1. Síndrome del QT prolongado
Manuel Gonzalez
Luisa Rodriguez
Viviana Mojica
2. •Enfermedad familiar caracterizada por una prolongaciòn
anormal de la repolarización ventricular.
•Alto riesgo de Taquiarritmias ventriculares.
•Con base en el patron de transmisiòn se conocen dos
síndromes clínicos :
ئMás común: Autosómico Dominante con un fenotipo
cardiaco puro (Romano-Ward3)
ئMenos común: Autosómico Recesivo, donde coexisten
anormalidades cardiacas y Sordera. (Jervell and Lange-
Nielsen4).
3. ئSCN5A: Codifica un canal de sodio cardiaco
(cromosoma 3).
ئHERG: Codifica una proteína del canal de K (Ikr).
(cromosoma 7).
ئKvLQT1: Codifica la subunidad α de IKs (cromosoma
11).
ئKCNE1:Codifica a minK, una subunidad auxiliar de Iks
(cromosoma 21).
ئEl gen ANKB del cromosoma 4 (LQT 4).
4. Tipos de LQTS
Tipo Cromosoma – Locus Gen Proteina Mecanismo alterado
LQT1 11 – 11p15.5 KCNQ1 (KVLQT1) Sub α canal K Repolarización
LQT2 7 – 7q35-q36 KCNH2 (HERG) Sub α canal K Repolarización
LQT3 3 – 3p21-p23 SCN5A Sub α canal Na Repolarización
LQT4 4 – 4q25-q27 ANKB Proteina adapatadora Anclaje de los
trasportadores de
iones
LQT5 21 – 21q22.1-p22 KCNE1 Sub β canal K Repolarización
LQT6 21 – 21q22.1-p22 KCNE2 Sub β canal K Repolarización
BIOLOGICAL RESEARCH FOR NURSING Vol. 5, No. 2, October 2003
6. Compendium of cardiac channel
mutations in 541 consecutive
unrelated patients referred for
long QT syndrome genetic
testing
David J. Tester, Melissa L. Will,
Carla M. Haglund, Michael J.
Ackerman.
Heart Rhythm 2005;2:507-517
8. Resultados: mutaciones más
frecuentemente observadas
No. Exon Nucleotido Variante Localizació No. de ptes
n
KCNQ1-LQT1
18 3 del 572-576 L191fs/90 S2-S3 7
55 7 1032 G→A SP/A344/G S6 6
-A
71 12 1571 T →G V524G C-terminal 7
75 13 1615 C →T R539W C-terminal 6
KCNH2-LQT2
43 7 1838 C →T T613M Poro 6
9. Genetic Testing in the Long QT Syndrome
Development and Validation of an Efficient
Approach
to Genotyping in Clinical Practice.
Napolitano. C, Priori. S, Schwartz. P, Bloise. R, Ronchetti.
E, Nastoli. J, Bottelli. G, Cerrone. M, Leonardi. S,
JAMA, December 21, 2005—Vol 294, No. 23
16. Mutation detection in long QT
syndrome: a
comprehensive set of primers and
PCR conditions
P Syrris, A Murray, N D Carter, W M
McKenna and S Jeffery
J. Med. Genet. 2001;38;705-710
17. Introduccion
• El metodo más comunmente usado para la
detección de mutaciones es la PCR-SSCP.
• La investigación de todos los genes no ha
sido posible porque no se han tipificado
todos los sets de primers para algunos
genes.
18. Mg 2 +
Materiales y metodos
• PCR
– Red Hot Taq DNA polimerasa
• 50 ng de DNA en 25 μl
• Concentración final 1 ´ buffer (20 mmol/l (NH4)2SO4, 75 mmol/l
Tris-HCl, pH 8.8, at 25°C, 0.01% (v/v) Tween 20, 1.5 mmol/l
MgCl2), dNTPs (0.2 mmol/l each), 0.2 μmol/l para cada primer.
• 1.25 unidades de Red Hot Taq polimerasa.
• Para mejorar la amplificación se variaba la Tº de apareamiento y la
[Mg2+]
• El programa va a iniciar con: 94°C por 3 minutos (1 ciclo), 94°C por
1 minuto, Variación de Tº (70- 60°C, 70-58°C, 65-53°C, or 60-50°C
dependiendo de las propiedades de melting de los primers.)
descendiendo 1º por ciclo, 72°C por 1 minuto (35 ciclos), 72°C por
10 minutos (1 ciclo).
19. Materiales y metodos
• PCR
– HotStarTaq DNA polimerasa
• Es un protocolo creado po Qiagen para facilitar la
amplificacion de algunos fragmentos que son
dificiles de obtener con las modificaciones de Tº.
• Este Kit también consta con un Aditivo para la PCR
conocido como Sustancia Q que facilita aun mas la
obtencion de los fragmentos.
26. Alle lic dro po ut in lo ng QT
s yndro me g e ne tic te s ting : A
po s s ible
me c hanis m unde rlying fals e -
ne g ative re s ults
Tester D, Cronk L, Carr J, Schulz V,
Salisbury B, Judson R,Ackerm an.
Heart Rhythm 2006;3:815– 821
27. •ALLELIC DROPOUT
Es una amplificación diferencial de un alelo debido
a una interrupción en el primer para detección de
SNP.
Esto como posible mecanismo de falsos negativos
como resultados de las pruebas genéticas en LQT,
comprende numerosos estudios previos con PCR.
28.
29.
30.
31. Long QT syndrome caused by a
large duplication in the KCNH2
(HERG) gene undetectable by
current polymerase chain reaction-
based exon-scanning
methodologies
Koopmann T, Alders M, Jongbloed R, Guerrero S,
Mannens M, Wild A, Bezzina C.
Heart Rhythm 2006;3:52-55
32. Introdcucción
• Las metodologías de PCR y detección de exones,
no detectan grandes rearreglos cromosomicos.
• El estudio analizó una serie de probandos
negativos para los métodos convencionales de
detección de LQTS.
• Se empleo la técnica MLPA (multiplex ligation-
dependent probe amplification) que determina el
relativo # de copias de un exon.
• Duplicación de 3.7Kb en el gen KCNH2 en una
filia holandes con LQTS
33. Materiales y métodos
• 21 Pacientes
• Análisis MLPA: Sondas para exones
KCNH2 1-4, 6, 9, 10 y 13
KCNQ1 1-6 y 8-19
• Confirmación y análisis de la gran
duplicación de KCNH2 por LA-PCR