Mapa conceptual del paper: "AISLAMIENTO DE BACTERIAS PRODUCTORAS DE POLIHIDROXIALCANOATOS MEDIANTE UNA COMBINACIÓN DE ENFOQUES FENOTÍPICOS Y GENOTÍPICOS"

1. CURSO: BIOTECNOLOGÍA
DOCENTE: Dr. HEBERT HERNAN SOTO GONZALES
ALUMNA: ADRIANA KHRISTAL VIGLANZONI MENDOZA
AISLAMIENTO DE BACTERIAS PRODUCTORAS DE
POLIHIDROXIALCANOATOS MEDIANTE UNA COMBINACIÓN
DE ENFOQUES FENOTÍPICOS Y GENOTÍPICOS
S.–S. Si, Y.–C. Chuang, C.-H. Chen

2. Los polihidroxialcanoatos (PHA), son un grupo de poliésteres sintetizados
por bacterias, arqueas y algunos hongos, cuando el sustrato de carbono es
superior a otros nutrientes como el N, S, P y O, muchos microorganismos
pueden acumular PHA como energía intracelular y almacenamiento de
carbono. Los PHA son biodegradables y biocompatibles, constituyéndose
como una buena alternativa a los plásticos petroquímicos, sus propiedades
también son similares a las del polietileno (PE) y polipropileno (PP).
Con el fin de satisfacer las normas industriales mínimas
para la detección de organismos potencialmente útiles para
la producción de PHA, han adoptado un enfoque polifásico
para detectar microbios ambientales que puedan producir
mcl-PHA y a su vez acumular una cierta cantidad de la
misma antes de realizar la mejora de la tensión.
Se recolectaron suelos de diferentes sitios, donde las
bacterias aisladas de estos ambientes se examinaron
para la producción de PHA, el medio utilizado para
el aislamiento de microorganismos contenía extracto
de levadura (5gl-1); triptona (8gl-1) y NaCl (2,5 gl-1).
El PH de los medios se neutralizó y esterilizó antes
de su uso, se inoculó suelo (0,5g) de cada muestra en
un matraz Erlenmeyer de 250 ml que contenía 50 ml
de medio. Los cultivos se controlaron directamente
en busca de colonias fluorescentes mediante la
exposición a luz ultravioleta para detectar la
acumulación de compuestos de almacenamiento de
lípidos, incluidos los PHA.
Para el control
negativo para las
cepas productoras de
PHA
Cupriavidus taiwanensis
Escherichia coli
Pseudomonas oleovorans
BCRC10951 (ATCC8062)
Pseudomonas nitroreducens
BCRC11041 (ATCC33634)
Pseudomonas putida KT2442
Para el control
positivo para las cepas
productoras de PHA
Instituto de Investigación y
Desarrollo de la Industria
Alimentaria en Taiwán
Universidad de Tsinghua
de Beijing en China
Universidad Yuan Ze en
Taiwán

3. Las células bacterianas se recolectaron y lavaron dos veces con 1 ml de solución
salina tamponada con fosfato estéril, el ADN se extrajo de los sedimentos
celulares mediante el métodoTriton – Prep,el cistrónde ARNr 16S seamplificó
con cebadores universales bacterianos F24 Y F25 y luego se comparó con las
secuencias disponibles en la base de datos del NBCI.
El ADN bacteriano se extrajo de los sedimentos celulares, donde los cebadores
degenerativos phal – 1 y phal – 2, que se diseñaron de acuerdo con la secuencia
de nucleótidos de los genes pha C1 disponibles en GenBank. Poco después del
programa de amplificación, las PCR se realizaron en gel de agarosa al 1% y el
ADN se tiñó con bromuro de etidio y se visualizó con luz UV de onda corta.
Sepurificaronampliconesde PCR del tamañoesperado (800 pb) a partir del gel
de agarosa de bajo punto de fusión (0,7%), los fragmentos de ADN purificados
se clonaron posteriormente en un vector de clonación, el ADN plasmídico se
aisló de E.coli transformada mediante un procedimiento de lisis alcalina.
Los PHA se recuperaron de la masa celular seca mediante tratamiento con
dodecilsulfato de sodio, estos fueron extraídos en un exceso de cloroformo a
60° C durante 24 h se sometieron a espectroscopía de infrarrojos por
transformada de Fourier (FTIR), estos se analizaron mediante análisis de
cromatografía de gases y análisis de resonancia magnética nuclear.
)
Una de las principales preocupaciones en la comercialización de PHA son los
altos costos de producción de PHA producido biológicamente en comparación
con los de la producción de materiales plásticos de base petroquímica. Los
esfuerzos para reducir el costo de producción incluyen la mejora genotípica de
las cepas microbianas de producción, el desarrollo de condiciones de
fermentación eficientes y procesos de recuperación económicos.
La incorporación de la identificación fenotípica en la estrategia de aislamiento
demostró ser un enfoque útil en nuestro aislamiento de cepas potenciales que
se utilizarán para la producción industrial de PHA.
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