Este estudio examinó la asociación entre el polimorfismo Pro12Ala del receptor PPARγ2 y condiciones como la obesidad, resistencia a la insulina e hipercolesterolemia en niños. Los resultados mostraron una mayor frecuencia del alelo Pro12Ala en los grupos con estas condiciones en comparación con el grupo control, aunque las diferencias no fueron estadísticamente significativas. Se concluye que se requiere ampliar el estudio con un tamaño de muestra mayor para evaluar si las tendencias observadas se mantienen.
POLIMORFISMO PRO12ALA DEL GEN PPARγ-2 EN NIÑOS CON SUSCEPTIBILIDAD A DESARROLLAR SINDROME METABÓLICO
1. Universidad Central de Venezuela
Facultad de Medicina
Escuela de Bioanálisis
Laboratorio de Investigaciones Básicas y Aplicadas
Autor: Br. Laura Noguera
2. INTRODUCCIÓN
INTERACCIONES EN EL DESARROLLO DEL SM
PREDISPOSICIÓN GENÉTICA FACTORES AMBIENTALES 1
• Propia del individuo • Contexto cultural–social
• Mayor tendencia de desarrollar • Sedentarismo
ciertas patologías • Mala alimentación
DESORDENES
METABÓLICOS
Conjunto de alteraciones metabólicas y cardiovasculares que se producen
como consecuencia de RI y se caracteriza por:
Hipertensión Resistencia
Hipercolesterolemia Obesidad
Arterial a la Insulina
1. Amigo H. Cad. Sáude Púb. 2003;19(1): 163- 170
3. RECEPTORES ACTIVADOS POR
PROLIFERADORES DE PEROXISOMAS
PPARS
RECEPTORES DE UBICACIÓN NUCLEAR
• Controlan la expresión de genes que regulan el metabolismo lipídico, glucídico y
la proliferación y diferenciación celular.
• Involucrados en el metabolismo y almacenamiento de ácidos grasos en diferentes
tejidos.
• Son activados por ligandos: NATURALES (Ac. Grasos y eicosanoides)
SINTÉTICOS (Fibratos y TZD)
PPARα PPARβ/δ PPARγ
Alta taza de Todos los tejidos
catabolismo de Ac. Alta expresión en
Grasos tejido adiposo
Localizado en el brazo
-Músculo esquelético corto del cromosoma 3
PPARγ1
- Corazón (3p25)
- Corteza renal Abundante en el
- Hígado tejido adiposo, en
el que induce
diferenciación de PPARγ2
adipocitos PPARγ3
4. POLIMORFISMO PRO12ALA
PRO12PRO Codón 12
ATG GGT GAA ACT CTG GGA GAT TCT CCT ATT GAC CCA GAA AGC
Prolina
El receptor PPARγ 2 Pro12Pro es un receptor activado por proliferadores de peroxisomas, el
cual protege contra la ubicación de la grasa ectópica.
PRO12ALA
ATG GGT GAA ACT CTG GGA GAT TCT CCT ATT GAC GCA GAA AGC
Alanina
Estudios epidemiológicos han sugerido la existencia de una asociación entre el polimorfismo
Pro12Ala en el exón B del receptor PPARγ2, obesidad y otras alteraciones metabólicas
relacionadas con el Síndrome Metabólico2,3. Los resultados no han sido siempre concordantes.
2. Beamer B, y cols. Diabetes 1998;47:1806-1808.
3. Frederiksen L, y cols. J Clin Endocrinol Metab 2002;87:3989-3992.
5. METODOLOGÍA
POBLACIÓN
Pacientes entre 2 y 12 años que acuden al Triaje y a la consulta de
obesidad del Centro de Atención Nutricional Infantil de Antímano (CANIA)
y el Servicio de Nutrición, Crecimiento y Desarrollo del Hospital de Niños
“JM de Los Ríos”
MUESTRA
235 individuos, clasificados de la siguiente manera:
31
9
13,20% 92
3,83%
39,14%
48 Obesos
20,42%
RI
Hipercolesterolémicos
23,40%
Hipertrigliceridémicos
Sanos
55
7. EXTRACCIÓN DE
SANGRE VENOSA
Sin Anticoagulante Con Anticoagulante
• Determinación de
Glicemia, Colesterol
EXTRACCIÓN DE
Total y Triglicéridos ADN
• Insulina Método de Bunce Modificado
• Electroforesis de
Colesterol
Cuantificación de ADN
PCR
Amplificado de 102 pb.
Gen de PPARɣ2
Figura Nº 1: Electroforesis en gel de agarosa al
2 %, coloreado con BrEt. Cámara digital, equipo
Uvitec (Gel Documentation Uvitec Limited).
8. Amplificado de 102 pb.
Gen de PPARɣ2
PCR
RFLP
GCGC
Digestión con enzima Hha I
CORTE COHESIVO CGCG
5’TCTGGGAGATTCTCCTATTGGC-3’ Primer F
Mish-mash
5’TCTGGGAGATTCTCCTATTGACCCAGAAAGCGATTCCTTCACTGATACACTGT
GENOTIPO PRO12PRO
CTGCAAACATATCACAAGGTAAAGTTCCTTCCAGATACGGCTATTGGGG-3’
Primer R 5’CCTTCCAGATACGGCTATTGGGG-3’
5’TCTGGGAGATTCTCCTATTGGC-3’ Primer F
Permite el corte de la Ez. Hha I
5’TCTGGGAGATTCTCCTATTGGCGCAGAAAGCGATTCCTTCACTGATACACTGT
POLIMORFISMO PRO12ALA
CTGCAAACATATCACAAGGTAAAGTTCCTTCCAGATACGGCTATTGGGG-3’
Primer R 5’CCTTCCAGATACGGCTATTGGGG-3’
9. ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA 2% Y TINCIÓN CON
NITRATO DE PLATA
Genotipo Polimorfismo
PRO12PRO PRO12ALA
Fragmento de Fragmentos de
102 pb. restricción de:
La enzima NO 80pb.
CORTA 22pb.
Figura Nº 3: Producto de digestión del fragmento amplificado por PCR, con la enzima de restricción HhaI. En la fotografía se
muestra la electroforesis en gel de poliacrilamida al 2% coloreado con Nitrato de Plata.
1) Marcador de peso molecular DNA ladder de 25pb
2) producto de PCR sin digerir.
3) Control negativo
4) Control Pro12Ala.
5) Portador Pro12Pro.
6) Portador del polimorfismo Pro12Ala.
10. RESULTADOS
Tabla Nº 1: Características fenotípicas de los sujetos en estudio.
Control
Obesos (n=92) RI (n=55) HC (n=48) HT (n=9)
(n=31)
Glucosa 88,17±11,58* 93,43±13,63* 88,67±14,07* 92,03±13,33* 81,59±12,63
Insulina 27,73±40,11* 17,92±10,81* 12,39±10,48* 13,01±4,23* 4,42±1,22
Colesterol
167±32,45* 176,28±33,76* 205,91±21,92* 187,90±34,97* 122,28±25,41
total
LDL-c 106,60±28,41* 113,15±31,55* 137,82±26,94* 113,92±31,83* 70,53±16,33
HDL-c 38,07±10,72 38,84±10,07 42,88±11,21 37,90±9,6 40,48±10,37
TAG 109,76±95,63* 111,38±51,31* 117,47±95,18* 180,03±49,42* 54,57±29,29
11. RESULTADOS
Tabla Nro. 2: Comparación de los diferentes genotipos de PPARγ2 en niños
obesos con respecto al grupo control.
Obesos Control
P
% (n=92) %(n=31)
Genotipo PPARγ
Pro12Pro 83,7 (77) 93,6 (29) ns
Pro12Ala 16,3 (15) 6,4 (2) ns
OR= 2,8 IC 95% = 0,6 – 19,1
12. RESULTADOS
Tabla Nro. 3: Comparación de los diferentes genotipos de PPARγ2 en niños
resistentes a la insulina con respecto al grupo control.
RI Control
P
% (n=55) %(n=31)
Genotipo PPARγ
Pro12Pro 85,5 (47) 93,6 (29) ns
Pro12Ala 14,5 (8) 6,4 (2) ns
OR= 2,5 IC 95% = 0,4 – 18,1
13. RESULTADOS
Tabla Nro. 3: Comparación de los diferentes genotipos de PPARγ2 en niños
hipercolesterolemicos con respecto al grupo control.
HC Control
P
% (n=48) %(n=31)
Genotipo PPARγ
Pro12Pro 85,4 (41) 93,6 (29) ns
Pro12Ala 14,6 (7) 6,4 (2) ns
OR= 2,5 IC 95% = 0,4 – 18,7
14. RESULTADOS
Comparación de los diferentes genotipos de PPARγ2 en niños
hipertrigliceridemicos con respecto al grupo control.
HT Control
P
% (n=9) %(n=31)
Genotipo PPARγ
Pro12Pro 88,9 (8) 93,6 (29) ns
Pro12Ala 11,1 (1) 6,4 (2) ns
OR= 1,8 IC 95% = 0,1 – 31,9
15. RESULTADOS
• Tabla N°2: Distribución de frecuencia de los polimorfismos de
PPARɣ2 de acuerdo a los grupos en estudio.
Grupo
Obesos RI HT HC
Control TOTAL
(n=92) (n=55) (n=9) (n=48)
(n=31)
% n %
83,7 85,5 88,9 85,4 93,6
Pro12Pro 202 86,0
(77) (47) (8) (41) (29)
16,3 14,5 11,1 14,6 6,4
Pro12Ala 33 14,0
(15) (8) (1) (7) (2)
TOTAL 100 100 100 100 100 235 100
16. CONCLUSIONES
Se observó una mayor susceptibilidad a
desarrollar obesidad, resistencia a la
insulina e hipercolesterolemia en los
portadores del alelo Pro12Ala del gen
PPAR2, sin embargo no existen diferencias
estadísticamente significativas con respecto a
la presencia del alelo Pro12Ala con dichas
enfermedades.
17. CONCLUSIONES
Se recomienda la ampliación de este
estudio aumentando el tamaño de la
muestra, para evaluar si se
mantienen las tendencias descritas
en el presente estudio.