Presentacion de la prueba IHQ (Inmunohistoquimica) en Bacterias.

1. IHQ
(Inmunohistoquímica )
Universidad de la Salle Colombia
Facultad de ciencias agropecuarias
Medicina Veterinaria
Bogotá-Colombia
Luis G. Pérez
Yeili Álvarez Niño
Andrés Ricardo Avellaneda

2. ¿QUÉ ES?
se refiere al proceso de detección de antígenos en las células
de una sección de tejido mediante la explotación del principio
de anticuerpos que se unen específicamente a los antígenos
en los tejidos biológicos. IHC toma su nombre de las raíces
"inmuno", en referencia a los anticuerpos utilizados en el
procedimiento, y "his", que significa tejido.

3. Inmunohistoquímica directa
(método de un solo paso)
En Primer lugar se provoca la reacción entre un anticuerpo primario
conjugado con un fluorocromo o una enzima y un antígeno tisular o
celular, La visualización de la reacción es posible con la ayuda de un
cromógeno y los resultados se aprecian por microscopio. Es el menos
sensible: la coloración fuerte especifica del complejo antígeno-anticuerpo
por lo general se acompaña de grandes cantidades de
actividad inespecífica.
http://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe18/espe18.htm

5. Inmunohistoquímica indirecta
(método de dos pasos o tres pasos)
• En el método de dos pasos se provoca la reacción entre un anticuerpo
primario no conjugado y un antígeno tisular o celular. A continuación
se permite la reacción de un anticuerpo secundario conjugado con un
fluoruro o una enzima. Luego de colorearlo cromógeno, se observan
los resultados por microscopio.
http://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe18/espe18.htm

7. • La elaboración posterior del procedimiento indirecto es el método de
tres pasos. Se liga un anticuerpo terciario conjugado al anticuerpo.
Con el uso de un anticuerpo secundario o terciario, el número de
enzimas disponibles para reaccionar con el cromógeno es mayor y en
ultima instancia produce una reacción inmunohistoquímica más
intensa.

8. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Durante el uso de los anticuerpos adecuados para apuntar a los
antígenos correctos y amplificar la señal es importante para la
visualización, la preparación completa de la muestra es crítica para
mantener la morfología celular, la arquitectura del tejido y la
antigenicidad de los epítopos diana. Esto requiere la recogida de tejidos
adecuada, la fijación y seccionamiento

9. El paraformaldehído se utiliza por lo general con la fijación.
Dependiendo de la finalidad y el espesor de la muestra experimental,
ya sea en secciones delgadas se cortan a partir del tejido de interés, o si
el tejido no es muy grueso y es penetrable que es usado en su
totalidad.
El corte se lleva a cabo por lo general mediante el uso de un
micrótomo, y las rodajas se montan en portaobjetos. "IHC de flotación
libre" utiliza rebanadas que no están montados; estas rodajas se
producen normalmente usando un microtomo de vibración.

10. no necesita el tejido que se permeabilizaron porque esto ya ha sido
realizado por la cuchilla de micrótomo durante la preparación de la
muestra. Los detergentes como Triton X-100 se utilizan generalmente
en inmunohistoquímica para reducir la tensión superficial, lo que
permite menos reactivo que se utiliza para lograr una mejor y una
cobertura más uniforme de la muestra.
https://www.google.com.co/search?q=Identificaci%C3%B3n+de+fimbrias+de+Escherichia+coli+enteropat%C
3%B3geno+mediante+inmunohistoqu%C3%ADmica+en+cerdos+lactantes+con+diarrea&es_sm=93&source.

12. Utilización
La tinción inmunohistoquímica se utiliza ampliamente en el diagnóstico
de células anormales, tales como las que se encuentran en los tumores
cancerosos.
IHC también es ampliamente utilizado en la investigación básica para
entender la distribución y localización de marcadores biológicos y las
proteínas expresadas diferencialmente en diferentes partes de un
tejido biológico.

13. Importancia de la inmunohistoquímica
Es de vital importancia para el marcaje selectivo de proteínas y otros
elementos que pueden estar presentes, tanto en las membranas
celulares, citoplasma, y demás compartimientos citoplásmicos, así
como también en la matriz extracelular.
Requiere de un entrenamiento especializado sobre todo en el
procesamiento de los tejidos, la selección de todos y cada uno de los
reactivos necesarios apropiados, la interpretación de los
inmunomarcajes en las preparaciones histológicas.

14. Identificación de fimbrias de Escherichia coli
enteropatógeno mediante inmunohistoquímica en
cerdos lactantes con diarrea

15. Caso Clínico
La colibacilosis es una enfermedad digestiva o sistemática que
en los cerdos lactantes y otros animales jóvenes es
responsable de cuantiosas pérdidas económicas. Las fimbrias
son de 0.2μm de longitud y entre 2 y 7 mm de ancho, que
permiten la adherencia bacteriana a las células epiteliales
intestinales. Cepas de E. coli con F4 con capaces de adherirse y
promover la colonización principalmente en intestino delgado
anterior en cerdos neonatos.

16. Metodología
Animales de experimentación ,el material estuvo constituido
por duodeno, yeyuno e íleon de 50 cerdos lactantes que
cursaban con diarrea y procedían de 6 explotaciones porcinas
de la zona central y 3 del área sur de Chile. Los animales se
obtuvieron durante los meses de febrero a abril de 1997.

17. ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: Posterior a la necropsia de los cerdos, se
recolectaron contenidos de duodeno, yeyuno e íleon de cada cerdo,
remitiéndose refrigerados al Laboratorio de Microbiología 1 dentro de
las 8 -12 horas. Las muestras fueron sembradas en Agar Eosina Azul de
Metileno; cuando se observó desarrollo de un 80 % o más de colonias
típicas de E. coli, se efectuó la prueba de Aglutinación (Fimbrex®)2 para
determinar el tipo de fimbria presente.

18. Resultados
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO E IDENTIFICACIÓN DE FIMBRIAS. De los 50
cerdos lactantes con cuadro diarreico, se identificaron antígenos
fimbriales en intestino delgado mediante IHQ en 16 (32%) de ellos. De
éstos, en 10 casos se observó aislamiento de E. coli solo o asociado a
otros agentes biológicos; en los 6 restantes, 5 no presentaron
desarrollo bacteriano en medio de cultivo y en un caso se aisló
Salmonella sp.

21. Bibliografía
• Benedicto Chuaqui J. 1999. Manual de patología general Textos Universitarios Facultad de Medicina. Chile, Eds. Univ.
Católica de Chile.
• Microscopia de inmunofluorescencia. Disponible en:
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/minmuflures.htm
• 1Lynch, J., Raphael, S., Mellor, D., Spare, P. y Inwod, M. 1977. Métodos de laboratorio. México Nueva Editorial
Interamericana.
• Inmunofluorescencia inmunoperoxidasa. 2014. disponible en: http://164.73.28.51/drupal-6.16/sites/default/files/2014-
ifd.ihq__0.pdf
• Elena Vecino. TECNICA INMUNOHISTOQUIMICA. Disponible en:
http://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe18/espe18.htm
• CANAL, A.M.; V. CUBILLOS; J. ZAMORA; G. REINHARDT; E.PAREDES; R. ILDEFONSO; A. ALBERDI; P. MACÍAS. 1998.
Identificación de fimbrias de Escherichia coli enteropatógeno mediante inmunohistoquímica en cerdos lactantes con
diarrea. Patología Básica. Facultad de Agron. y Veterinaria de Esperanza, Universidad Nacional del Litoral, Argentina