Este documento presenta una ficha de laboratorio para la identificación bioquímica de Pseudomonas utilizando la prueba API 20 NE. La prueba consiste en 20 microtubos que contienen diferentes sustratos para detectar las enzimas y capacidades metabólicas de la bacteria. El procedimiento implica inocular la prueba con una suspensión bacteriana y luego incubarla para observar los resultados de las reacciones enzimáticas a través de los cambios de color. Los resultados de la práctica mostraron que la bacteria dio positivo solo para la enz

1. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y
CIENCIAS DEL MAR
FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO
POFCM0102-1 Hoja 1 de 4
CÓDIGO
MATERIA
Microbiología FMAR03749
NOMBRE David Quiñonez
PARALELO
1
TEMA DE LA PRÁCTICA
IdentificaciónBioquímicade lasPseudomonas
OBJETIVOS GENERALES:
- Establecer la metodología en la identificación de enterobacterias por medio de pruebas bioquímicas
estandarizadas y miniaturizadas.
INTRODUCCIÓN:
API® 20 NE
Permite laidentificaciónde bacilosgram negativosnopertenecientesal grupode lasenterobacterias como
por ejemploPseudomonas,Acinetobacter,Flavobacterium, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre otros. Es
una galería conformada por 20 microtubos. (Biomerieux, 2014)
Consiste en:
Sistemade elección para bacterias responsables de infecciones oportunistas adquiridas en el hospital en
constante aumento(dadoque estasbacteriasestánhaciéndose cadavezmásresistentesa los antibióticos,
es esencial una identificación precisa). (BioMérieux, 2010)
La combinación de pruebas bioquímicas estándar y pruebas de asimilación, totalmente adaptadas al
metabolismonofermentativode estasbacteriashace aestostests,laspruebasde referenciaparaeste tipo
de bacteria. (Biomerieux, 2014)
Fiabilidad garantizada por un inóculo estandarizado con una concentración bacteriana baja (0.5 MF),
evitando fallos de identificación por la presencia de cultivos mixtos y subcultivos. (BioMérieux, 2010)

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Fig1.-Prueba API 20 NE
Pueba Reacción / Enzimas Negativo Positivo
ONPG beta-galactosidasa sin color amarillo
ADH arginina deshidrolasa amarillo rojo o naranja
LDC lisina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
ODC ornitina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
CIT utilización del citrato verde
azul oscuro o
turquesa
H2S producción de H2S
sin precipitado
negro
precipitado negro
URE ureasa amarillo rojo o naranja
TDA triptófano desaminasa amarillo marrón-rojo
IND producción de indol amarillo
color rosa o anillo
rosa-rojo
VP producción de acetoína (Voges-Proskauer) sin color rosa-rojo
GEL gelatinasa sin difusión difusión de pigmento
GLU fermentación/oxidación de glucosa azul o verde amarillo
MAN fermentación/oxidación de manitol azul o verde amarillo
INO fermentación/oxidación de inositol azul o verde amarillo
SOR fermentación/oxidación de sorbitol azul o verde amarillo
RHA fermentación/oxidación de ramnosa azul o verde amarillo
SAC fermentación/oxidación de sacarosa azul o verde amarillo
MEL fermentación/oxidación de melobiosa azul o verde amarillo
AMY fermentación/oxidación de amigdalina azul o verde amarillo
ARA fermentación/oxidación de arabinosa azul o verde amarillo
OX citocromo oxidasa

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Tabla1.- Batería de pruebasAPI:Pruebasincluidasytablasde lecturacon coloracionespositivasynegativas
EQUIPOS Y MATERIALES:
-Solución salina
-Micropipeta
-Agar con Pseudomona
-Micropipeta
-Api 20 NE
-Tubo de ensayo Tubo de ensayo
PROCEDIMIENTO:
-Para la preparación del inoculo añadimos de 2 a 3ml de solución salina a la ampollo de Api, también se
podría utilizar NaCl
-Recogemos colonias de la placa y lo colocamos hasta crear una turbidez equivalente a 0.5 de Mc Farland
-
al Api enlosdiferentesmedios,estainoculacióndebe realizarsedespacioprocurandoque la suspensión se
deslice por las paredes de los medios evitando que queden burbujas.
-Cerramos la caja de incubación, esto debe estar en un aproximado de 29 ° C durante 24 horas
RESULTADOS: (Puede incluir información, características)
Solo dio positivo para el ADH
Observaciones:
-Mantener todo esterilizado al realizar la práctica.
-Al momentode verlosresultadosobservarlascoloraciones del API 20 NE y de la tabla que viene consigo.

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Conclusión:
-EL medio ADH se tornó de un color rojo por lo fue ahí que crecieron las pseudomonas aeruginosas.
-Según la tabla1. la enzima que reacciona es la arginina deshidrolasa.
Bibliografía
BioMérieux. (2010). http://www.ucv.ve. Obtenido de http://www.ucv.ve:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_SistemasAPI.
pdf
Biomerieux. (2014). http://www.biomerieux.com.ar. Obtenido de http://www.biomerieux.com.ar:
http://www.biomerieux.com.ar/servlet/srt/bio/argentina/dynPage?open=ARG_CLN_PRD&d
oc=ARG_CLN_PRD_G_PRD_CLN_29&pubparams.sform=4&lang=es_ar