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GUION
Uno de los términos técnicos relacionados con la pandemia actual que ha
trascendido a la población, es el de qRT-PCR, o el método que permite detectar
y dar una confirmación del diagnóstico de infección por el coranovirus SARS-
CoV-2.
El material genético de este virus es RNA por lo cual el diagnóstico de COVID-
19 (que es la abreviatura de “Enfermedad por coronavirus 2019”) es indirecto, ya
que se detecta la presencia del virus en la muestra.
Tipos de muestra
De acuerdo al Lineamiento Estandarizado para la vigilancia epidemiológicay por
laboratorio de COVID-19 los tipos de muestra para el diagnóstico de esta
enfermedad serán exudado nasofaríngeo y faríngeo en el mismo medio de
transporte (los dos hisopos en el mismo tubo que contiene el medio de
transporte); si el caso se encuentra con apoyo ventilatorio (intubado) se deberá
de gestionar el lavado bronquioalveolar y en caso de defunción la biopsia
pulmonar. Estas muestras deben mantenerse en contenedores estériles con
medio de transporte viral en red fría de 2-8 grados Celsius.
Envío y embalaje de muestras
• Las muestras de COVID-19 deben seguir el Reglamento Modelo de las
Naciones Unidas y cualquier otro reglamento aplicable dependiendo del modo
de transporte utilizado.
Tanto el Algoritmo diagnóstico del InDRE
esta imagen esta en la pagina 27 de 58
Como el Algoritmo de diagnóstico para LESP o LAVE que realizan el
panel viral respiratorio, involucran a la técnica de RT-PCR ya sea en punto
final o en tiempo real.
¿En qué consiste la prueba de RT-PCR?
A partir de cada muestra, se extrae y purifica el RNA que es el material genético
del virus. Luego se realiza un procedimiento que convierte al RNA del virus que
es de cadena sencilla, en cDNA de cadena doble. Posteriormente, se hacen
múltiples copias de este cDNA con reactivos específicos y en equipos llamados
termocicladores porque se repiten una serie de ciclos de temperatura.
La PCR no amplifica todo el material genético del virus, solo segmentos de genes
específicos (el gen E, el N y el RdRp) y que lo identifican como único y diferencian
de otros virus respiratorios. El gen E codifica para una de las proteínas de la
envuelta del virus. El gen N codifica para la proteína de la nucleocápside o
armazón proteico del virus. Y el gen RdRp, para la enzima que copia el RNA del
virus, llamada transcriptasa dependiente de RNA.
La secuencia genómica del SARS-CoV-2 y la de otros coronavirus son
parecidas, pero no idénticas. La PCR aprovecha las diferencias en los genes
mencionados para discriminar entre virus.
La tecnología tiempo real mide fluorescencia
Las copias de los genes antes empleados, se observan gracias a un compuesto
fluorescente. A mayor número de copias de cDNA, mayor fluorescencia.
La fluorescencia, acumulada a medida que transcurren los ciclos de PCR, se
registra en tiempo real con un termociclador. Que es el aparato donde se incuba
la reacción RT-qPCR. La letra q (del inglés quantitative), obviada hasta ahora,
hace referencia a que el valor de fluorescencia es cuantificable.
Terminada la qPCR y analizados los resultados, una muestra se considera
positiva por coronavirus cuando los valores de fluorescencia de los tres genes
(E, N y RdRp) están por encima de un umbral preestablecido por el InDRE.
Para finalizar …
A pesar de que el diagnóstico de COVID-19 es técnicamente posible y que se
cuenta con el aval del InDRE de al menos 2 laboratorios privados y 29
Laboratorios Estatales para realizarlo, lo mas importante es prevenir el contagio,
observando las recomendaciones de las Instituciones de Salud.
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  • 1. GUION Uno de los términos técnicos relacionados con la pandemia actual que ha trascendido a la población, es el de qRT-PCR, o el método que permite detectar y dar una confirmación del diagnóstico de infección por el coranovirus SARS- CoV-2. El material genético de este virus es RNA por lo cual el diagnóstico de COVID- 19 (que es la abreviatura de “Enfermedad por coronavirus 2019”) es indirecto, ya que se detecta la presencia del virus en la muestra.
  • 2.
  • 3. Tipos de muestra De acuerdo al Lineamiento Estandarizado para la vigilancia epidemiológicay por laboratorio de COVID-19 los tipos de muestra para el diagnóstico de esta enfermedad serán exudado nasofaríngeo y faríngeo en el mismo medio de transporte (los dos hisopos en el mismo tubo que contiene el medio de transporte); si el caso se encuentra con apoyo ventilatorio (intubado) se deberá de gestionar el lavado bronquioalveolar y en caso de defunción la biopsia pulmonar. Estas muestras deben mantenerse en contenedores estériles con medio de transporte viral en red fría de 2-8 grados Celsius.
  • 4. Envío y embalaje de muestras • Las muestras de COVID-19 deben seguir el Reglamento Modelo de las Naciones Unidas y cualquier otro reglamento aplicable dependiendo del modo de transporte utilizado.
  • 5. Tanto el Algoritmo diagnóstico del InDRE
  • 6. esta imagen esta en la pagina 27 de 58 Como el Algoritmo de diagnóstico para LESP o LAVE que realizan el panel viral respiratorio, involucran a la técnica de RT-PCR ya sea en punto final o en tiempo real.
  • 7. ¿En qué consiste la prueba de RT-PCR? A partir de cada muestra, se extrae y purifica el RNA que es el material genético del virus. Luego se realiza un procedimiento que convierte al RNA del virus que es de cadena sencilla, en cDNA de cadena doble. Posteriormente, se hacen múltiples copias de este cDNA con reactivos específicos y en equipos llamados termocicladores porque se repiten una serie de ciclos de temperatura. La PCR no amplifica todo el material genético del virus, solo segmentos de genes específicos (el gen E, el N y el RdRp) y que lo identifican como único y diferencian de otros virus respiratorios. El gen E codifica para una de las proteínas de la envuelta del virus. El gen N codifica para la proteína de la nucleocápside o armazón proteico del virus. Y el gen RdRp, para la enzima que copia el RNA del virus, llamada transcriptasa dependiente de RNA. La secuencia genómica del SARS-CoV-2 y la de otros coronavirus son parecidas, pero no idénticas. La PCR aprovecha las diferencias en los genes mencionados para discriminar entre virus.
  • 8. La tecnología tiempo real mide fluorescencia Las copias de los genes antes empleados, se observan gracias a un compuesto fluorescente. A mayor número de copias de cDNA, mayor fluorescencia. La fluorescencia, acumulada a medida que transcurren los ciclos de PCR, se registra en tiempo real con un termociclador. Que es el aparato donde se incuba la reacción RT-qPCR. La letra q (del inglés quantitative), obviada hasta ahora, hace referencia a que el valor de fluorescencia es cuantificable. Terminada la qPCR y analizados los resultados, una muestra se considera positiva por coronavirus cuando los valores de fluorescencia de los tres genes (E, N y RdRp) están por encima de un umbral preestablecido por el InDRE. Para finalizar … A pesar de que el diagnóstico de COVID-19 es técnicamente posible y que se cuenta con el aval del InDRE de al menos 2 laboratorios privados y 29 Laboratorios Estatales para realizarlo, lo mas importante es prevenir el contagio, observando las recomendaciones de las Instituciones de Salud.