Este documento describe los diferentes tipos de microscopía, incluyendo la microscopía de luz, microscopía electrónica y los principales tipos de microscopía de luz como la microscopía de campo claro, contraste de fases, fluorescencia, luz polarizada, campo oscuro y confocal. Explica brevemente los principios y aplicaciones de cada tipo.

2. Microscopio,del griego: "mikro" = pequeñoy
"scopeõ"= mirar (para mirarcosas pequeñas)
MICROSCOPÍA
MICROSCOPÍA
DE LUZ
MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
seclasifican en:
Deacuerdocon la radiación queutilizan

4. La naturaleza de la luz
• Puede ser descrita mediante dos modelos:
– Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James
Clerk Maxwell)
– Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza
corpuscular ó fotónica (Albert Einstein)
• Forma parte del espectro electromagnético
• Luz blanca está constituida por varios colores diferentes (Isaac
Newton)
Espectro electromagnético

5. ESPECTRO VISIBLE
ESPECTRO
ELECTROMAGNÉTICO
Luz visible
 Forma parte de una estrecha franja que va
desde longitudes de onda de 400 nm (violeta)
hasta los 700 nm (rojo). (0.4 – 0.7 mm)

6.  El espectro de luz visible puede ser percibido
por el ojo humano y su frecuencia determina su
color.

7. Las Lentes
• Objetos que concentran o hacen
diverger los rayos de luz
• Existen dos tipos principales de
lentes:
 Convergentes: forman imágenes
reales
 Divergentes: forman imágenes
virtuales
Lentes convergentes
Lentes divergentes

8.  Amplificación Vacía:
Incremento de la imagen sin que pueda percibirse mayores
detalles.
Amplificación total: Dado por el producto dela lente
ocularporel objetivo.
Amplificación: Aumento deltamaño de la imagen.
Conceptosen microscopía
Ocular 10x
Objetivo 10x
Aumento Total 100x
Poderde Resolución: Medida de la capacidad para
verpuntos vecinos como entidades diferentes. El
límite de resolución del microscopio deluzes de 0.2
micrómetros (0.22 μm) ó 200nm.

9. • Milímetro: milésima parte del metro (mm)
• Micrómetro: milésima parte del milímetro (mm)
• Nanómetro: milésima parte del micrómetro (nm)
• Angstrom: décima parte del nanómetro (Aº)
Medidas Microscópicas

11. Microscopio
compuesto
fabricado en
1751 por
Magny.

12. El microscopio compuesto
• Instrumento óptico que se usa para
aumentar o amplificar las imágenes
de objetos y organismos no visibles
a simple vista.
• Se utiliza para examinar objetos
transparentes o cortados en
láminas tan finas que se
transparentan
• Está conformado por tres sistemas:
1. Iluminación
2. Óptico
3. Mecánico

13. Formación de la imagen
LENTE INTRAOCULAR
Genera la imagen sobre la retina que es la que el cerebro interpreta
LENTE OCULAR
Amplifica la imagen anterior y forma una IMAGEN VIRTUAL
LENTE OBJETIVO
Amplifica la imagen y forma: IMAGEN REAL E INVERTIDA
CONDENSADOR
Concentra los rayos dispersos e ilumina solo la muestra
FUENTE DE LUZ
Imprescindible para que funcione el microscopio

16. • El contraste lo proveela tinción de las
muestras
Imágenes con microscopio
de campo claro
1. Campo claro,brillanteo luminoso:
Laluz provenientede la fuente convergesobre la muestrase forma un
campobrillante alrededor de la imagen de la muestra.

17. MICROSCOPIOSDECAMPOCLARO,BRILLANTEÓ LUMINOSO
Microscopio óptico convencional Microscopio óptico convencional con doble óptica para
aprendizaje

18. TEMPORALES
FIJAS
Muestra+Colorante +
Mediode Montaje
Muestra+ Fijadores + Tinción + Medio de
Montaje
Cubreobjeto
Portaobjeto

19. • Permiteobservarmuestrasvivas,ocarentesde color.
• sin uso de colorantes
2. Contrastede Fases:
Conviertela diferencia de índices de
refracciónen diferencias de intensidad.

20. Fibroblastos teñidos con el fluorocromo
FITC
Bacillussubtilis esporulando
teñidos con FITC, DAPIy
βgalactosidasa.
3. Fluorescencia:
Utiliza moléculas fluorescentes que al iluminarlas con radiación invisible, emiten radiación
visible.
Utiliza luz de longitud deonda corta (uv) para excitar los electrones dela muestra.

21. La muestra se “tiñe” con una sustancia fluorescente (fluorocromos) queabsorbe la energía de las
ondas cortas dela luz y emite la luz de longitudes deondas más largas (verde).

22. • Se basa en la birrefringencia (emite
brillantez) de los objetos.
• Utiliza luz polarizada plana.
• Las muestras se colocan entre dos
láminas polaroid que tienen sus
direcciones de vibración
perpendiculares
Cristales deácido uricoobservados con microscopio deluz
polarizada
4. DE LUZ POLARIZADA:
.

24. 5. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
• Dispositivo que permite transmitir la luz de forma
circular, dejando el centro oscuro.
• Con esto conseguimos que el fondo de la muestra
aparezca negro y los especímenes brillantes.
• El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así
visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como
las partículas de polvo iluminadas por un rayo de sol
que se cuela en una habitación cerrada.

25. • Las porciones transparentes del
espécimen quedan oscuras,
mientras que las superficies y
partículas se ven brillantes, por la
luz que reciben y dispersan en
todas las direcciones
• Se utiliza para analizar elementos
biológicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con
iluminación normal, sin fijar la
muestra, es decir, sin matarla.

26. Utiliza muestras
de cortes seriados
teñidas con
fluorescencia, para
reconstruir una
imagen
tridimensional
6.Confocal:Combina la microscopía fluorescente con el análisis
electrónico de la imagen para obtener imágenes tridimensionales.

27. Microscopio confocal

28. MICROSCOPIA
OPTICA
CAMPO CLARO Requiere tinciones
CONTRASTE DE FASES
Permite diferenciar
densidades, no
tinciones
FLUORESCENCIA
Utiliza luz UV, usa
fluorocromos
DE LUZ POLARIZADA Produce birrefringencia
CAMPO OSCURO
Permite ver muestras
vivas, no tinciones
CONFOCAL Forma imágenes 3D