderas de vapor y otras
fuentes conductoras de agua.
 Las tuberías con poca agua o
ninguna y/o en aquellas que
contienen restos de lodo y
suciedad.
 El agua a temperaturas entre
20ºC y 45ºC favorece su
crecimiento.
 Aparecen en medios naturales y
en embalses de agua artificiales.

36. Legionella – Contagio

37. Legionella - Síntomas
Normalmente fiebre,
escalofríos y tos.
Algunos tienen también
mialgia, cefalea, cansancio,
pérdida de apetito y,
ocasionalmente, diarrea.

38. Legionella – Diagnóstico
Pruebas de laboratorio:
 Muestras: Lav bronquial, líquido pleural, biopsia pulmón o sangre.
 Métodos:
 Cultivo en medio específico, BCYE suplementado con a-cetoglutarato.
 Tinción directa con anticuerpos fluorescentes en el exudado.
 La serología con estudio de anticuerpos. Sensibilidad: 60-80%
 Estudio de antígenos urinarios.

39. Legionella – Cultivo
 Exigente desde el punto de vista nutricional,
necesita L-cisteína y su crecimiento se favorece
con sales de hierro.
 Pueden proliferar en BCYE, buff ered charcoal
yeast extract; (medios complejos como el agar
con extracto de levadura y carbón vegetal).
 Temperatura de 35°C y 90% de humedad.
 El carbón vegetal actúa como desintoxicante.
 Para hemocultivos cabe usar el medio BCYE
bifásico.
 Proliferan lentamente y por lo regular las
colonias son visibles sólo después de tres días
de incubación.

40. Legionella – Cultivo
 Colonias redondas o planas con bordes
precisos, su color varía desde incoloro
hasta rosa o azul iridiscente y son
translúcidas o moteadas.
 La morfología de las colonias puede variar
y pueden perder su color.
 Se requiere 2 semanas o más para que
proliferen en cultivos de sangre.
CARACTERÍSTICAS DE CRECIMIENTO:
• L. pneumophila, pero no las demás
legionelas, hidroliza el ácido hipúrico.
• Producen gelatinasa y lactamasa B.
• No fermentadores.

41. Legionella – Tratamiento
MACRÓLIDOS FLUROQUINOLONAS TETRACICLINAS
 Azitromicina
 Claritromicina
 Eritromicina
 Trimetroprim-
Sulfametoxazol
 Tetraciclina
 Ciprofloxacino
 Levofloxacino
 Doxiciclina
*Resistencia a betalactámicos.
* En los casos más severos, se puede utilizar la rifampicina.
Recomendados para
tratar la enfermedad
del legionario

42. Legionella – Prevención
 Identificación del foco ambiental.
 Diseño y mantenimiento adecuados de
las torres de refrigeración y los
conductos de agua, especialmente del
agua caliente (mantener una
temperatura elevada).
 La Legionela es muy vulnerable a dosis
altas de cloro -> Hipercloración de las
reservas de agua.
 El soporte férrico favorece su
crecimiento y mediante el uso de las
alcachofas de plástico en las duchas,
puede ser evitado.

43. https://www.elsevier.es/es-revista-medicina-integral-63-pdf-13038561

44. VIDEO: LEGIONAIR-DETECT: MÉTODO DE DETECCIÓN DE LEGIONELLA PNEUMOPHILA EN AEROSOLES

45. Bordetella
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Beta-proteobacteria
Orden: Burkholderiales
Familia: Alcaligenaceae
Género: Bordetella
Taxonomía

46. Género Bordetella
 Cocobacilo gram negativos
 Pleomórficos
 Catalasa positivo
 Oxidan aminoácidos
 Encapsulados
 No producen esporas
 Aerobios estrictos
 Algunas especies son móviles
 Miden entre 0.8 y 0.4um
 T° optima de 35 a 37°C -> agar MacConkey

47. Bordetella – Características
 Pertenece a los patógenos del
tracto respiratorio inferior.
 Causa un cuadro clínico grave en
niños menores a 1 año.
 Presenta colonias pequeñas de
borde bien definido, color gris y
brillante, con crecimiento lento.
 Catalasa positiva.
**Excepciones: solo B. petrii crece en
concentraciones bajas de oxígeno y no
crece en MacConkey.

48. Bordetella – Especies
Más frecuente y
reconocido.
 B. parapertussis: forma más leve de tos ferina
 B. bronchiseptica: enfermedad respiratoria en perros, cerdos,
animales de laboratorio y es ocasional en el hombre.
 B. holmesii: poco frecuente de sepsis.

49. Bordetella – Factores de
virulencia
Factores que le permiten la adherencia al
epitelio ciliar y evadir acciones de los
macrófagos:
 Hemaglutinina filamentosa:
 Está en la membrana externa de la
B. pertussis.
 Su función es reconocer
receptores que hay en las células
del epitelio ciliar de nuestro
aparato respiratorio y adherirse.
 Se llama filamentosa, porque esta
proteína forma un filamento.
 Aglutina los glóbulos rojos.

50. Bordetella – Factores de
virulencia
 Fimbrias:
 Existen las fimbrias tipo 2,3 y D, que
se encuentran presentes en la
membrana externa.
 Reconocer receptores que están en el
epitelio ciliar para adherirse.
 Pertactina:
 También está en la membrana externa
y van a reconocer los receptores a
nivel del epitelio ciliar.

51. Bordetella – Factores de
virulencia
 PT (toxina pertussis): Exotoxina con cinco
subunidades
 Principal factor de virulencia de Bordetella.
 Causa el principal daño a nivel del aparato
respiratorio, hace que se manifiesten los
signos y síntomas de una infección por B.
pertussis que sería la tos ferina o
coqueluche.
 Presenta ciertos genes involucrados.
 Componente A es enzimáticamente activo
y está formado por subunidad S1.
 Componente B es la parte de unión al
receptor receptor y está formada de
subunidades S2–S5.

52. Bordetella – Diagnóstico
Se ocupan otros tipos de técnica más que la
microbiología tradicional:
• Inmunofluorescencia: tanto su sensibilidad como
especificidad no son tan buenas.
• Biología molecular: PCR, es el más usado.
Muestras para la microbiología tradicional o PCR:
• Apirado Nasofaríngeo (ideal para cualquier tipo de
técnica)
• Hisopado Nasofaríngeo
• Esputo (en adultos)
• Se aconseja cultivar la muestra de inmediato y no
procesarla más allá de 2 horas.
Medio de transporte adecuado: AMIES (para
microorganismos lábiles a las condiciones
ambientales).

53. Bordetella – Cultivos
 Medios tradicionales: agar sangre y chocolate,
MacConkey
 Regan-Lowe (RL): medio formado por agar carbón
+ sangre equina al 10% + cefalexina. Es un medio
especial para Bordetella que tiene inhibidores de
la microbiota que puede venir del tracto
respiratorio superior y además, tiene nutrientes y
factores de crecimiento que van a favorecer el
crecimiento de Bordetella.
 Bordet-Gengou (BG): medio formado por infusión
de papas + sangre bovina al 20%.
 Es de lento crecimiento no se puede dar por
negativa hasta los 7 días de incubación. Pero en el
caso de B. pertussis a los 2 – 3 días ya observamos
su crecimiento.

54. Bordetella – Identificación
• La identificación presuntiva se basa en la morfología de la
colonia, la tinción de Gram a partir del cultivo en el cual se
deben oxidar cocobacilos Gram negativos y el uso de
pruebas bioquímicas como catalasa, ureasa y oxidasa.
• Catalasa positiva para todas las Bordetellas.

56. PRUEBA
Bordetella
bronchiseptica
Bordetella
parapertussis
Bordetella
pertussis
Colistin-polymycin
susceptible
+ +
Growth on ordinary
blood agar
+ + -
Motilidad + - -
Beta hemolisis + + -
Crecimiento en agar
MacConkey
+ + -
Oxidasa + - +
Red. nitratos + - -
Citrato + V -
Voges Proskauer V
Hidrolisis de urea + + V
Fenilalanina deaminasa V
Fosfatasa alcalina V
Crecimiento a 42 °C V V -

57. Bordetella pertussis –
Características
 Cocobacilos gramnegativos,
encapsulados y no móviles.
 Aerobios facultativos.
 No esporulan.
 Sistema respiratorio (tos ferina).
 Requiere factores complejos
(nicotinamida).
 Cultivo: crece en medio de
Bordet-Gengou con penicilina G./
Agar Regan Lowe a 35-37°
durante 3 a 7 días.

58. Bordetella pertussis –
Epidemiología
 Reservorios humanos, + en niños
 Distribución universal
 Mayor riego: Niños menores de 1
año, pero la prevalecía aumenta
en niños mayores y adultos.
 Las personas no vacunadas
tienen mayor riesgo de padecer
la enfermedad.
 La enfermedad se propaga de
una persona a otra por partículas
aerosolizada infectadas.

59. Bordetella pertussis – Patogénia

60. Bordetella pertussis – Toxinas

61. TOXINA
PROTEICA
TERMOLABIL
FACTOR
INHIBIDOR DE LA
ADENILCICLASA
FACTOR
HISTAMIN –
SENSIBILIZANTE
(HSF)
FACTOR DE
PROLIFERACION DE
LINFOCITOS (LPF)
ENDOTOXINA
LIPOPOLISACARIDA
TERMORRESISTENTE
TOXINA
NEUROGENICA
ANTIGENO
PROTECTOR (PA)
FACTOR HEMAGLUTINANTE
PROTEICO

62. Bordetella pertussis –
Diagnóstico
• La microscopía no es sensible
ni específica.
• El cultivo es específico, pero
no sensible.
• Las pruebas de amplificación
de ácidos nucleicos son las
pruebas más sensibles y
específicas.
• La detección de IgG y de IgA
se puede emplear como
prueba de confirmación.
EXAMEN
DIRECTO
MICROCULTIVO
Diagnóstico.
INMUNOLÓGICO
CULTIVO - IDENTIFICACIÓN
Medio
Border y
Gengou
modificado
Agar patata-glicerina
20-30% sangre
desfibrinada
Penicilina (0,25 U/ml) o
Cefalexina (40 mg/l)

63. PRUEBA Bordetella pertussis
Susceptible colistina-polimixina +
Crecimiento en
agar sangre ordinario
-
Motilidad -
Beta hemolisis -
Crecimiento en agar MacConkey -
Oxidasa +
Red. nitratos -
Citrato
-
Crecimiento a 42 °C
-

64. TOS FERINA – CUADRO CLÍNICO
• Tos feria o coqueluche tiene un periodo de
incubación de 7 a 14 días.
• Produce fiebre, pero no alta.
• Tiene 3 etapas características:
– PERIODO CATARRAL: Dura 1 – 2 semanas, el
cual es muy similar al resfriado, se tiene
rinorrea (mucosidad por la nariz), tos,
conjuntivitis (dolor de ojo por la
inflamación) y fiebre de baja densidad. Es la
etapa donde la tos ferina es la más
contagiosa.
– PERIODO PAROXÍSTICO: Periodo
característico del cuadro clínico con un
exceso de tos, vómitos, desnutrición y
fiebre de baja intensidad (la persona se
ahoga y tiene aumento de mucosidad).
– PERIODO DECLINACIÓN

65. TOS FERINA – CUADRO CLÍNICO
• Duración total: 7 – 12 semanas, siendo importante vacunar a los
bebés para protegerlos.
• Comienza como cuadro de tracto respiratorio superior pero
puede bajar y volverse un cuadro de tracto respiratorio inferior.
COMPLICACIONES:
 Respiratorias: Otitis, neumonía
 Abdominales: hernias, prolapso rectal
 Hemorragias: petequias, epistaxis (sangrado nasal por tanta
mucosidad nasal)
 Nerviosas: convulsiones, pares craneales, coma
FACTORES PREDISPONENTES:
 Niños: menores de 6 meses a 5 años
 Frecuencia: estacional, con mayor frecuencia en otoño-invierno.
 Brotes: cada 3 – 5 años según estudio
 Inmunizar a los bebés (vacunarlos)

66. BOCA NARIZ
ADHERENCIA AL EPITELIO CILIADO
RESPIRATORIO
MULTIPLICACION LIBERACION
DE TOXINAS
FACTOR DE PROLIFERACION DE
LINFOCITOS
FACTOR HEMAGLUTINANTE
FACTOR INHIBIDOR DE LA
ADENIL-CICLASA
TOXINA NEUROGENICA O HSF
HIPOGLUCEMIA
ENCEFALOPATIA
TOXINA
DERMONECROTICA
CITOPLASMICA
ACUMULACION DE
SECRECIONES
CILIOESTASIS
NECROSIS DE EPITELIO
ACCESOS DE TOS
HIPOXEMIA

67. Bordetella pertussis – Tratamiento
AZITROMICINA
ERITROMICINA
CLORANFENICOL
AMPICILINA
TETRACICLINA
AMINOGLICOSIDOS
RESISTENTE
PENICILINA
BACITRACINA

68. https://scielo.isciii.es/pdf/pap/v18s25/1139-7632-pap-18-s25-00041.pdf

69. VIDEO: ASÍ SUENA LA TOS FERINA