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2. Rol del Laboratorio de microbiología
• Apoyo en el diagnóstico de las enfermedades infecciosas
1. Identificación del agente etiológico: selección del mejor examen
y de la mejor muestra.
2. Informe de susceptibilidad a antimicrobianos.
3. Contribuir al control de la resistencia bacteriana
4. Implementación de tecnología moderna: tiempo de
respuesta, sensibilidad y especificidad.

3. Métodos de diagnóstico
microbiológico
• Observación c/s tinciones
• Cultivos: Identificación/sensibilidad • Mayor rapidez
• Detección de antígenos • Alta calidad
• Detección de anticuerpos: serología • Costo/beneficio
• Detección de ácidos nucleicos

4. Tinción de Gram
• Se debe solicitar siempre
• De bajo costo y gran utilidad:
1.Orientación diagnóstica rápida
2. Características inflamatorias
3. infecciones mixtas (anaerobios)
• Sensibilidad analítica: 100.000 bacterias/ml muestra

5. Baciloscopía
•Se debe solicitar en TODO paciente con síntomas
respiratorios.
• De bajo costo y gran utilidad:
1. Rápida
2. Fácil disponibilidad
3. Indice de infectividad
Tinción de Ziehl Neelsen
• Sensibilidad analítica: 5.000 a 10.000 bacilos por ml de
muestra.

6. Tinciones para Hongos
• Diagnóstico de infecciones invasoras en muestras clínicas es difícil.
• Blanco de calcoflúor es una tinción específica para hongos (quitina).
• Mejora la sensibilidad

7. Cultivos
• Se considera el método de referencia porque permite la
confirmación de género y especie y la determinación de la
susceptibilidad a drogas.
• En el caso de bacterias y hongos la automatización ha permitido
disminuir los tiempos de respuesta (mejores sistemas de detección).

8. Cultivos bacterianos y de hongos
• Requiere bacterias y hongos viables
• Requieren medios de transporte, especialmente anaerobios
• Medios líquidos son más sensibles que los sólidos
• Una buena alternativa en punciones y muestras líquidas es la
inoculación en botellas de hemocultivos

9. Cultivos bacterianos y de hongos
• Diagnóstico macroscópico y microscópico
• Identificación y sensibilidad a drogas
Diferentes plazos de entrega:
Cultivo corriente: 48 horas
Cultivo anaeróbico: 7 días
Cultivo de hongos: 7 días a 4 semanas
Cultivo de Micobacterias: 8 semanas

10. Susceptibilidad bacteriana
• La resistencia bacteriana es un problema emergente
Staphylococcus aureus R a meticilina
Streptococcus pneumoniae R a penicilina
Enterococcus R a Vancomicina
E. coli y K. pneumoniae R a todos los -lactámicos (ESBL)
• Test de susceptibilidad:
Estandarización de AAM ensayados e informados
Depende de complejidad de los pacientes y patrones locales de R
Resultado requiere reporte selectivo e interpretación adecuada
Kirby-Bauer
S -I - R

11. Susceptibilidad bacteriana
Concentración inhibitoria mínima
Métodos: Dilución en agar
Ej. Cefazolina, Escherichia coli
Cortes : Sensible= 2 g/ml Intermedio =4- 8 g/ml
Resistente: 16
2 4 8 16 CIM 2 S 2
2 4 8 16 CIM = 4 I 4
2 4 8 16 CIM = 8 I 8
2 4 8 16 CIM = 16 R16
2 4 8 16 CIM 16 R 16

13.  Cumplimiento de la fase pre analítica
 Adecuada muestra
 Medios de cultivos atemperados
 Libres de agua de condensación.
 Trabajar en una campana de
bioseguridad muestras.
 Uso de mecheros o incinerador
Fernández y cols. 2005. Gestión de calidad en el laboratorio

14. •Recogida de muestras
• Responsabilidad y supervisión
facultativa
• Normas de asepsia
• Muestra representativa del proceso
• Cantidad/Recipiente/Identificación
correcta
•Evitar contaminación con flora saprófita
• Retrasar tratamiento
•Transporte rápido (refrigeración)

15. ORINA
•Frasco de boca ancha y tubo con
vacío
•Porción media de 1ª orina de la
mañana
• Limpieza escrupulosa de genitales
•La bolsa (niños) se cambiará cada
hora
• Volumen mínimo 10 ml para cultivo
bacterias y Levaduras
•50 ml para tuberculosis

16. HECES (coprocultivo)
•No se admitirán heces formes
• Frasco de boca ancha
•2-5 g de heces recientes
(pus, moco, sangre)
•Remitir rápidamente al
laboratorio
mantener a 4ºC si se demora el
envío

17.  Exudados /Abscesos
 Limpiar la superficie con suero fisiológico
y gasa
 Recoger el pus mediante jeringa y aguja
aspirando de las zonas profundas
 Cuando sea necesario instilar suero y
aspirarlo nuevamente
 Sólo cuando lo anterior no sea posible
se utilizaran escobillones enviando

19.  Uso de asas calibradas ( recuento de
microorganismos ).
 Buena siembra en estría. ( trabajar con
colonias perfectamente aisladas ).

20. Elston D. 2008. Clin Lab Med 28:173-177

21.  Selección de medios de cultivo
 Generales, selectivos, selectivos-
diferenciales.
 Necesidades particulares de cada
hospital
 Comunicación laboratorio – área
clínica .
 Realización de tablas de siembra.
2007. Clinical Microbiology Procedures Hanbook 2nd Edition .
ASM

22.  PRIMERA ETAPA :
 Observación de
la colonia.
 Ahorro de tiempo
y dinero en el Dx.
 Morfología, color
 Interacción con
el medio (
hemolisis )

23.  Medios cromogénicos
 Sensibilidad a antibióticos:
S. pneumoniae S opt
S. pyogenes S bac
 Pruebas complementarias:
Oxidasa,catalasa,coagulasa
 Aglutinación con antisueros
específicos.

24.  Basa en realización pruebas bioquímicas
 A partir de cultivos puros.
 Bioquímicas: manuales o por sistemas
semi automatizado.

25.  Toma de muestra y adecuado
transporte.
 Manipulación de la muestra
rigurosamente.
 Control de material y equipos:
Temperatura estufas, refrigeradores
Campanas de incubación
Pipetas automáticas: calibración
Sistemas automatizados

26.  Esterilidad del medio: se comprobara
en cada lote
 Eficacia del medio (utilización de
cepas ATCC).

27.  Los reactivos se controlan cada vez que
se preparan o nuevo frasco
 Colorantes de tinción, fijadores
reveladores de pruebas bioquímicas.
 Eficacia se comprueba con
microorganismos que dan respuesta
positiva y negativa.
 Discos para pruebas diferenciales
refrigerado con un desecante

28.  Control de discos de antibiograma :
cepas cuya sensibilidad conocida: E.
coli ATCC 25922, Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853.
 Control de antisuero y antígenos
 Control de resultados intralaboratorios e
interlaboratorios.

29.  Captura de resultados : manual o
automática.
 Validación de resultados
 Envió de resultados impresos-
internet
 Impresión de Diarios de Trabajo.

30.  Tiempo de respuesta del lab para sol
urgentes ( min )
 Proporción de reediciones diarias de
informes ya entregados:
No. reediciones de informes/No. total
informes
 Proporción de informes reclamados por
demoras.
 Indicadores herramientas objetivas evaluar las disposiciones
establecidas y ver posibilidades de mejora.