Endonucleasas de Restricción Utilizadas en Biotecnología.pdf

UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
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Endonucleasas de Restricción Utilizadas en Biotecnología
ALUMNOS:
Quispe Durand, Sahury Jellitza
Curso:
Biotecnologia
Profesor:
Soto Gonzales, Hebert Hernan
VII CICLO – 2022
Ilo – Perú

Figura 1 : AbaSI.................................................................................................................................... 4
Figura 2:Afel ........................................................................................................................................ 6
Figura 3: ApeKI .................................................................................................................................... 8
Figura 4: BaeGI .................................................................................................................................. 10
Figura 5 : BbsI.................................................................................................................................... 12
Figura 7:BmgBI .................................................................................................................................. 16
Figura 8: BtgZI.................................................................................................................................... 18
Figura 9:Cac81................................................................................................................................... 20
Figura 10:CviKI-1................................................................................................................................ 22
Figura 11 : Dpnll ................................................................................................................................ 24
Figura 12;Eagl-HF .............................................................................................................................. 26
Figura 13:Dpnl................................................................................................................................... 28
Figura 14:EcoO1091 .......................................................................................................................... 30
Figura 15 : EcoRV............................................................................................................................... 32
Figura 17: FseI ................................................................................................................................... 36
Figura 19:Haell .................................................................................................................................. 40
Figura 20: HpaI .................................................................................................................................. 42
Figura 21:HP Y AV.............................................................................................................................. 44
Figura 22 : HpyCH4V.......................................................................................................................... 45
Figura 23: I-SceI................................................................................................................................. 47
Figura 24:Pf1M1................................................................................................................................ 48
Figura 25:Srfl ..................................................................................................................................... 50
Figura 26: Taql-v2.............................................................................................................................. 51
Figura 27: Xmnl.................................................................................................................................. 52
Figura 28:Zanl.................................................................................................................................... 53
Figura 29:........................................................................................................................................... 55
Figura 30:........................................................................................................................................... 57

Figura 1 : AbaSI
Propiedades y uso
Definición de unidad:Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg
de ADN del fago de tipo salvaje T4 (modificado completamente con ghm
C) en 1 hora a 25 °C en un
volumen de reacción total de 50 μl.
Condiciones de reacción:Suplemento de tampón 1X rCutSmart™ con DTT 1 mM,Incubar a 25 °C
Tampón rCutSmart™ 1X
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
20 mM Acetato de magnesio 10 mM
100 µg/ml Albúmina recombinante
(pH 7,9 a 25 °C)
Actividad en NEBuffers

NEBuffer™ r1.1: 25 %
Tampón rCutSmart™: 100 %
Compatibilidad de diluyente
Diluyente C
Búfer de almacenamiento
100 mM KCl
10 mM Tris-HCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
0,5 % Tween® 20
0,5 % IGEPAL® CA-630
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
Inactivación de calor
65°C durante 20 minutos
Sensibilidad a la metilación
Metilación de dam : No sensible
Metilación de dcm : No sensible
Metilación de CpG: No sensible
Actividad a temperatura
@37°C: 0%

Figura 2:Afel
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de pXba en 1
hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Condiciones de reacción
1X Tampón rCutSmart™
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente B
Tris-HCl 10
mM NaCl 300 mM
EDTA 0,1 mM
500 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
DTT 1 mM
pH 7,4 a 25 °C
Metilación de CpG: Bloqueada
Isosquizómeros
Aor51HI
Eco47III

Figura 3: ApeKI
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg de ADN λ en 1 hora a
75 °C en un volumen de reacción total de 50 μl.
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 75°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente B
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
500 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
No
Metilación de dam : No sensible Metilación de
dcm : No sensible
Metilación de CpG: Bloqueada por superposición
Isosquizómeros
TseI
@37°C: 10%

Figura 4: BaeGI
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50
mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
DTT 1 mM
pH 7,4 a 37 °C
Isosquizómeros
BseSI
BstSLI

Figura 5 : BbsI
Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a
37°C en un volumen de reacción total de 50 µl.
1X NEBuffer™ r2.1
Incubar a 37°C
1X NEBuffer™ r2.1
50 mM NaCl
10 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente B
Tris-HCl 10
mM KCl 300
mM DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
300 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
BbsI-HF
BbvII+
BpiI
BstV2I

Figura 6:BbvI
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de pBR322
en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente B
Tris-HCl 10 mM
200 ml NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
BseXI
BstV1I
Lsp1109I

Figura 7:BmgBI
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a
37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl.
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)
NEBuffer™ r1.1: <10 %

•Diluyente B
Tris-HCl 10 mM
200 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
AjiI
BtrI

Figura 8: BtgZI
1X tampón rCutSmart™
Incubar a 60 °C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Metilación de dam : no sensible
Metilación de dcm : no sensible
Metilación de CpG: alterada
@37°C: 50%

Figura 9:Cac81
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente B
Tris-HCl
10 mM KCl 100 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50
% Triton® X-100 al 0,1 %
200 µg/ml BSA
pH 7,4 a 25 °C
dcm : No sensible
Metilación de CpG: Bloqueada por algunas combinaciones de superposición
Isosquizómeros
BstC8I

Figura 10:CviKI-1
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de pBR322
en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM NaCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
No
Isosquizómeros
CviJI

Figura 11 : Dpnll
Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 µg de ADN λ (dam-) en 1
hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl.
•Diluyente B
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
500 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C

Metilación de dam :
Metilación de dcm bloqueada : No sensible
Isosquizómeros
Bsp143I
BssMI
BstKTI
BstMBI
Kzo9I
MboI
NdeII
Sau3AI

Figura 12;Eagl-HF
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
65°C por 20 min
dcm : No sensible
Metilación de CpG: Bloqueada por algunas combinaciones de superposición

Figura 13:Dpnl
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de
pBR322 ( dam metilado) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

o Diluyente B
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
500 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
dcm : No sensible
Isosquizómeros
Malí

Figura 14:EcoO1091
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ (digerido
con Hind III) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
KCl 50 mM
pH 7,4 a 25 °C
65°C por 20 min
Metilación de dcm : Bloqueada por superposición de
metilación de CpG: No sensible
Isosquizómeros
Dra II +

Figura 15 : EcoRV
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

Diluyente B
Tris-HCl 10 mM
200 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
dcm : No sensible
Metilación de CpG: Deteriorada por algunas combinaciones de superposición
Isosquizómeros
Eco32I
EcoRV

Figura 16 :Fnu4HI
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM NaCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
No
dcm : No sensible
Isosquizómeros
Sat Fsp4HI

Figura 17: FseI
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de pBC4 en 1
hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente B
10 mM Tris-HCl
100 mM KCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
0,5 % Tween® 20
0,5 % IGEPAL® CA-630
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
65°C por 20 min
metilación de dam : no sensible metilación de
dcm : alterada por algunas combinaciones de
metilación de CpG superpuestas: bloqueada
Isosquizómeros
RigI

Figura 18:Fspl
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
•Diluyente C

Tris-HCl 10 mM
300 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
300 µg/ml BSA
50 % Glicerol
0,15 % Triton® X-100
pH 7,5 a 25 °C
No
Isosquizómeros
Acc16I
MstI+
NsbI

Figura 19:Haell
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
KCl 50 mM
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
BshFI
BsnI
BspANI
BsuRI

Figura 20: HpaI
Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 µg de ADN λ en
1 hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
Búfer rCutSmart™: 100 %

o Diluyente A
Tris-HCl
10 mM NaCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
BsiSI
HapII
MspI

Figura 21:HP Y AV
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

Tris-HCl 10
mM NaCl 300
mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA Glicerol al
50 %
NiSO 4
0,5 mM pH 7,4 a 25 °C
dcm : No sensible
Metilación de CpG: Deteriorada por superposición
Isosquizómeros
Figura 22 : HpyCH4V
Incubar a 37°C

Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM NaCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
CviRI+

Figura 23: I-SceI
Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para escindir 1 µg de Plásmido de
Control No Linearizado pGPS2 en 1 hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente B
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
500 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
Figura 24:Pf1M1
Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 µg de ADN λ en
1 hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl.
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C

1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)
•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Metilación de dcm : Bloqueada por superposición de
metilación de CpG: No sensible

Isosquizómeros
AccB7I
Van91I
Figura 25:Srfl
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de
pNEB193-SrfI en tampón rCutSmart incubado durante 1 hora a 37 °C en un volumen de
reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

Diluyente B
NaCl 300 mM
Tris-HCl
10 mM DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
500 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
65°C por 20 min
Figura 26: Taql-v2
TaqI-v2 es una versión diseñada y mejorada de TaqI. (NEB usa la designación "v2" o "HF" en el
nombre para indicar enzimas diseñadas).

Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen TaqI clonado y modificado de Thermus aquatic
Figura 27: Xmnl
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
•Diluyente A

Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
65°C por 20 min
Isosquizómeros
asp700i
mroxi
pdmi
Figura 28:Zanl

Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
•Diluyente B
Tris-HCl 10
mM NaCl 300 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C

Isosquizómeros
AatII
Figura 29:
Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para digerir 1 µg de pXba en 1 hora a
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)

•Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Metilación de dam : no sensible
Metilación de dcm : no sensible
Metilación de CpG: alterada
Isosquizómeros
Cfr9I Pequeña
TspMI

Figura 30:
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
•Diluyente A

Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
asp700i
mroxi
pdmi

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