1. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN
LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA
DE MICROORGANISMOS
PRACTICA # 2
Guía No. 2
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Versión 1.1
PRACTICA # 2
DIVERSIDAD MICROBIANA
1. INTRODUCCIÓN
Un microorganismo, también llamado microbio (del griego μικρο, «micro»,
diminuto, pequeño y βιος, «bio», vida, ser vivo diminuto), es un ser vivo que solo
puede visualizarse con el microscopio. La ciencia que estudia los microorganismos
es la microbiología. Son organismos dotados de individualidad que presentan, a
diferencia de las plantas y los animales, una organización biológica elemental.
En su mayoría son unicelulares, aunque en algunos casos se trate de organismos
cenóticos compuestos por células multinucleadas, o incluso multicelulares.
El concepto de microorganismo carece de cualquier implicación taxonómica o
filogenética dado que engloba organismos unicelulares no relacionados entre sí,
tanto procariotas como las bacterias, como eucariotas como los protozoos, una
parte de las algas y los hongos, e incluso entidades biológicas de tamaño
ultramicroscópico, como los virus.
Los microbios tienen múltiples formas y tamaños. Si un virus tuviera el tamaño de
una pelota de tenis, una bacteria sería del tamaño de media cancha de tenis y una
célula eucariota sería como un estadio entero de fútbol.
Muchos microorganismos son patógenos y causan enfermedades a personas,
animales y plantas, algunas de las cuales han sido un azote para la humanidad
desde tiempos inmemoriales. No obstante, la inmensa mayoría de los microbios
no son en absoluto perjudiciales y bastantes juegan un papel clave en la biosfera
al descomponer la materia orgánica, mineralizarla y hacerla de nuevo asequible a
los productores, cerrando el ciclo de la materia.
2. OBJETIVOS
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6
Reconocer en placas de cultivo diferentes tipos de microorganismos, en
especial Colonias de bacterias y hongos.
Conocer y aplicar la técnica de tinción de Gram
Identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas
Observar microscópicamente mohos y levaduras.
Observar microorganismos de fermentación ácido láctica y fermentación
alcohólica a partir del kumis o yogurt.
Observar protozoarios y algas en muestras de agua

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3. CONSULTAS PRELIMINARES
3.1 Defina los principales linajes los organismos.
4. MATERIALES Y REACTIVOS
4.1 Material que debe llevar cada estudiante
 Yogur casero o probiótico
 Agua estancada
 Tajada de pan y/o fruta con
moho (dejarlo
en un sitio
húmedo y oscuro mínimo 2
semanas antes de la práctica).






Levadura de Panadería
Hisopos
Fósforos.
Guantes de nitrilo
Tapabocas
Cinta adhesiva transparente.
Lápices de colores
4.2 Material suministrado por el laboratorio
 Láminas portaobjetos y
 Cultivos de diversos hongos y
laminillas
bacterias en cajas de petri.
 Cubreobjetos.
 Mechero, Asa recta y de argolla.
Microscopio.
 Asas microbiológicas: recta y de
argolla.
4.3 Reactivos
 Solución salina
 Agua destilada
 Coloración de Gram (cristal violeta, lugol, alcohol acetona y fucsina)
 Lactofenol, Azul de Metileno, Alcohol, Aceite de inmersión
5. PROCEDIMIENTO
5.1 Observación macroscópica de colonias


Realice una descripción macroscópica de las colonias bacterianas que le
son entregadas en las cajas de petri.
Haga un cuadro donde describa la forma (puntiforme, circular, rizoide,
irregular y filamentosa), el borde (entero,ondulado o filamentoso), la
elevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada) y la
superficie (lisa o rugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva o
superficial)

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Colonia
Forma
Borde
Elevación
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Superficie
5.2 Elaboración del frotis bacteriológico
A partir de una de las colonias de los cultivos dados realice un frotis de la siguiente
manera:
 Tome una lamina portaobjetos limpia y en ella coloque una gota pequeña
de solución salina.
 Con un asa previamente esterilizada a la llama del mechero, obtenga una
muestra de una de las colonias observadas. Mezcle la muestra en la gota
de solución salina que coloco en el portaobjetos.
 Déjela secar al temperatura ambiente y fíjela pasándola por la llama del
mechero.
 Posteriormente proceda a colorear con la tinción de gram de la siguiente
manera:
5.3 Bacterias De La Cavidad Bucal
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





Prepare una lámina portaobjetos limpia y sin grasa.
Tome un escobillón desechable, páselo por el borde de la encía en la parte
que hace contacto con los dientes.
La muestra extraída con el escobillón colóquela sobre una lámina
portaobjetos.
Deje secar por sí sola la lámina durante unos minutos con el fin de definir el
frotis.
Pase lentamente el portaobjetos a través de la llama del mechero, con esto
se fija el frotis.
Deje enfriar y coloree con la tinción de Gram como se indicó anteriormente.
Deje secar la lámina y ubique las células con el objetivo de menor aumento
y luego observe con el objetivo de inmersión.
Tenga en cuenta que las bacterias Gram positivas toman coloración violeta
y las Gram negativas coloración roja.
Escriba todas sus observaciones.

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5.4 Bacterias del yogur
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Tome una lámina portaobjetos y en ella coloque una gota de agua
destilada.
Con un asa de argolla, obtenga una gota de yogur y mézclela con la gota
de agua colocada en el portaobjetos.
Deje secar completamente la lámina. Pásela 3 veces por la llama del
mechero. Tenga cuidado de no sobre calentar la muestra.
Cubra la preparación con alcohol o metanol por unos segundos para
eliminar la parte grasa.
Escurra el alcohol y deje secar al aire. Luego cubra el extendido con azul de
metileno durante 2 minutos. Lave el exceso de colorante y deje secar.
Enfoque el microscopio con el objetivo de mayor aumento e identifique los
estreptococos y los lactobacilos.
Anote sus observaciones.
5.5 Observación De Hongos
Observación de mohos: Desarrolle el siguiente procedimiento en casa 8 días antes
del laboratorio.
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
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

Prepare una solución de agua azucarada y agregue 20 gotas de esta a una
tajada de pan, déjela por espacio de media hora al aire libre.
Almacénela en una bolsa plástica y ciérrela. Guárdela en un lugar oscuro a
30°C y obsérvela di ariamente.
Cuando el pan esté enmohecido, coloque en un portaobjetos una pequeña
gota de solución de Azul de lactofenol.
Luego con un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2
cm toque la superficie del pan enmohecido.
Pegue la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.
Elimine el colorante sobrante con un papel de filtro.
Observe al microscopio con objetivo de 10X y 40X e identifique el micelio y
las hifas.
El procedimiento anterior también puede hacerlo con frutas u hortalizas
dañadas que presenten en su superficie mohos.
Escriba sus observaciones.
5.6 Observación de levaduras


Tome un poco de levadura de panadería y colóquela en un tubo de ensayo
que contenga agua con azúcar.
Incube a 37°C durante 15 minutos

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Con un gotero tome una gota del cultivo anterior
Adicione dos gotas de Azul de Lactofenol
Coloque una laminilla y elimine el exceso de colorante con papel
Observe al microscopio en los aumentos de 10X y 40X
Observe que algunas presentan gemaciones.
5.7 Observación de algas y protozoos




Tome una muestra de agua estancada con un cuentagotas y deposítela en
el centro de un portaobjetos.
Coloque un cubreobjetos.
Observe la preparación al microscopio. Mueva lentamente la preparación, e
identifique protozoos.
Escriba sus observaciones
6. Preguntas complementarias.

Investigue el fundamento de la Coloración de Gram
7. Formato de observaciones y datos importantes
Complete el siguiente cuadro conceptual:
Organismo
Tipo de célula
Principales
Características
Hábitat
Morfológicas y
Fisiológicas
Impacto
Ecológico
Bacteria
Protozoarios
Hongos
Algas
Observación macroscópica de colonias
Dibuje o coloque la fotografía en su formato de 2 o 3 de las colonias observadas,
señalando en el dibujo a qué tipo de organismo pertenece e identifique lo
siguiente.
 ¿Qué forma tienen las colonias celulares observadas?
 ¿Cuál es su color?
 ¿Qué forma tienen las colonias observadas (puntiforme, circular, rizoide,
irregular y filamentosa)
 ¿Cómo es el borde de la colonia (entero, ondulado o filamentoso)

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 ¿ Cómo es la elevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y
acuminada)
 ¿Cómo es la superficie (lisa o rugosa, mate o brillante, seca o cremosa,
invasiva o superficial)
Observación de bacterias del yogurt (coloración de gram)
Dibuje coloque la fotografía en su formato 2 o 3 de las células observadas,
señalando en el dibujo a qué tipo de organismo pertenece e identifique lo
siguiente.




¿Qué tipo de microorganismos se observan?
¿Cómo se denominan las bacterias según su forma?
¿Cómo se clasifican las bacterias según la manera de agruparse?
¿Qué color toman las bacterias de acuerdo a la coloración de gram?
Observación de mohos y levaduras
Dibuje en su formato 2 o 3 de las células observadas, señalando en el dibujo a
qué tipo de organismo pertenece e identifique lo siguiente.




¿Qué tipo de microorganismos se observan?
¿Cómo se denominan los tejidos de los hongos?
Establezca diferencias puntuales entre hongos y levaduras
Establezca diferencias puntuales entre bacterias y hongos
8. BIBLIOGRAFIA
8.1 Curtis, H. (2009). Biología Educación Media. Editorial Panamericana.
8.2 Prescott et al. 2004. "Microbiología". Madrid. McGraw-Hill Interamericana, 5a
edicion
Elaborado por:
Adriana Marcela Peña Quina
Bióloga – Docente programa de
Ecología
Revisado por:
Arnol Arias
Biólogo – Coordinador de laboratorio