Recogida y Manipulacion de la sangre

RECOLECCIÓN Y MANEJO
DE LA SANGRE
ALVARADO PICO EDUARDO
LEONEL
2018

Al investigar la función fisiológica y las
disfunciones de la sangre es esencial
seguir una metodología precisa y exacta
para garantizar, tanto como sea posible,
que las pruebas no proporcionen una
información falsa por causa de errores
técnicos.
DACIE Y LEWIS. (2017), HEMATOLOGÍA PRÁCTICA (DÉCIMO SEGUNDA EDICIÓN),ESPAÑA:ELSEVIER

Consentimie
nto
informada
para analizar
una muestra.
La obtención
de la muestra
en la fase
pre-analítica
es el es un
paso
importante.
Se debe
utilizar los
contenedores
sanguíneos
adecuados
Evitar los
fallos en la
recolección
de la
muestra, en
su
almacenamie
nto y en su
transporte
hasta el
laboratorio.

Generalmente se utiliza sangre
venosa para la mayoría de los
exámenes hematológicos y las
pruebas químicas.
Las muestras obtenidas por
punción capilar cutánea pueden
ser igualmente satisfactorias
para algunos fines.

PRECAUCIONES ANTE EL RIESGO
BIOLÓGICO
Hay que prestar cuidado especial ante el riesgo de infección por diversos
patógenos durante todas las etapas realizadas en el laboratorio.
El operador debe utilizar EPP.
Hay que evitar lesiones al manejar jeringas agujas y lancetas, las cuales deben ser
estériles y no reutilizarlas.

PROCEDIMIENTO ESTANDAR
Los componentes de la sangre pueden alterarse
debido a diversos factores, por lo cual es importante
disponer de un procedimiento estándar para la toma y
manipulación de las muestras sanguíneas.

CAUSAS DE RESULTADOS FALSOS POR DISCREPANCIAS EN LA EXTRACIÓN DE MUESTRAS
Antes
• Haber ido al retrete en los 30 minutos anteriores; ingestión de agua o alimentos en las 2h
anteriores.
• Fumar.
• Actividad física (incluyendo el caminar rápidamente) en los 20min anteriores.
• Estrés.
• Administración de fármacos o de suplementos dietéticos en las 8h anteriores.
Durante
• Diferencias horarias (variación diurna).
• Postura (tumbado, de pie o sentado).
• Hemoconcentración por mantenimiento prolongado de la presión del torniquete.
• Exceso de presión negativa al aspirar la sangre en la jeringa.
• Tipo de tubo incorrecto.
• Sangre capilar en lugar de sangre venosa.
Manejo de la muestra
• Anticoagulante insuficiente o en exceso.
• Mezcla inadecuada de la sangre con el anticoagulante.
• Error en la identificación del paciente o de la muestra.
• Condiciones inadecuadas de almacenamiento de la muestra.
• Retraso en el transporte al laboratorio.

OBTENCIÓN DE SANGRE VENOSA
Realizada por
los
flebotomistas.
Es importante
disponer de
una bandeja
de flebotomía
con todo lo
necesario.

BANDEJA DE FLEBOTOMÍA
• Jeringas y agujas.
• Torniquete.
• Contenedores para las muestras (o sistema de tubos
al vacío); simples o con diversos anticoagulantes.
• Formulario de petición.
• Torundas con alcohol Isopropilico al 70% o con
Clorhexidina al 0,5%.
• Compresas de gasa o almohadillas de celulosa
estériles.
• Apósitos adhesivos.
• Bolsas de plástico autosellantes.
• Gradillas para mantener las muestras verticales
durante el proceso de llenado.
(También debe haber un contenedor desechable
resistente a la punción).

JERINGAS DE PLÁSTICO Y AGUJAS
DESECHABLES
Las agujas no
deben ser
demasiado
finas, grandes
o largas.
19 o 21 G para
la mayoría de
adultos.
23G para
niños.
Se puede
utilizar aguja
con alas.

CONTENEDORES DE LA MUESTRA
(TUBOS)
Los utilizados actualmente pueden
contener diversos aditivos como EDTA
dipotásico o tripotásico, disódico,
citrato trisódico, heparina o citrato
dextrosa y no contener aditivo.
Estos tubos tienen marcado
un nivel que indica la
cantidad correcta de sangre
que hay que añadir.
Los sistemas de tubos al vacío
consisten en un contenedor de vidrio
o plástico con o sin aditivo, con un
vacío definido.
La principal ventaja es su tapón
perforable por lo que no es necesario
retirarlo, minimizando de esta forma
el riesgo de emisión en aerosol del
contenido.

El sistema al vacío es útil cuando
se necesita extracción de
múltiples muestras con distintos
anticoagulantes.
El vacío controla la cantidad de
sangre que entra en el tubo,
asegurando que la cantidad sea
adecuada y correcta para la
proporción del anticoagulante.

PROCEDIMIENTO DE FLEBOTOMÍA
•Comprobar la identidad del paciente.
•Verificar que la bandeja de flebotomía contenga lo necesario.
•La sangre se extrae preferentemente de la vena antecubital o
cualquier otra visible.
•Se recomienda se limpie la piel con alcohol al 70% o Clorhexidina
0,5%.
•El torniquete debe aplicarse por arriba del sitio de venopunción y
liberarse tan pronto como la sangre empiece a fluir
(hemoconcentración).
•No se debe intentar la venopunción en una cicatriz o un
hematoma.
Flebotomista

Si se utiliza una jeringa se debe halar el
embolo de manera suave.
Las muestras con anticoagulante se
mezclan invirtiendo varias veces la
posición de los contenedores.
Evitar hemolisis o por lo contrario algún
grado de coagulación.

Si no se logra extraer la
sangre se debe mantener
la calma, considerar una
mala técnica.
Tras 2 o 3 intentos sin
éxito se debe remitir al
paciente con otro
extractor después de un
corto descanso.

Después de extraer la sangre y aflojar el torniquete, se debe
extraer la sangre y colocar una torunda estéril en el sitió de
punción, aplicando presión.
Se debe elevar el brazo tras la extracción y mantener la presión
por algunos minutos antes de comprobar el cese de la
hemorragia.
Después cubrir el sitio de punción con un pequeño apósito
adhesivo.

PROCEDIMIENTO
POSTFLEBOTOMÍA
Nuevament
e
comprobar
la
identidad
del
paciente.
Etiquetar el
formulario
de petición
y cada
muestra
extraída.
N y A, # de
hospital, FN, fecha
de recolección,
hora, (actualmente
código de barras).
Hay que
enviar los
tubos en
gradillas ,
separadas de
los
formularios
de petición.

Estos
métodos se
utilizan
cuando:
Es
imposible
obtener
sangre
venosa.
Obesidad
importante.
Niños
menores
de un
año.
Pruebas
sanguíneas
realizadas a
la cabecera
del enfermo
SANGRE CAPILAR

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA DE
SANGRE CAPILARLa punción de la piel se realiza con una aguja o con una lanceta.
Anteriormente se utilizaba el lóbulo auricular, actualmente se
desaconseja ya que tiene un bajo flujo y no es representativo de la
sangre circulante

En lactantes se puede obtener prueba satisfactoria mediante una
punción profunda de la superficie plantar del talón.

PROCEDIMIENTO
Se debe limpiar
el área con
alcohol al 70% y
dejar que seque.
Puncionar la piel
a una prof. de 2-
3mm con una
lanceta estéril
desechable.
La primera gota
se retira con una
gasa estéril seca

PROCEDIMIENTO
Se recoge la 2da y siguientes gotas ya sea directamente o en una
tira reactiva, micropipeta.
Es esencial que haya un flujo de sangre libre.
Después de su utilización las lancetas y/o agujas deben colocarse
en un contenedor resistente a la punción para su eliminación
posterior.

DIFERENCIAS ENTRE SANGRE
VENOSA Y CAPILAR
Venosa Capilar
Hto Menor mayor
Hematíes Menor mayor
Hb Menor mayor
GB (Neutrófilos) Menor Mayor (8%)
Plaquetas Mayor (9-32%)) menor

HOMOGENIZACIÓN DE LA MUESTRA
Mezclar después de la extracción.
En mezclador giratorio por 2 minutos.
Manualmente de 8 a 10 veces.
Si ha sido almacenado a 4°c se debe dejar que caliente a T°
ambiente antes de ser homogenizado.

SUERO
La diferencia entre
plasma y suero radica
en que este ultimo no
tiene fibrinógeno y ni
algunos de los
factores de la
coagulación.
El suero se obtiene en
tubos sin
anticoagulante.
Se deja que coagule
durante 1h a T°
ambiente,
Algunos tubos
contienen un
activador de la
coagulación junto con
el gel, para acelerar la
separación del suero.

Los tubos con o sin
separación del
suero se
centrifugan durante
5 minutos a 3000
revoluciones por
minuto (rpm).
Si no se va utilizar
inmediatamente se
puede mantener a
4°C hasta que se
utilice.
Se puede almacenar
el suero a -20°C
hasta 3 meses y a -
40°C o menos para
un almacenamiento
a largo plazo.
Se descongelan en
baño de agua a T°
ambiente y no se
pueden volver a
congelar.

ANTICOAGULANTES
El EDTA y el citrato sódico eliminan el calcio que es
esencial para la coagulación.
El calcio precipita como oxalato insoluble o se aglutina en una
forma no ionizada.
La heparina se une a la antitrombina, inhibiendo de esta
forma la interacción de diversos factores de la coagulación

ANTICOAGULANTES
El EDTA se utiliza
para los
recuentos
sanguíneos y el
citrato sódico
para las pruebas
de coagulación y
la VSG.
Para una mejor
conservación a
largo plazo
ácidos-citrato-
dextrosa o citrato
fosfato dextrosa.

ÁCIDO
ETILENDIAMINOTETRAACÉTICO
Las sales de Na y K son anticoagulantes potentes y
están indicadas para los trabajos hematológicos de
rutina.
Actúa quelando las moléculas de calcio de la sangre.
Quelación: concentración de 1.2 mg de sal anhidra
por ml de sangre.

ÁCIDO
ETILENDIAMINOTETRAACÉTICO
La sal dipotásica es
muy soluble (1,650 g/L)
y se utiliza de
preferencia
La sal disódica es
considerablemente
menos soluble (180
g/L).

EXCESO DE EDTA
Afecta tanto a los GR como
a los GB produciendo su
encogimiento y la
aparición de cambios
degenerativos.
Por encima de los 2 mg por ml
de sangre puede ocasionar una
reducción significativa en el Hto
y un aumento en la CHCM.

Las plaquetas se
hinchan y se
desintegren.
Da lugar a un
recuento plaquetario
artificialmente
elevado

CITRATO TRISÓDICO
•9 vol. de sangre a 1 de citrato sódico , esta
concentración es esencial ya que los cambios en
la concentración del calcio libre afectan a los
resultados de las pruebas de coagulación.
Coagulación
•4 volúmenes de sangre a 1 volumen de la
solución de citrato sódico.VSG
Concentración: 109mmol/L

HEPARINA
Se lo utiliza en urgencias
(gasometrías)
Su ventaja es que no altera el
tamaño de los hematíes y
Su uso está recomendado en
situaciones en la que es
importante reducir al mínimo la
posibilidad de lisis después de la
extracción de la sangre
Concentración de 10 a 20 UI/ml de
sangre

 Además es apropiada para el inmunofenotipado.
 No es adecuada para realizar los recuentos sanguíneos porque a
menudo induce la formación de agregados de plaquetas y de
leucocitos.

Tampoco debe utilizarse para realizar extensiones sanguíneas porque
da una débil coloración azul de fondo cuando las extensiones se
tiñen con la tinción de Romanowsky.
Además inhibe la actividad enzimática y no debe utilizarse en el
estudio de PCR con enzimas de restricción.

EFECTOS DE LA ALMACENAMIENTO SOBRE
EL RECUENTO SANGUÍNEA
A T° ambiente se producen diversos
cambios morfológicos, y es mas rápido
cuando mas elevada es la T°,
independientemente del anticoagulante.
Los recuentos de GR, GB, plaquetas y los
índices eritrocitarios permanecen
relativamente estables por al menos 8h.

CambiosMorfológicos
1H difíciles de distinguir de
frotis hechos inmediatamente
tras la extracción de sangre.
A las 3 h, los cambios pueden
ser discernibles.
Entre las 12 y 18 h estos llegar
a ser llamativos.

Algunos, pero no
todos, los neutrófilos
se ven afectados.
Sus núcleos pueden
teñirse de forma más
homogénea.
Los lóbulos nucleares
pueden separarse y el
margen citoplásmico
puede aparecer
irregular o menos
definido.
Aparecen pequeñas
vacuolas en el
citoplasma.

Nucleos teñidos de forma mas homogénea, lóbulos nucleares
pueden separarse, y borde citoplasmático menos definido

Nucleos teñidos de forma mas homogénea, lóbulos
nucleares pueden separarse, y borde citoplasmático
menos definido

Algunos o muchos de los
monocitos grandes se
desarrollan marcados
cambios.
Pequeñas vacuolas aparecen
en el citoplasma y el núcleo
se somete a una lobulación
irregular, que puede casi
cantidad a la desintegración.

Los linfocitos sufren
cambios similares en el
citoplasma, pueden
observarse algunas
vacualoas.
Los núcleos se tiñen de forma
mas homogénea de lo
habitual, y en algunos pueden
sufrir lobulaciones.

Los hematíes normales
resultan poco afectados
por permanecer hasta 6h
a T° ambiente.
Períodos superiores
producen una
espiculación (cremación)
y formación de
esferocitos.
El exceso de EDTA genera
un grado notable de
espículación a las pocas
horas.

Todos los cambios mencionados están retardados pero
no abolidos en la sangre que se mantiene a 4°C.
Además esto explica la necesidad de realizar los
extendidos lo mas rápido posterior a la obtención de la
muestra.
Sin embargo como norma se acepta su retraso hasta 3h.

APOPTOSIS
Caracteriza por
encogimiento
celular.
Condensación
citoplasmática.
Indentaciones en
el núcleo, seguido
de su
fragmentación.
Los restos
celulares forman
unas masas
basófilas extensas
(cuerpos
apoptósicos)

Los neutrófilos con un solo
cuerpo apoptósicos pueden
confundirse con hematíes
nucleados si no se valoran
las características
citoplasmáticas.
Normalmente son
eliminadas de la circulación
por fagocitosis.
Son mas comunes en las
leucemias.

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