Aglutinación directa e indirecta. Determinaciones.

1. UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
Prácticas de Inmunología I
(200-3152)
Prof. Gey Esmeralda Partidas
Práctica N°3 AGLUTINACION (directa e indirecta):
• AD: grupos sanguíneos ABO, sistema RH
• AD: antígenos febriles
• AI: proteína C reactiva (PCR)
• AI: antiestreptolosina O (ASO / ASTO)

2. Pruebas de laboratorio utilizadas para descubrir e
identificar antígenos o anticuerpos y complejos
inmunológicos circulantes.
Clasificación:
- Directas: determinantes antigénicos intrínsecos
- Indirectas: determinantes antigénicos extrínsecos
Pruebas de AGLUTINACION

3. Materiales:
∙ Reactivos:
suspensión de eritrocitos,
suspensiones bacterianas.
 Controles: positivo, negativo.
 Antisueros (Ac monoclonales)
 Solución de buffer glicina, ph 6,2.
 Placas de vidrio de fondo claro.
 Placa de fondo escavado
(microfloculación)
 Pipetas Pasteur.
 Goteros.
 Palillos de madera.
 Cronómetro.
Técnica de Aglutinación DIRECTA:
Equipos:
 Agitador de Manzini.
 Centrifuga
 Microscopio
Procedimiento:
• En placa
• En tubo
Determinaciones:
- - Identificación de grupo sanguíneo
- -Antígenos febriles

4. Realizar la lectura:
NEGATIVO= SUSPENSION HOMOGENEA.
POSITIVO= SUSPENSION HETEROGENEA.
hemaglutinación (agregado de eritrocitos)
agregados bacterianos
Reporte:
- Identificación de grupo sanguíneo: presencia del Antígeno en la
membrana del eritrocito.
- Antígeno Febril: POSITIVO + TITULO DE DILUCION
Técnica de Aglutinación directa:

5. A B AB
Técnica en
tubo:
Grupos sanguíneo: sistema ABO, sistema RH
Homogéneo - hemaglutinado
Antisueros (Ab monoclonales)

6. Técnica en
placa:
Sistema ABO / Rh
Grupos sanguíneo ABO, sistema RH

7. anti-A anti-B anti-Rh
(D)
anti-A anti-B anti-Rh
(D)
Grupos sanguíneo ABO, RH (en placa):

8. Antígenos Febriles
RESULTADOS
El reporte de resultados se hace
tomando en cuenta la dilución más alta en la
que se observe aglutinación.
Generalmente títulos de 1:40 ó 1:80
son sospechosos de enfermedad. Sólo títulos
mayores de 1:80 pueden considerarse
probatorios de diagnóstico de enfermedad
cuando estén acompañados de la
sintomatología clínica. Títulos mayores de
1:320, son concluyentes.

9. Problemas con la interpretación clínica de las
reacciones febriles:
• El principal problema de las reacciones febriles es que al interpretar los resultados, no ha
sido posible tener un criterio uniforme y estandarizado para determinar qué clase de
anticuerpos debe considerarse un punto de corte significativo que establezca los criterios
de diagnóstico de la enfermedad.
• La presencia de reacciones cruzadas con diferentes tipos de bacterias que ha descrito en
reacciones de Widal con enterobacterias, en Huddleson con tularemia, cólera y ciertos
tipos de Yersinia enterocolitica, así como la reacción de Weil Felix en pacientes con
infecciones urinarias previas, o que presenten leptospirosis o enfermedad de Lyme.
• También existe la posibilidad de reacciones falsas negativas en pacientes que usan
antibióticos o que están bajo tratamiento con esteroides u otros tipos de
inmunosupresores.
• La detección de anticuerpos en las reacciones febriles ocurre en una etapa tardía en la
evolución de la enfermedad. Por lo general, entre la segunda y cuarta semana del inicio del
cuadro clínico. No es posible identificar el tipo de inmunoglobulina en los resultados, puede
ser IgM, IgG o IgA.

10. Materiales:
∙ Reactivo de látex: recubierto con
anticuerpos // con antígenos.
 Controles: positivo, negativo.
 Solución de buffer glicina, pH 6,2.
 Placas de vidrio de fondo oscuro.
 Pipetas Pasteur.
 Goteros.
 Palillos de madera.
 Cronómetro.
Técnica de Aglutinación INDIRECTA:
Equipos:
∙ Agitador de Manzini.
Procedimiento:
• En placa
• En tubo
Determinaciones:
• Proteína C reactiva: PCR
• Factor reumatoide
• Antiestreptolisina O (ASTO)
• Monotest
• Anti antinucleares

11. Realizar la lectura:
• NEGATIVO= SUSPENSION HOMOGENEA (1).
• POSITIVO= SUSPENSION HETEROGENEA (2).
Reporte:
POSITIVO: TITULO DE DILUCION
Técnica de Aglutinación Indirecta:

12. Técnica de Aglutinación Indirecta kits:
POSITIVO
AGLUTINACION
NEGATIVO

13. Técnica de Aglutinación Indirecta:

14. Técnica de Aglutinación Indirecta:

15. Técnica de Aglutinación Indirecta:

16. GRACIAS...