Informe Experimental

1. Trabajo práctico N° 3
CROMATOGRAFÍA
Docentes:
• Elalle, Claudia
• Salerno, Alejandra
Integrantes:
• Amondaray, Mariano
• Martín, Aldana
Química Orgánica I – ISP Dr. Joaquín V. González

2. Introducción teórica:
Es una técnica que permite la separación de los componentes de una
mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.
a) Retención. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla
por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido
anclado a un soporte sólido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la
mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.
c) La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaria,
mientras que la móvil atraviesa el sistema desplazando a los
componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la
magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos
fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se
distribuyan de modo distinto entre la fase móvil y la fase
estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente
retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el
flujo de la fase móvil; los que se unen débilmente a la fase
estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la
distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en
bandas o zonas discretas que pueden analizarse
cuantitativamente y cualitativamente.

3. Cromatografía en columna
La fase estacionaria se deposita en el interior de una columna de
vidrio que termina con una placa porosa que impide su paso y en un
estrechamiento con una llave. La mezcla se deposita sobre la parte
superior de la fase estacionaria mientras que la fase móvil atraviesa
el sistema. Los compuestos van saliendo por separado de la columna
y se recogen en fracciones, los mas polares quedan mas retenidos y
para que salgan generalmente hace falta aumentar la polaridad del
disolvente. El tiempo necesario para eluir un compuesto de la
columna se llama tiempo de retención.
El adsorbente más utilizado (y el que se utilizó en este caso) es el gel
de sílice. Se hizo la elución por gravedad. Cuanto más pequeñas
sean las partículas del adsorbente mas eficaz será la separación. Las
variables a tener en cuenta en la eficacia de esta técnica son:
• Diámetro de la columna y cantidad de gel de sílice (cuanto mas
alta la columna y mas gel se utilice mas lenta será la separación)
• Elección del disolvente. El mismo tiene que conducir a una buena
separación de los componentes de la mezcla en capa fina. En
ocasiones se utiliza mezcla de disolventes (como en este caso) y
se realiza una elución en gradiente.

4. Objetivos:
Comprender el fundamento y las aplicaciones de las
diferentes técnicas cromatografías
Separar una mezcla de colorantes por cromatografía en
columna
Identificar cada uno de los colorantes por cromatografía
analítica en placa delgada (TLC)
Materiales y reactivos:
Bureta (columna), vaso de precipitados, soporte universal,
doble nuez, matraz Erlenmeyer, cubas cromatográficas (se
utilizó vaso de precipitado), agarradera, algodón, probeta,
papel de filtro, balanza.
Rojo de metilo, Azul de metileno, Cloruro de metileno,
silicagel, metanol.

5. Procedimiento
Primera parte: elección de la fase móvil
por TLC
a) Se preparan cuatro cubas cromatográficas (vasos de precipitados) con 4 ml
cada una de las siguientes fases móviles:
1. Diclorometano
2. Metanol
3. Diclorometano:metanol 3:1
4. Diclorometan:metanol 30:1
b) Se preparan 4 capilares para la siembra. La mezcla líquida asciende por
capilaridad.
c) Se siembra en cuatro placas la mezcla a separar (depositando el liquido del
interior del capilar en un punto medio superior de cada placa)
d) Se hace eluir una placa en cada cuba, tapando las cubas con vidrio de reloj.
e) Según los resultados obtenidos se elije la fase móvil.
LA FASE MÓVIL MAS CONVENIENTE RESULTA SER LA DE
DICLOROMETANO:METANOL 3:1, PORQUE SE OBSERVA LA MEJOR
SEPARACIÓN POSIBLE DE LOS DOS COMPONENTES (SIN QUE ALGUNO DE
ELLOS SE HAYA DESPLAZADO MÁS ALLÁ DE LA PLACA)

6. Placas sembradas con la mezcla a
separar (tinta de marcador)
Siembras en las cubas con
distintas fases móviles
Separación de la mezcla con
diclorometano:metanol 3:1

7. Segundaparte: separacióndeloscomponentes
dela mezclaporcromatografíaencolumna
a) Se preparan 40 ml de la fase móvil elegida en una probeta (FM1) – 30 ml de
diclorometano y 10 ml de metanol.
b) Se prepara la bureta (columna), sostenida con doble nuez y agarradera al
soporte universal, se verifica que no esté trabado el robinete. Se recarga la
bureta con dos medidas de tapa de gaseosa de silicagel (golpeando
suavemente la bureta a fin de evitar la formación de columnas de aire) y se
coloca un trocito de algodón encima de la columna de silicagel y otro por
debajo, con ayuda de varilla de vidrio.
c) Se humedece la columna de silicagel con la FM1, verificando que no se seque
en ningún momento.
d) Se toma con una pipeta 0,5 ml de la muestra de colorantes a separar disuelta
en el solvente apropiado (diclorometano:metanol 3:1), se introduce en la
columna haciendo deslizar la muestra por las paredes internas de la misma
dejando que se deposite en la silicagel. Luego se abre el robinete para que
eluya ligeramente la fase móvil de manera que se vaya absorbiendo el liquido
en la superficie, sin que se seque. Luego de sembrar se coloca otro trocito de
algodón sobre la sílica para evitar que por agregado de la fase móvil se
resuspenda la sílica.

8. Cargado de la
columna (bureta)
con silicagel
Columna de
silicagel
Columna de silicagel
humedeciéndose
con la FM1

9. Evolución de la cromatografía, separación de los
colorantes de la mezcla

10. Se continúa agregando en porciones la FM1, se deja eluir
recogiendo el eluato 1 en un Erlenmeyer (o tubo de ensayo),
continuando agregando fase móvil para que no se seque la
columna. Luego, se toma la segunda fase móvil (FM2) –
DICLOROMETANO:METANOL:ÁCIDOACÉTICO 30:10:4- en la
probeta graduada y se agrega en porciones a la columna del
mismo modo que en el paso anterior, recogiendo el eluato 2
en otro tubo de ensayo. Eso sirve para aumentar la eficiencia
de la elución del segundo, al aumentar la polaridad de la fase
móvil.
Como los compuestos son coloreados, las bandas observadas
en la columna que avanzan con diferente movilidad se ven a
simple vista. Por lo tanto se pueden recoger tres fracciones: la
que corresponde al primer colorante (eluato 1), la fracción
intermedia entre ambos y la que corresponde al segundo
colorante (eluato 2). A fines prácticos, solo se recogieron la
primer y tercera muestra.

11. Eluatos recogidos
para la posterior
identificación Eluato 1

12. Tercera parte: identificación de los
colorantes separados con los testigos
adecuados por tic:
a) Se utilizan dos placas cromatográficas para sembrar
cada una con los eluatos con el testigo
correspondiente (azul de metileno y rojo de metilo)
b) Se desarrolla el cromatograma utilizando la FM1.
Coincidencia en
la
identificación
de los eluatos
(con rojo de
metilo y azul de
metileno)

13. Conclusiones
• El eluato 1 (color anaranjado) se identifica con el testigo rojo
de metilo. Esto se puede afirmar porque ambos corren del
mismo modo en la placa. Lo mismo sucede con el eluato 2
(color azul) y el testigo azul de metileno. Si fueran sustancias
distintas, se observaría diferencias en el corrimiento de las
mismas por el contacto con la fase móvil en la placa.