El documento proporciona una introducción al microscopio óptico básico, describiendo sus partes principales, como el objetivo, ocular y fuente de luz. Explica que utiliza lentes para formar imágenes ampliadas de objetos pequeños mediante la refracción de la luz. También describe conceptos clave como el aumento y poder de resolución, e introduce diferentes tipos de microscopios como de campo claro, campo oscuro y contraste de fases.

1. Uso básico del
Microscopio Óptico
Javiera Inostroza Zúñiga
Gustavo González Valenzuela

2. Microscopio, del griego:
"mikro" = pequeño y
"scopeõ" = mirar (para mirar
cosas pequeñas)

3. El microscopio óptico básico está compuesto
por partes mecánicas, ópticas y de iluminación:
Ópticas Iluminación Mecánicas
Lente objetivo Fuente de luz Revólver
Lente ocular Condensador* Platina
Prismas Diafragma Macrométrico
Micrométrico
Tornillo del carro
Tubo
Base
Pinzas

4. Estructura y partes básicas del microscopio óptico

5. Fundamentos ópticos del microscopio

6. El microscopio utiliza la propiedad de la
refracción de la luz para formar imágenes
Índice de refracción (n)
Agua = 1.3300
Aceite de inmersión = 1.5150
Fluorita = 1.4340
Vidrio (crown) = 1.5200

7. Elementos necesarios para formar una
imagen:
 Fuente de iluminación
 Muestra
 Sistema de lentes

8. La Luz
Puede ser descrita mediante dos modelos:
Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James Clerk
Maxwell)
Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza corpuscular
ó fotónica (Albert Einstein)

9. La Luz visible
Corresponde sólo a una pequeña fracción del espectro
electromagnético que va desde longitudes de onda del
color violeta de 400 nm hasta el rojo de 750 nm

10. Los Lentes
 convergentes: concentran los rayos del haz de luz
hacia el punto del foco.
 divergentes: dispersan los rayos del haz de luz.

11. Diagrama general del microscopio compuesto

12. Aumento y Poder de Resolución
Aumento: relación lineal entre el tamaño de la
imagen formada y el objeto
Aumento lateral del objetivo Aumento angular del ocular
Aumento total = aumento objetivo x aumento ocular

13. Aumento Vacío: incremento de la imagen sin que pueda
percibirse mayores detalles.
Amplificación Amplificación vacía

14. Poder de resolución (d): distancia mínima
entre dos puntos del objeto que permite que
se observen separados
λ ≈ 560 nm
Apertura numérica (NA) e Índice de
refracción (n)

16. Modo de uso del microscopio
 Objetivo de menos
aumento en el eje
central
 Platina en su posición
mas baja
 Prender
 Diafragma abierto

17.  Colocar muestra
 Regular la luz
con el diafragma

18. Proceso de enfoque
 Subir la platina con
 el macrométrico
 Observar con objetivo
menor
 Usar micrométrico
 Una vez enfocado pasar el
siguiente aumento

19. Enfocar:
 Hacer coincidir plano focal
del condensador con el del
objetivo
 La muestra debe quedar en
el plano focal

20.  Enfocar con
micrométrico.
 * Pasar a lente de
inmersión
 Luego de usar limpiar el
objetivo

21. ¿Por qué usar objetivo de inmersión?
 Angulo de apertura.
 Angulo de apertura en
objetivo seco es mayor
en que en inmersión.
 *Ley de Snell

22. Recomendaciones
 Estar relajado
 Mantener distancia con
lo oculares
 Ajustar oculares
 Ver con ambos ojos

23. Tipos de microscopios
 Campo claro
 Campo oscuro
 Contraste de fases
 Interferencia
 Polarización
 * Fluorescencia

24. Campo claro
 Usado con más
frecuencia
 Resolución para
estructuras mayor a 0,2
μm
 Células teñidas y con
pigmentos
 Fácil de usar y costo
accesible

25. Campo oscuro
 Estructura iluminada sobre
fondo oscuro
 Para observar células vivas ,
de pequeño tamaño o que
no se pueden teñir.
 Desventajas: mayor costo
por condensador especial,
preparación más compleja
de la muestra y no permite
ver muchas estructuras
celulares internas.

26. Campo oscuro
fundamentos
 Condensador especial
 Apertura numérica del
condensador mayor
que la del lente objetivo

27. Contraste de fases
 Facilita la observación de
estructuras internas,
permite ver células vivas de
forma inmediata.
 Transforma la diferencia
entre los distintos índices
de refracción de la muestra
en diferencias de intensidad
lumínica.

28. Contraste de fases
Condensador con anillo de fase y placa de
fase en el objetivo.

29. Contraste de fases
La propiedad de dos ondas de interferir entre
ellas genera imágenes contrastadas.

30. Contraste de fases

31. Contraste de interferencia
diferencial (de Nomarski)
 Filtro polarizador: hace vibrar el haz
en un solo plano
 Prisma Wollaston #1: separa el haz en
dos y en planos distintos en 90°
 Objeto: desfasa el haz que lo
atraviesa, y el que no servirá como
referencia
 Prisma Wollaston #2: desfase final de
¼ de longitud de onda (no se
interfieren porque están en planos
diferentes)
 Filtro analizador: rota el plano de las
dos ondas luminosas, los hace
coincidir y se produce la interferencia

32. Contraste de interferencia
diferencial (de Nomarski)
Determinación dela masa
por unidad de superficie
del material observado

33. Microscopio de polarización
 Identificación de sustancias
cristalinas o fibrosas con
alto orden molecular
 *Birrefringente: varios
índices de refracción,
dependiendo de la
orientación molecular del
objeto, interacciona de
diferente forma con la onda
luminosa

34. Microscopio de polarización
 Polarizador y
analizador.

35. Microscopio de polarización