El documento describe los enterococos, incluyendo su definición, características, especies comunes, presencia en el ambiente, y métodos para su detección. Los enterococos son estreptococos fecales que crecen a temperaturas entre 10-45°C y resisten condiciones adversas. El método Enterolert detecta enterococos mediante la hidrólisis de un sustrato fluorogénico por la enzima β-glucosidasa que producen. Los resultados de la validación del método mostraron una alta sensibilidad, especificidad y ef

1. Enterococos

2. Definición
Los enterococos son un subgrupo de
los estreptococos fecales con
morfología cocoide, gran positivos,
catalasa negativos, anerobios
facultativos cuya temperatura de
crecimiento oscila entre 10 y 45°C
crecen a una temperatura de 41°C ±
0.5°C.

3. Características
Crecen en caldos de
cultivo conteniendo 6.5%
de cloruro de sodio
pH 9.6
Homofermentivos, sin
producción de gas
Resisten temperaturas de
60°C durante 30 min
Hidrolizan la enzima β-D-
glucosido por la actividad
de la enzima β-
glucosidasa con
producción de
fluorescencia azul a 366
nm.

4. Características
Son mas persistentes que E. coli y bacterias coliformes en condiciones
ambientales adversas; además, son altamente resistentes a la
desecación por lo que son de gran utilidad como indicadores biológicos
de contaminación.

5. Especies de
enterococos
Enterococcus faecalis
Enterococcus faecium
Enterococcus durans
Enterococcus mundii

6. Presencia en el ambiente
E. faecalis 77.05%
E. faecium 3.85%
E. solitarius 1.51%

7. Posibles
falsos
positivos
Aerococcus viridans
Streptococcus sp.
Pediococcus pentasaseus
Bacillus sp.
Abiotrophia elegans

8. Especificaciones
Debido a los cambios en la taxonomía del
genero Streptococos y la aparición de nuevas
especies dentro del genero Enterococos se ha
dado un nuevo enfoque a este indicador y se
ha propuesto en la actualidad el termino
Enterococos y Estreptococos intestinales para
referirse a bacterias de origen fecal, de estos
dos géneros que son utilizados como
indicadores.

9. Método de
sustrato
cromogénico
El método de sustrato cromogénico se fundamenta
en el uso de sustratos cromogénicos hidrolizables
para la detección de las enzimas del grupo
Enterococo, E. faecium y E. faecalis. Cuando se utiliza
este método, el grupo se define como todas las
bacterias que poseen la enzima beta glucosidasa
capaces de romper el sustrato cromogénico, dando
como resultado una liberación del cromógeno,
produciendo fluorescencia cuando el liquido es
expuesto a la luz ultravioleta.

10. Reacción
Los enterococos E. faecalis y E. faecium poseen la enzima β-d
glucosidasa, esta enzima hidroliza el sustrato β-d glucósido, el cual se
encuentra enlazado a un reactivo fluosrescente. Este reactivo presenta
fluorescencia aplicando luz ultravioleta si solo hay actividad de la
enzima sobre el sustrato, el 4-metil-umbeliferil.
En el mismo momento en que la enzima tiene acción catalizadora sobre
el β-d glucósido se presenta la fluorescencia.
En caso de no haber presencia de Enterococos la enzima no estará
presente y por lo tanto al final del proceso de incubación la muestra no
presentara fluorescencia.

11. Fundamento del Enterolert
Emplea un indicador nutriente que emite fluorescencia cuando es metabolizado
por las bacterias del grupo Enterococo. La tecnología del sustrato definido evita la
necesitad de utilizar azida de sodio utilizada en los métodos tradicionales.
El sustrato cromogénico tal como el orto-nitrofenil-β-D galactopiranosido (ONPG) u
otro equivalente, es empleado para detectar la enzima β-glucosidasa, la cual es
producida por bacterias del grupo Enterococo.
La enzima β-glucosidasa hidroliza al sustrato y provoca el cambio de color, el cual
indica y sustenta una prueba positiva después de 24 h sin procedimientos
adicionales.

12. Fundamento del Enterolert
En lo que se refiere a Enterococos, un sustrato fluorogénico como el 4-
metilumbeliferil-(β-D-glucoronido) (MUG) es utilizado para detectar la enzima β-
glucosidasa. La enzima β-glucosidasa hidroliza el sustrato porduciendo
fluorescencia cuando el liquido es expuesto a la luz ultravioleta de onda larga (365
nm)

13. Validación del Enterolert
Diseño comparable al método
ISO 7899-2:2000 Water Quality-
Detection and enumeration of
intestinal enterococci, part 2:
membrane filtration method.
Cepas utilizadas en la validación
fueron tanto gran positivas
como gran negativas
(Enterococcus faecium y
Enterococcus faecalis)
presentando reacción de color
verde al enterolert

14. Resultados
Característica Resultados
Sensibilidad 92%
Especificidad 98%
Falsos positivos 2%
Falsos negativos 7%
Eficiencia 95%
Selectividad -0.3

15. Conclusión
El método presenta una datos
aceptables en un rango amplio.
La selectividad presenta un valor
más alto que el valor sugerido de -
1.
Los datos obtenidos presentan
una alta eficiencia.
La identificación de los datos
indica que el método de enterolert
recupera un rango amplio de las
especies de enterococcus.