El documento describe diferentes métodos para el diagnóstico de tuberculosis, incluyendo baciloscopia, cultivo, y pruebas moleculares. Explica cómo la baciloscopia tiene alta especificidad pero baja sensibilidad, mientras que el cultivo y las pruebas moleculares como GeneXpert son más sensibles. También discute el uso de diferentes muestras como esputo, líquido pleural, y hisopados para el diagnóstico.

1. TIPO DE MUESTRA: SENSIBILIDAD Y
ESPECIFICIDAD
MR Marden Chávez Nolorbe
SERVICIO DE NEUMOLOGÍA
SANTA ROSA III

2. El diagnóstico de certeza de tuberculosis puede hacerse en forma
confiable en el laboratorio demostrando la presencia de bacilos por
medio de la baciloscopia (examen microscópico), el cultivo o una
prueba molecular.
MANUAL PARA EL DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE LA TUBERCULOSIS. PARTE 1: MANUAL DE ACTUALIZACIÓN DE LA BACILOSCOPÍA/
Programa “Fortalecimiento de la Red de Laboratorios de Tuberculosis en la Región de las Américas” -- Lima: ORAS - CONHU; 2018.

3. Vizcaíno-Salazar G. Sensibilidad y Especificidad. Medicina basada en la evidencia y análisis de diseños de investigación clínica. Maracaibo,
Venezuela: EDILUZ; 2002: 57-71.

4. MANUALES DE CAPACITACION PARA EL MANEJO DE LA TUBERCULOSIS. DETECCION DE CASOS DE TBC. MODULO 2. MINSA

5. MANUALES DE CAPACITACION PARA EL MANEJO DE LA TUBERCULOSIS. DETECCION DE CASOS DE TBC. MODULO 2. MINSA

6. BACILOSCOPÍA
• Para que la baciloscopia sea positiva es preciso que la muestra tenga
como mínimo, entre 5.000 y 10.000 bacilos por mililitro de muestra.
• Utilizando la tinción fluorescente, este número puede ser tan bajo
como 1.000 bacilos por mL
• La baciloscopia no es específica para M. tuberculosis, sino que revela
la presencia de bacilos del género Mycobacterium
Evaluation of Baciloscopy, Cultivation and Polimerasa Chain Reaction for the Diagnostic of Lung Tuberculosis Nava Paz, Orlando1; Hassanhi, Manzur2 y
Prieto, Lisbeth3

7. • En los países de alta endemia de tuberculosis, una baciloscopia positiva
tiene muy alto valor predictivo para el diagnóstico. Es decir, es muy bajo el
riesgo de equivocarse al diagnosticar tuberculosis en esta circunstancia.
• El rango de sensibilidad de la baciloscopia, oscila entre 50 – 80% y la
especificidad es virtualmente del 100%.
• Características: sencillez y reproductibilidad en cualquier medio, rapidez,
bajo costo, elevada especificidad, y la delimitación de contagiosidad.
Gording F, Slutkin G. The validity of acid fast smears in the diagnosis of pulmonary tuberculosis Arch Path Lab Med 1990; 114: 1025-1027.

8. Coloración de Ziehl Neelsen
Baciloscopia
Mide de 0.2-0.7 x 1-10 um

9. GlicoLipidos
Pared del Mycobacterium
LipoArabinoManano (LAM)
Ácidos Micolicos
Peptidoglicano
ÁrabinoGalactano
Manofosfoinositida
Membrana
Citoplasmática

10. • Colorante: Fucsina fenicada al 0,3%
• Decolorante: Acido clorhídrico al 3% en alcohol etílico o ácido
sulfúrico al 25%
• Colorante de contraste: Azul de metileno al 0,1%

11. TINCIÓN FLUORESCENTE
• Colorante: Auramina-O al 0,1 %
• Decolorante: Acido clorhídrico al 0,5% en alcohol etílico
• Colorante de contraste: Permanganato de potasio al 0,5% o azul de
metileno al 0,3% %

13. Auramina - rodamina Ziehl neelsen
Ulukanligil M, Aslan G, Tasci S. A comparative study on the different staining methods and number of specimens for
the detection of acidfast bacilli. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2000; 95: 855-8.

14. Auramina - rodamina Ziehl Neelsen
10 LAMINAS -- 2 HORAS 30 MINUTOS

15. Ulukanligil M, Aslan G, Tasci S. A comparative study on the different staining methods and number of specimens for
the detection of acidfast bacilli. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2000; 95: 855-8.

16. • La coloración de Ziehl-Neelsen (ZN) ha sido la técnica más
empleada para el diagnóstico de tuberculosis en los países de
América Latina durante los últimos 100 años. Comparado con la
microscopía de fluorescencia (MF), la microscopía convencional
tiene como ventaja que requiere un entrenamiento más sencillo,
ya que la capacidad de identificar el bacilo por esta metodología
es más fácil.
• La MF es al menos 10% más sensible que la microscopía de ZN.

17. • Nocardia sp
• Rhodococcus sp
DIAGNOSTICO DIFRENCIAL

18. NOCARDIA ASTEROIDES
• Con la coloración
ziehl Neelsen se
colora de rosado
pálido.
• Coloración gram:
bacilos gram
positivos.

19. Coloración gram:
coco bacilos gram
positivos
Rhodococcus equis
Coloración Ziehl
Neelsen rojo
intenso

20. LA MUESTRA
• El envase
• Boca ancha: de no menos de 5 cmde diámetro,
• Capacidad entre 30 ml y 50 ml
• Cierre hermético.
• La primera muestra detecta aproximadamente el 80% de los casos
positivos, la segunda agrega un 15% y la tercera un 5% más. Por cuestiones
técnicas y operativas, los organismos internacionales recomiendan la
obtención de dos muestras.

22. MÉTODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO
• Inducción de esputo: Aunque no sea mucoso, el material recolectado
debe ser examinado por baciloscopia y cultivo, y mediante una
prueba molecular rápida (como el Xpert MTB/RIF).
• La sensibilidad del diagnóstico aumenta hasta 87%.
Así mismo, el Esputo Inducido tiene mayor sensibilidad que el Lavado
Gástrico.
• Lavado gástrico: se aspira con jeringa mediante SNG muy suavemente
el contenido gástrico (usualmente 3-5 ml).
Brown M., Varia H., Bassett P., Davidson R.N., Wall R., Pasvol G. Prospective study of sputum induction, gastric washing, and bronchoalveolar
lavage for the diagnosis of pulmonary tuberculosis in patients who are unable to expectorate. Clin Infect Dis. 2007; 44:1415-1420.

23. Rentabilidad del lavado broncoalveolar en el
diagnóstico de la tuberculosis pulmonar
La rentabilidad conjunta del cultivo del LBA y del BAS es del 90%. La
obtenida con el LBA (83,3%) fue superior a la aportada por el BAS
(73,3%), porcentajes muy superiores al 53,8% proporcionado por el
cultivo del esputo prebroncoscopia y al 60% obtenido en el esputo
postbroncoscopia.
The value of bronchoalveolar lavage in the diagnosis of pulmonary tuberculosis J.A. Caminero Luna*,1, F. Rodríguez de Castro*, I. Campos-Herrero**,
J.M. Pavón Monzó. Mayo 1994. páginas 236-239

24. • Orina: previa higiene externa con agua, el paciente debe recoger no
menos de 50 ml de la primera micción de la mañana (PRIMER
CHORRO DESECHAR).
• Líquido cefalorraquídeo
MÉTODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO

25. LÍQUIDOS PLEURAL, ASCÍTICO, PERICÁRDICO, ARTICULAR Y OTROS
• Número de muestras: todas las que el médico considere conveniente
• Envase: estéril, de capacidad adecuada para la cantidad de la muestra
• Uso de anticoagulante: puede extraerse mediante el uso de una jeringa
heparinizada o, eventualmente, luego de extraído el líquido en una jeringa,
puede colocarse en un recipiente estéril y agregarse dos gotas de citrato de
sodio al 10% o de oxalato de potasio al 10% por cada 10 ml de muestra
• Biopsias y material resecado uno o dos mililitros de solución fisiológica o
agua destilada estéril para evitar la desecación. No agregar formol para el
estudio bacteriológico porque es letal para el bacilo.
• Sangre dos muestras de 10 ml de sangre venosa en días consecutivos.

26. • La baciloscopia en LP es poco rentable, pues únicamente de un 10 a
un 25% de las muestras son positivas.
• La sensibilidad del cultivo es del 25-75%. El valor de ADA en líquido
pleural tiene una sensibilidad del 92% y una especificidad del 90%,
pero va a depender de la prevalencia de la enfermedad en la
población.
LÍQUIDOS PLEURAL
Liang QL, Shi HZ, Wang K, Qin SM, Qin XJ. Diagnostic accuracy of adenosine deaminase in tuberculous pleurisy: a meta-analysis. Respir Med. 2008;
102(5): 744-54.

27. CULTIVO DE MICOBACTERIAS
EN MEDIOS SOLIDOS EN MEDIOS LIQUIDOS
1. Lowenstein Jensen
2. Ogawa
1. Middlebrook 7H9
El cultivo es una técnica que tiene mayor sensibilidad (70-90%)
Evaluation of Baciloscopy, Cultivation and Polimerasa Chain Reaction for the Diagnostic of Lung Tuberculosis Nava Paz, Orlando1; Hassanhi, Manzur2 y
Prieto, Lisbeth3

28. MEDIO DE LOWENSTEIN JENSEN
Crecen todas las micobacterias,
excepto Mycobacterium leprae
• M. tuberculosis
• M. no tuberculosas (MNT)
Basta que existan más de 10 bacilos/ ml. en
muestras digeridas y concentradas, para que sea
positivo

29. COMPLEJO MYCOBACTERIUM
TUBERCULOSIS
• Las colonias son secas,
rugosas, color cremosa,
en miga de pan

30. • Crecimiento lento: De 2 a 4 semanas.
• Niacina positiva: Carece de las enzimas necesarias para convertir la
niacina a ribonucleotido de niacina.
• Reducen los nitratos a nitritos.
• Catalasa positiva a medio ambiente.
• Catalasa negativa después de calentar el cultivo a 68°C durante 20
minutos.
• Poseen pirazinamidasa (permite la diferenciación de M. tuberculosis
de M. bovis
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
CARACTERISTICAS
GuÍa de la Tuberculosis para Médicos Especialistas. José A. Caminero Luna. 2003

31. CULTIVO DE MICOBACTERIAS
EN MEDIOS LIQUIDOS
Tienen una mayor sensibilidad que los medios sólidos, sobre todo:
• Mayor rapidez en la detección del crecimiento micobacteriano,
acortando 2 a 3 semanas el resultado.
• Sin embargo, sus limitaciones más importantes son sus mayores tasas
de contaminación, la dificultad para reconocer cultivos mixtos y la
incapacidad de observar la morfología de las colonias.
GuÍa de la Tuberculosis para Médicos Especialistas. José A. Caminero Luna. 2003

32. MÉTODOS RADIOMÉTRICOS (SISTEMA BACTEC)
Detectan automáticamente el crecimiento micobacteriano
midiendo la cantidad de CO2 producido por la
metabolización de sustratos (ácidos grasos) marcados
con 14C. Se utilizan viales conteniendo 4 ml de medio
7H12 de Middlebrook, que admiten inóculos de hasta 0,4
ml.
GuÍa de la Tuberculosis para Médicos Especialistas. José A. Caminero Luna. 2003

33. GuÍa de la Tuberculosis para Médicos Especialistas. José A. Caminero Luna. 2003

34. MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
PRUEBAS RÁPIDAS

35. ETAPAS DEL PCR

36. GENES DE RESISTENCIA

37. GENOTYPE
Realizada a partir de muestra directa de esputo tiene una
sensibilidad de 95,7% para rifampicina, 95,8% para
isoniacida y 95,3% para TB-MDR. La misma prueba
molecular a partir de cultivos tiene una sensibilidad de
100% para detectar resistencia a rifampicina, 97,5% para
isoniacida y 96,9% para TB-MDR
Asencios L, Galarza M, Quispe N, Vásquez L, Leo E, Valencia E, et al. Prueba molecular Genotype R MTBDR plus, una alternativa para la detección
rápida de tuberculosis multidrogorresistente. Rev Peru Med Exp Salud Pública 2012; 29 (1): 92-8.

38. GENOTYPE
Lectura de los productos amplificados
al final de la prueba mediante
HIBRIDACION INVERSA EN TIRA
PASO 1
PASO 2
Amplificación del ADN Mediante
PCR estándar.

39. HIBRIDACION INVERSA
EN TIRA

40. PCR Tiempo Real

41. SONDA DE BEACON

42. PASO 1
+
PASO 2
Amplificación del ADN y
lectura de los productos
amplificados al final de
cada ciclo mediante
FLUOROMETRIA
PCR Tiempo Real

43. PCR Tiempo Real
para detectar TBC y resistencia a RFP
GENEXPERT MTB/RIF

44. GENEXPERT
La sensibilidad del Xpert MTB/Rif en muestras
pulmonares es de 88% para BK (+), 68% para BK (-),
con una especificidad de 99%.
World Health Organization. Xpert MTB/RIF assay for the diagnosis of pulmonary and extrapulmonary TB in adults and children, WHO Policy
update. Geneva. 2004.

46. SOSPECHA DE TBC-MDR EN
ADULTOS Y NIÑOS
VIH CON SOSPECHA DE TBC o
TBC-MDR (Niño: Asp. Gástrico)
MENINGITIS TBC
RECOMENDACIÓN FUERTE

47. TBC GANGLIONAR o TBC EN TEJIDO
SINTOMATICO RESPIRATORIO CON
BKD NEGATIVO o RX ANORMAL
RECOMENDACIÓN CONDICIONAL
NO RECOMENDADO EN TBC PLEURAL

48. Para las muestras extra pulmonares en adultos la OMS
recomienda:
• Como prueba de diagnóstico inicial, en líquido cefalorraquídeo, en
pacientes sospechosos de meningitis tuberculosa.
• Para muestras de ganglios linfáticos y otros tejidos de pacientes en los
que se sospeche una TB extra pulmonar.
• En el caso de los niños, la OMS recomienda:
• Con sospecha de TB-MDR o TB/HIV
• En los que se sospeche TB pulmonar
World Health Organization. Xpert MTB/RIF assay for the diagnosis of pulmonary and extrapulmonary TB in adults and children, WHO Policy
update. Geneva. 2004.

51. Diagnóstico de tuberculosis latente
Tuberculin Skin Test (TST)
Interferon Gamma Release Assays aprobado por la FDA

52. Interferon Gamma Release Assay
• IFN-γ son liberados de linfocitos T cuando son estimuados con antigenos
especificos de TB.
• Los antigenos especificos de TB incluyen:
• ESAT 6
• CFP-10
• TB 7.7
• Los IFN-γ liberados son medidos en el plasma.
• La sensibilidad es alrededor del 75%, la del test de tuberculina 70%. En
cuanto a la especificidad de alrededor de 98%, la del test de tuberculina,
66%.

53. 1. ESAT-6
2. CFP-10
QUANTIFERON TB
Evidencia la respuesta inmune contra ciertos
antígenos específicos de Mycobacterium
tuberculosis (ausentes en la vacuna BCG).
Por lo tanto pueden resultar más específicas
que la prueba de tuberculina.
Pai M, Zwerling A, Menzies D. Systematic review: T‐cell‐based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection: an update. Annals of internal medicine. Aug 5
2008;149(3):177‐184.

54. ESAT-6 CFP 10Mitogen
Control
TMB
COLOR
Stage 1 Whole Blood Culture
Stage 2 IFN-gamma ELISA
Nil
Control
Incubate → INF-
from sensitized T-
cells
Draw blood
+ heparin
Aliquot blood
& add antigen
Harvest plasma
from above settled
cells
Measure [ IFN- ] in
‘Sandwich’ ELISA
Computerized
interpretation
QUANTIFERON TB
La posibilidad de contar con el resultado en menos de 24 horas no esta sujeto a errores de interpretación.
Sin embargo, una desventaja es que la muestra debe procesarse en un lapso menor a ocho horas.
Pai M, Zwerling A, Menzies D. Systematic review: T‐cell‐based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection: an update. Annals of internal medicine. Aug 5
2008;149(3):177‐184.