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ESTUDIOS INMUNOLOGICOS
DEL DONANTE Y DEL
RECEPTOR DE TRASPLANTE
RENAL
MR3 NEFROLOGIA DIEGO PORTOCARRERO
 TRASPLANTE RENAL MEJORA
SUPERVIVENCIA DEL PACIENTE
CON ERC
 PRINCIPAL BARRERA: RESPUESTA
INMUNE FRENTE AL ORGANO
TRASPLANTADO
 IMPORTANTE CONOCIMIENTO DEL
SISTEMA INMUNE, ESTUDIO
DEDIFERENTES PRUEBAS
(METODO – EVOLUCION - USO –
INDICACIONES)
 INMUNOBIOLOGIA DEL TRASPLANTE
• CPH Y HLA
• RECONOCIMIENTO ANTIGENICO
 ESTUDIOS INMUNOLOGICOS DEL DONANTE Y RECEPTOR DE TRASPLANTE RENAL
• TIPIFICACION DEL HLA
• DETECCION DE ANTICUERPOS CIRCULANTES
• PRUEBA CRUZADA
HLA
COMPLEJO PRINCIPAL DE
HISTOCOMPATIBILIDAD Y HLA
 GLICOPROTEINAS DE MEMBRANA:
PRESENTAR ANTIGENOS A
CELULAS T
 “IDENTIFICACION CELULAR”
 ELEVADO POLIMORFISMO
(MULTIPLES ALELOS DE CADA GEN
EN LA POBLACION) – POLIGENIA
(REGION DEL GENOMA MAS
DENSAMENTE POBLADO)
 GENES CODIFICADORES (HLA):
CROMOSOMA 6
COMPLEJO PRINCIPAL DE
HISTOCOMPATIBILIDAD Y HLA
RECONOCIMIENTO ANTIGENICO
 FASE EFECTORA
 FASE DE RECONOCIMIENTO: INDUCCION DE LA RESPUESTA.
VIA DIRECTA (AGUDO) E INDIRECTA (CRONICO)
TIPIFICACION DEL HLA
 RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y
EVOLUCION DEL INJERTO
 METODOS SEROLOGICOS:
PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI :
CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC)
BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA
 METODOS MOLECULARES:
MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS).
IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS
EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS:
• SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION
(PCR – RFLP)
• BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP:
SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE
TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER
• PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE :
HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO
• PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING
(NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
TIPIFICACION DEL HLA
 RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y
EVOLUCION DEL INJERTO
 METODOS SEROLOGICOS:
PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI :
CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC)
BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA
 METODOS MOLECULARES:
MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS).
IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS
EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS:
• SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION
(PCR – RFLP)
• BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP:
SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE
TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER
• PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE :
HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO
• PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING
(NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
TIPIFICACION DEL HLA
 RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y
EVOLUCION DEL INJERTO
 METODOS SEROLOGICOS:
PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI :
CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC)
BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA
 METODOS MOLECULARES:
MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS).
IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS
EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS:
• SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION
(PCR – RFLP)
• BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP:
SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE
TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER
• PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE :
HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO
• PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING
(NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
TIPIFICACION DEL HLA
 RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y
EVOLUCION DEL INJERTO
 METODOS SEROLOGICOS:
PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI :
CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC)
BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA
 METODOS MOLECULARES:
MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS).
IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS
EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS:
• SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION
(PCR – RFLP)
• BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP:
SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE
TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER
• PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE :
HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO
• PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING
(NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
TIPIFICACION DEL HLA
 RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y
EVOLUCION DEL INJERTO
 METODOS SEROLOGICOS:
PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI :
CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC)
BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA
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MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS).
IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS
EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS:
• SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION
(PCR – RFLP)
• BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP:
SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE
TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER
• PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE :
HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO
• PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING
(NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
COMPATIBILIDAD HLA ENTRE
DONANTE Y RECEPTOR
 A MAYOR COMPATIBLIDAD MENOR
RIESGO DE RESPUESTA INMUNE
 SE PERSIGUE COMPATIBILIDAD DE LOCI
DR, A Y B ( ULTIMAMENTE C Y DQ)
DETECCION DE ANTICUERPOS
CIRCULANTES
DETECCION DE ANTICUERPOS
CIRCULANTES
 DIRIGIDOS ESPECIFICAMENTE FRENTE A LOS
ANTIGENOS LEUCOCITARIOS HUMANOS
 SE PRODUCEN COMO RESPUESTA A ANTIGENOS HLA
ALOGENICOS (EMBARAZOS, TRANSFUSIONES, TX
PREVIOS)
 PACIENTES EN LISTA DE ESPERA DEBEN SER
SOMETIDOS A UN ESTUDIO (TRIMESTRALMENTE O
ANTE CUALQUIER EVENTO SENSIBILIZANTE) PARA
DETECTAR LA EXISTENCIA, EVOLUCION Y
ESPECIFICIDAD DE ANTICUERPO ANTI HLA
 EQUILIBRIO ENTRE SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD: A
MAS ANTICUERPOS MENOS POSIBILIDAD DE
ENCONTRAR DONANTE COMPATIBLE
 2 TIPOS:
• ANTIGENOS NO ESPECIFICO: CROSSMATCH POR CDC
Y CROSSMATCH POR CITOMETRIA DE FLUJO
• ANTIGENO ESPECIFICO: ELISA, CITOMETRIA DE FLUJO
CON PERLAS Y LUMINEX (DSA)
DETECCION DE ANTICUERPOS
CIRCULANTES
 DETECCION DE AC POR CITOTOXICIDAD:
EMPLEA MICROLIFOTOXICIDAD DE TERASAKI  SE ENFRENTA EL
SUERO DEL RECEPTOR A UN PANEL REPRESENTATIVO DE LINFOCITOS
DE LA POBLACION  SE DETERMINA EL NRO DE DONANTES CONTRA
LOS QUE REACCIONA EL SUERO (PORCENTAJE DE CELULAS MUERTAS)
 PANEL REACTIVE ACTIVITY (PRA)
TIENE BAJA SENSIBILIDAD
OBEJTIVO DEL PRA:
• CONOCER EL GRADO DE SENSIBILIZACION ANTES DE UN
TRASPLANTE, DE SER ASI CONOCER QUE AC SE HAN
PRODUCIDO.
• HACER UN SEGUIMIENTO POST TRASPLANTE POR POSIBLE
RECHAZO O POSIBLE 2DO TRASPLANTE
HIPERSENSIBILIZADO MAYOR DE 80%: PACIENTE HIPERINMUNIZADO
MENOR POSIBILIDAD DE TRASPLANTARSE, MENOR SUPERVIVENCIA
DEL INJERTO Y MENOR SUPERVIVENCIA DEL PACIENTE  POR ESO SE
HACE PRIODICAMENTE. TITULOS ALTOS DE AC  REACCION CONTRA
ANTIGENOS SIMILARES
AHORA SE USA EL cPRA  SE BASA EN ANTIGENOS HLA
IDENTIFICADOS  SE CALCULA A PARTIR DE LOS HLA
PREDOMINANTES EN LA POBLACION  REPRESENTA EL PORCENTAJE
DE DONANTES QUE EXPRESAN HLA PROHIBIDOS
DETECCION DE ANTICUERPOS
CIRCULANTES POR FASE SOLIDA
 EN FASE SOLIDA (NO SE USA CELULAS)
 POR CITOMETRIA DE FLUJO
DETECTA ANTICUERPOS CON ANTICUERPOS CONJUGADOS A
FLUOROCROMOS (LA FLUORESCENCIA LA HACE UNA TECNICA MAS
SENSIBLE)
 ELISA: INMUNOPRECIPITADOS DE GP DE HLA EN POCILLOS DE
UNA MICROPLACA
 SE USA TAMBIEN MICROPARTICULAS (MICROESFERAS) DE
POLIESTIRENO QUE LLEVAN EN LA SUPERFICIE MOLECULAS DE
HLA.
 LUMINEX ADEMAS DE FLUOROCROMO (SEÑAL POSITIVA 
SENSIBILIDAD) SE USAN MICROPARTICULAS DE COLOR
(ESPECIFICIDAD)
VENTAJAS:
CUANTIFICAR POR INTENSIDAD DE LA FLUORESCENCIA : INTENSIDAD
MEDIA DE FLUORESCENCIA (MFI)  UMBRAL ENTRE 3000 Y 5000 PERO
OJO CON EFECTO PROZONA (ALTAS [ ] DE AC ENMASCARADAS POR
BAJO MFI POR EXCESIVO ANTI HLA)
DETALLA ESPECIFICIDADES ANTIGENICAS : ANTIGENOS PROHIBIDOS Y
PERMITIDOS
DETECCION DE ANTICUERPOS
CIRCULANTES POR FASE SOLIDA
 EN FASE SOLIDA (NO SE USA CELULAS)
 POR CITOMETRIA DE FLUJO
DETECTA ANTICUERPOS CON ANTICUERPOS CONJUGADOS A
FLUOROCROMOS (LA FLUORESCENCIA LA HACE UNA TECNICA MAS
SENSIBLE)
 ELISA: INMUNOPRECIPITADOS DE GP DE HLA EN POCILLOS DE
UNA MICROPLACA
 SE USA TAMBIEN MICROPARTICULAS (MICROESFERAS) DE
POLIESTIRENO QUE LLEVAN EN LA SUPERFICIE MOLECULAS DE
HLA.
 LUMINEX ADEMAS DE FLUOROCROMO (SEÑAL POSITIVA 
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CUANTIFICAR POR INTENSIDAD DE LA FLUORESCENCIA : INTENSIDAD
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BAJO MFI POR EXCESIVO ANTI HLA)
DETALLA ESPECIFICIDADES ANTIGENICAS : ANTIGENOS PROHIBIDOS Y
PERMITIDOS
DETECCION DE ANTICUERPOS
CIRCULANTES
 ANTICUERPOS DONANTE
ESPECIFICO: PRESENCIA DE
ANTICUERPOS DIRIGIDOS
CONTRA ANTIGENOS HLA
EXPRESADOS EN LOS
ORGANOS DEL DONANTE:
PREFORMADOS O DE NOVO.
PRINCIPAL FORMA DE DAÑO :
ACTIVACION DEL
COMPLEMENTO (citotoxicidad
y activacion de endotelio
vascular)
 AUMENTA EL RIESGO DE
PERDIDA DEL INJERTO
DETECCION DE ANTICUERPOS
CIRCULANTES
 ANTICUERPOS DONANTE
ESPECIFICO: PRESENCIA DE
ANTICUERPOS DIRIGIDOS
CONTRA ANTIGENOS HLA
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ORGANOS DEL DONANTE:
PREFORMADOS O DE NOVO.
PRINCIPAL FORMA DE DAÑO :
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 AUMENTA EL RIESGO DE
PERDIDA DEL INJERTO
PRUEBA CRUZADA
PRUEBA CRUZADA (CROSSMATCH,
XM)
 CONSISTE EN EL ANALISIS DE LA SENSIBILIZACION
ESPECIFICA DEL RECEPTOR CONTRA EL DONANTE :
DETECCION DE AC PREFORMADOS
 POR LINFOCITOTOXICIDAD (XM-CDC) 1 HR - 1HR
15MIN
• INCUBAR SUEROS DEL RECEPTOR CON LINFOCITOS
DEL DONANTE: SI SE PRODUCE LISIS MAYOR AL 20%
(AC CONTRA AG DEL DONANTE)  ELEVADO RIESGO
DE RECHAZO HIPERAGUDO
• SE HACE PRUEBA CON EL SUERO MAS REACTIVO
HISTORICAMENTE Y EL MAS RECIENTE
• PRUEBA CRUZADA ACTUAL NEGATIVA + PRUEBA
CRUZADA HISTORICA POSITIVA ??? SE CONTINUA SI ES
QUE PRUEBA HISTORICA TIENE MAS DE UN AÑO
• HAY AC NO DIRIGIDOS CONTRA EL SISTEMA HLA (EN
ENDOTELIO CONTRA CEL DEL ENDOTELIO) ANTI MICA.
NO SE DETECTAN POR PERO SI POR LUMINEX
PRUEBA CRUZADA (CROSSMATCH,
XM)
 CONSISTE EN EL ANALISIS DE LA SENSIBILIZACION
ESPECIFICA DEL RECEPTOR CONTRA EL DONANTE :
DETECCION DE AC PREFORMADOS
 POR LINFOCITOTOXICIDAD (XM-CDC) 1 HR - 1HR
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• INCUBAR SUEROS DEL RECEPTOR CON LINFOCITOS
DEL DONANTE: SI SE PRODUCE LISIS MAYOR AL 20%
(AC CONTRA AG DEL DONANTE)  ELEVADO RIESGO
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• SE HACE PRUEBA CON EL SUERO MAS REACTIVO
HISTORICAMENTE Y EL MAS RECIENTE
• PRUEBA CRUZADA ACTUAL NEGATIVA + PRUEBA
CRUZADA HISTORICA POSITIVA ??? SE CONTINUA SI ES
QUE PRUEBA HISTORICA TIENE MAS DE UN AÑO
• HAY AC NO DIRIGIDOS CONTRA EL SISTEMA HLA (EN
ENDOTELIO CONTRA CEL DEL ENDOTELIO) ANTI MICA.
NO SE DETECTAN POR PERO SI POR LUMINEX
PRUEBA CRUZADA (CROSSMATCH,
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 CONSISTE EN EL ANALISIS DE LA SENSIBILIZACION
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• SE HACE PRUEBA CON EL SUERO MAS REACTIVO
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• PRUEBA CRUZADA ACTUAL NEGATIVA + PRUEBA
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• HAY AC NO DIRIGIDOS CONTRA EL SISTEMA HLA (EN
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QUE PRUEBA HISTORICA TIENE MAS DE UN AÑO
• HAY AC NO DIRIGIDOS CONTRA EL SISTEMA HLA (EN
ENDOTELIO CONTRA CEL DEL ENDOTELIO) ANTI MICA.
NO SE DETECTAN POR PERO SI POR LUMINEX
PRUEBA CRUZADA
 POR CITOMETRIA DE FLUJO (CF XM)
 SE USAN AC ANTI IGG CONJUGADOS A
FLUOROCROMO
 VENTAJA: DETECTA AC A TITULOS
BAJOS Y AC QUE NO ACTIVAN EL
COMPLEMENTO
 DESVENTAJA: MENOS ESPECIFICO
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PRUEBA CRUZADA VIRTUAL (VXM)
 CONOCER HLA DEL DONANTE Y AC EN EL SUERO DEL RECEPTOR  SI EL DONANTE TIENE AG PROHIBIDO PREVISIBLEMENTE PRUEBA
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 EVITANDO USAR CDC O CITOMETRIA
 VENTAJAS:
• GANAR TIEMPO Y VER SI EL ORGANO ES VALIDO PARA UN RECEPTOR EN OTRA CIUDAD.
• AÑADE MAYOR PRECISION AL CROSSMATCH
• INDICADA EN PACIENTES SENSIBILIZADOS
• MEJOR ELECCION PAREJA D-R (MAYOR ESPECIFICIDAD)
• MENOR TIEMPO DE ISQUEMIA FRIA
 DESVENTAJAS:
• REQUIERE UNA TIPIFICACION EXACTA Y COMPLETA DEL HLA DEL DONANATE Y TIPIFICACION EXACTA DE TODOS LOS AC ANTI HLA DEL
RECEPTOR (COSTOS)
• POSIBILIDAD DE NEGAR UN ORGANO A UN PACIENTE QUE PODRIA SER TRASPLANTADO CON EXITO
• XM CDC (-) SE CORRESPONDE CON MUY ALTA FRECUENCIA A VXM (-) PERO SI XM (+) Y VXM (-) ???
SELECCION DE ANTICUERPOS
BASADA EN EPITOPOS:
LOS AC SOLO RECONOCEN
CIERTAS REGIONES
INMUNOGENICAS EN TODA LA
MOLECULA DEL HLA (EPITOPOS):
TRIPLETS O EPLETS, Y SE UNEN
POR REGIONES DETERMINANTES
DE COMPLEMENTARIDAD (CDR) 
PARATOPO … EL SIGUIENTE PASO
TENER UNA LISTA COMPLETA DE
ESOS EPITOPOS PARA USARLOS
EN LA COMPATIBILIDAD
CONCLUSIONES
 CUANTIFICAR Y MINIMIZAR LA PERDIDA DEL INJERTO A CORTO Y LARGO
PLAZO
 LOS RESULTADOS NO SOLO EVITAN TRASPLANTES DE ALTO RIESGO, SINO
QUE ADEMAS AYUDAN EN LA ELECCION DE UN TRATAMIENTO
ADECUADO DE ACUERDO A CADA NIVEL DE RIESGO
 PARA DETERMINAR LOS ALOANTICUERPOS EXISTEN DIFERENTES
METODOS CON DIFERENTE SENSIBILIDAD Y DIFERENTE VALOR
PRONOSTICO, UNOS DETERMINAN EL RIESGO DE RECHAZO
HIPERAGUDO, OTROS EL RIESGO DE PERDIDA DE INJERTO EN
RETRASPLANTES
BIBLIOGRAFIA
 Molina J, Navas A, Aguera. Avances en inmunologia del trasplante renal.
NefroPlus 2018;10(2):11-19.
 Tait BD, Hudson F, Cantwell L, Brewin G, Holdworth R, Bennett G, Jose M.
Review article: Luminex technology for HLA antibody detection in organ
transplantation. Nephrology 2009; 14: 247-254.
 Lim WH, Wong G, Heidt S, Claas FHJ. Novel aspects of epitope matching and
practical application in kidney transplantation. Kidney Int. 2018;93:314-24.
 Terasaki PI, Ozawa M, Castro R. Four-year follow-up of a prospective trial of
HLA and MICA antibodies on kidney graft survival. Am J Transplant 2007; 7:
408-415.

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  • 1. ESTUDIOS INMUNOLOGICOS DEL DONANTE Y DEL RECEPTOR DE TRASPLANTE RENAL MR3 NEFROLOGIA DIEGO PORTOCARRERO
  • 2.  TRASPLANTE RENAL MEJORA SUPERVIVENCIA DEL PACIENTE CON ERC  PRINCIPAL BARRERA: RESPUESTA INMUNE FRENTE AL ORGANO TRASPLANTADO  IMPORTANTE CONOCIMIENTO DEL SISTEMA INMUNE, ESTUDIO DEDIFERENTES PRUEBAS (METODO – EVOLUCION - USO – INDICACIONES)
  • 3.  INMUNOBIOLOGIA DEL TRASPLANTE • CPH Y HLA • RECONOCIMIENTO ANTIGENICO  ESTUDIOS INMUNOLOGICOS DEL DONANTE Y RECEPTOR DE TRASPLANTE RENAL • TIPIFICACION DEL HLA • DETECCION DE ANTICUERPOS CIRCULANTES • PRUEBA CRUZADA
  • 4. HLA
  • 5. COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD Y HLA  GLICOPROTEINAS DE MEMBRANA: PRESENTAR ANTIGENOS A CELULAS T  “IDENTIFICACION CELULAR”  ELEVADO POLIMORFISMO (MULTIPLES ALELOS DE CADA GEN EN LA POBLACION) – POLIGENIA (REGION DEL GENOMA MAS DENSAMENTE POBLADO)  GENES CODIFICADORES (HLA): CROMOSOMA 6
  • 7. RECONOCIMIENTO ANTIGENICO  FASE EFECTORA  FASE DE RECONOCIMIENTO: INDUCCION DE LA RESPUESTA. VIA DIRECTA (AGUDO) E INDIRECTA (CRONICO)
  • 8. TIPIFICACION DEL HLA  RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y EVOLUCION DEL INJERTO  METODOS SEROLOGICOS: PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI : CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC) BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA  METODOS MOLECULARES: MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS). IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS: • SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION (PCR – RFLP) • BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP: SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER • PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE : HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO • PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING (NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
  • 9. TIPIFICACION DEL HLA  RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y EVOLUCION DEL INJERTO  METODOS SEROLOGICOS: PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI : CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC) BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA  METODOS MOLECULARES: MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS). IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS: • SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION (PCR – RFLP) • BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP: SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER • PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE : HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO • PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING (NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
  • 10. TIPIFICACION DEL HLA  RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y EVOLUCION DEL INJERTO  METODOS SEROLOGICOS: PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI : CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC) BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA  METODOS MOLECULARES: MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS). IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS: • SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION (PCR – RFLP) • BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP: SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER • PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE : HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO • PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING (NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
  • 11. TIPIFICACION DEL HLA  RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y EVOLUCION DEL INJERTO  METODOS SEROLOGICOS: PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI : CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC) BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA  METODOS MOLECULARES: MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS). IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS: • SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION (PCR – RFLP) • BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP: SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER • PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE : HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO • PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING (NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
  • 12. TIPIFICACION DEL HLA  RELACION INCUESTIONABLE ENTRE COMPATIBILIDAD Y EVOLUCION DEL INJERTO  METODOS SEROLOGICOS: PRUEBA DE MICROLINFOTOXICIDAD DE TERASAKI : CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE COMPLEMENTO (CDC) BARATA Y RAPIDA, PERO ABANDONADA DE LA RUTINA  METODOS MOLECULARES: MAYOR NUMERO DE ESPECIFICIDADES (2 A 4 DIGITOS). IMPORTANTE EN PCTES HIPERSENSIBILIZADOS EXONES 2 Y 3 DEL HLA I Y EXON 2 DEL HLA II  3 TIPOS: • SECUENCIAS RECONOCIDAS EN SITIOS DE RESTRICCION (PCR – RFLP) • BASADAS EN SECUENCIAS ESPECIFICAS (PCR SSP: SEQUENCE SPECIFIC PRIMING)  RAPIDA, PERMITE TRABAJAR CON LA MUESTRA DE DONANTE CADAVER • PCR SSO: SEQUENCE SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE : HIPRIDACION CON SONDAS EN UN SOPORTE SOLIDO • PCR SECUENCIACION Y NEXT GENERATION SEQUENCING (NGS) : CARACTERIZACION COMPLETA DEL HLA
  • 13. COMPATIBILIDAD HLA ENTRE DONANTE Y RECEPTOR  A MAYOR COMPATIBLIDAD MENOR RIESGO DE RESPUESTA INMUNE  SE PERSIGUE COMPATIBILIDAD DE LOCI DR, A Y B ( ULTIMAMENTE C Y DQ)
  • 15. DETECCION DE ANTICUERPOS CIRCULANTES  DIRIGIDOS ESPECIFICAMENTE FRENTE A LOS ANTIGENOS LEUCOCITARIOS HUMANOS  SE PRODUCEN COMO RESPUESTA A ANTIGENOS HLA ALOGENICOS (EMBARAZOS, TRANSFUSIONES, TX PREVIOS)  PACIENTES EN LISTA DE ESPERA DEBEN SER SOMETIDOS A UN ESTUDIO (TRIMESTRALMENTE O ANTE CUALQUIER EVENTO SENSIBILIZANTE) PARA DETECTAR LA EXISTENCIA, EVOLUCION Y ESPECIFICIDAD DE ANTICUERPO ANTI HLA  EQUILIBRIO ENTRE SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD: A MAS ANTICUERPOS MENOS POSIBILIDAD DE ENCONTRAR DONANTE COMPATIBLE  2 TIPOS: • ANTIGENOS NO ESPECIFICO: CROSSMATCH POR CDC Y CROSSMATCH POR CITOMETRIA DE FLUJO • ANTIGENO ESPECIFICO: ELISA, CITOMETRIA DE FLUJO CON PERLAS Y LUMINEX (DSA)
  • 16. DETECCION DE ANTICUERPOS CIRCULANTES  DETECCION DE AC POR CITOTOXICIDAD: EMPLEA MICROLIFOTOXICIDAD DE TERASAKI  SE ENFRENTA EL SUERO DEL RECEPTOR A UN PANEL REPRESENTATIVO DE LINFOCITOS DE LA POBLACION  SE DETERMINA EL NRO DE DONANTES CONTRA LOS QUE REACCIONA EL SUERO (PORCENTAJE DE CELULAS MUERTAS)  PANEL REACTIVE ACTIVITY (PRA) TIENE BAJA SENSIBILIDAD OBEJTIVO DEL PRA: • CONOCER EL GRADO DE SENSIBILIZACION ANTES DE UN TRASPLANTE, DE SER ASI CONOCER QUE AC SE HAN PRODUCIDO. • HACER UN SEGUIMIENTO POST TRASPLANTE POR POSIBLE RECHAZO O POSIBLE 2DO TRASPLANTE HIPERSENSIBILIZADO MAYOR DE 80%: PACIENTE HIPERINMUNIZADO MENOR POSIBILIDAD DE TRASPLANTARSE, MENOR SUPERVIVENCIA DEL INJERTO Y MENOR SUPERVIVENCIA DEL PACIENTE  POR ESO SE HACE PRIODICAMENTE. TITULOS ALTOS DE AC  REACCION CONTRA ANTIGENOS SIMILARES AHORA SE USA EL cPRA  SE BASA EN ANTIGENOS HLA IDENTIFICADOS  SE CALCULA A PARTIR DE LOS HLA PREDOMINANTES EN LA POBLACION  REPRESENTA EL PORCENTAJE DE DONANTES QUE EXPRESAN HLA PROHIBIDOS
  • 17. DETECCION DE ANTICUERPOS CIRCULANTES POR FASE SOLIDA  EN FASE SOLIDA (NO SE USA CELULAS)  POR CITOMETRIA DE FLUJO DETECTA ANTICUERPOS CON ANTICUERPOS CONJUGADOS A FLUOROCROMOS (LA FLUORESCENCIA LA HACE UNA TECNICA MAS SENSIBLE)  ELISA: INMUNOPRECIPITADOS DE GP DE HLA EN POCILLOS DE UNA MICROPLACA  SE USA TAMBIEN MICROPARTICULAS (MICROESFERAS) DE POLIESTIRENO QUE LLEVAN EN LA SUPERFICIE MOLECULAS DE HLA.  LUMINEX ADEMAS DE FLUOROCROMO (SEÑAL POSITIVA  SENSIBILIDAD) SE USAN MICROPARTICULAS DE COLOR (ESPECIFICIDAD) VENTAJAS: CUANTIFICAR POR INTENSIDAD DE LA FLUORESCENCIA : INTENSIDAD MEDIA DE FLUORESCENCIA (MFI)  UMBRAL ENTRE 3000 Y 5000 PERO OJO CON EFECTO PROZONA (ALTAS [ ] DE AC ENMASCARADAS POR BAJO MFI POR EXCESIVO ANTI HLA) DETALLA ESPECIFICIDADES ANTIGENICAS : ANTIGENOS PROHIBIDOS Y PERMITIDOS
  • 18. DETECCION DE ANTICUERPOS CIRCULANTES POR FASE SOLIDA  EN FASE SOLIDA (NO SE USA CELULAS)  POR CITOMETRIA DE FLUJO DETECTA ANTICUERPOS CON ANTICUERPOS CONJUGADOS A FLUOROCROMOS (LA FLUORESCENCIA LA HACE UNA TECNICA MAS SENSIBLE)  ELISA: INMUNOPRECIPITADOS DE GP DE HLA EN POCILLOS DE UNA MICROPLACA  SE USA TAMBIEN MICROPARTICULAS (MICROESFERAS) DE POLIESTIRENO QUE LLEVAN EN LA SUPERFICIE MOLECULAS DE HLA.  LUMINEX ADEMAS DE FLUOROCROMO (SEÑAL POSITIVA  SENSIBILIDAD) SE USAN MICROPARTICULAS DE COLOR (ESPECIFICIDAD) VENTAJAS: CUANTIFICAR POR INTENSIDAD DE LA FLUORESCENCIA : INTENSIDAD MEDIA DE FLUORESCENCIA (MFI)  UMBRAL ENTRE 3000 Y 5000 PERO OJO CON EFECTO PROZONA (ALTAS [ ] DE AC ENMASCARADAS POR BAJO MFI POR EXCESIVO ANTI HLA) DETALLA ESPECIFICIDADES ANTIGENICAS : ANTIGENOS PROHIBIDOS Y PERMITIDOS
  • 19. DETECCION DE ANTICUERPOS CIRCULANTES  ANTICUERPOS DONANTE ESPECIFICO: PRESENCIA DE ANTICUERPOS DIRIGIDOS CONTRA ANTIGENOS HLA EXPRESADOS EN LOS ORGANOS DEL DONANTE: PREFORMADOS O DE NOVO. PRINCIPAL FORMA DE DAÑO : ACTIVACION DEL COMPLEMENTO (citotoxicidad y activacion de endotelio vascular)  AUMENTA EL RIESGO DE PERDIDA DEL INJERTO
  • 20. DETECCION DE ANTICUERPOS CIRCULANTES  ANTICUERPOS DONANTE ESPECIFICO: PRESENCIA DE ANTICUERPOS DIRIGIDOS CONTRA ANTIGENOS HLA EXPRESADOS EN LOS ORGANOS DEL DONANTE: PREFORMADOS O DE NOVO. PRINCIPAL FORMA DE DAÑO : ACTIVACION DEL COMPLEMENTO (citotoxicidad y activacion de endotelio vascular)  AUMENTA EL RIESGO DE PERDIDA DEL INJERTO
  • 22. PRUEBA CRUZADA (CROSSMATCH, XM)  CONSISTE EN EL ANALISIS DE LA SENSIBILIZACION ESPECIFICA DEL RECEPTOR CONTRA EL DONANTE : DETECCION DE AC PREFORMADOS  POR LINFOCITOTOXICIDAD (XM-CDC) 1 HR - 1HR 15MIN • INCUBAR SUEROS DEL RECEPTOR CON LINFOCITOS DEL DONANTE: SI SE PRODUCE LISIS MAYOR AL 20% (AC CONTRA AG DEL DONANTE)  ELEVADO RIESGO DE RECHAZO HIPERAGUDO • SE HACE PRUEBA CON EL SUERO MAS REACTIVO HISTORICAMENTE Y EL MAS RECIENTE • PRUEBA CRUZADA ACTUAL NEGATIVA + PRUEBA CRUZADA HISTORICA POSITIVA ??? SE CONTINUA SI ES QUE PRUEBA HISTORICA TIENE MAS DE UN AÑO • HAY AC NO DIRIGIDOS CONTRA EL SISTEMA HLA (EN ENDOTELIO CONTRA CEL DEL ENDOTELIO) ANTI MICA. NO SE DETECTAN POR PERO SI POR LUMINEX
  • 23. PRUEBA CRUZADA (CROSSMATCH, XM)  CONSISTE EN EL ANALISIS DE LA SENSIBILIZACION ESPECIFICA DEL RECEPTOR CONTRA EL DONANTE : DETECCION DE AC PREFORMADOS  POR LINFOCITOTOXICIDAD (XM-CDC) 1 HR - 1HR 15MIN • INCUBAR SUEROS DEL RECEPTOR CON LINFOCITOS DEL DONANTE: SI SE PRODUCE LISIS MAYOR AL 20% (AC CONTRA AG DEL DONANTE)  ELEVADO RIESGO DE RECHAZO HIPERAGUDO • SE HACE PRUEBA CON EL SUERO MAS REACTIVO HISTORICAMENTE Y EL MAS RECIENTE • PRUEBA CRUZADA ACTUAL NEGATIVA + PRUEBA CRUZADA HISTORICA POSITIVA ??? SE CONTINUA SI ES QUE PRUEBA HISTORICA TIENE MAS DE UN AÑO • HAY AC NO DIRIGIDOS CONTRA EL SISTEMA HLA (EN ENDOTELIO CONTRA CEL DEL ENDOTELIO) ANTI MICA. NO SE DETECTAN POR PERO SI POR LUMINEX
  • 24. PRUEBA CRUZADA (CROSSMATCH, XM)  CONSISTE EN EL ANALISIS DE LA SENSIBILIZACION ESPECIFICA DEL RECEPTOR CONTRA EL DONANTE : DETECCION DE AC PREFORMADOS  POR LINFOCITOTOXICIDAD (XM-CDC) 1 HR - 1HR 15MIN • INCUBAR SUEROS DEL RECEPTOR CON LINFOCITOS DEL DONANTE: SI SE PRODUCE LISIS MAYOR AL 20% (AC CONTRA AG DEL DONANTE)  ELEVADO RIESGO DE RECHAZO HIPERAGUDO • SE HACE PRUEBA CON EL SUERO MAS REACTIVO HISTORICAMENTE Y EL MAS RECIENTE • PRUEBA CRUZADA ACTUAL NEGATIVA + PRUEBA CRUZADA HISTORICA POSITIVA ??? SE CONTINUA SI ES QUE PRUEBA HISTORICA TIENE MAS DE UN AÑO • HAY AC NO DIRIGIDOS CONTRA EL SISTEMA HLA (EN ENDOTELIO CONTRA CEL DEL ENDOTELIO) ANTI MICA. NO SE DETECTAN POR PERO SI POR LUMINEX
  • 25. PRUEBA CRUZADA (CROSSMATCH, XM)  CONSISTE EN EL ANALISIS DE LA SENSIBILIZACION ESPECIFICA DEL RECEPTOR CONTRA EL DONANTE : DETECCION DE AC PREFORMADOS  POR LINFOCITOTOXICIDAD (XM-CDC) 1 HR - 1HR 15MIN • INCUBAR SUEROS DEL RECEPTOR CON LINFOCITOS DEL DONANTE: SI SE PRODUCE LISIS MAYOR AL 20% (AC CONTRA AG DEL DONANTE)  ELEVADO RIESGO DE RECHAZO HIPERAGUDO • SE HACE PRUEBA CON EL SUERO MAS REACTIVO HISTORICAMENTE Y EL MAS RECIENTE • PRUEBA CRUZADA ACTUAL NEGATIVA + PRUEBA CRUZADA HISTORICA POSITIVA ??? SE CONTINUA SI ES QUE PRUEBA HISTORICA TIENE MAS DE UN AÑO • HAY AC NO DIRIGIDOS CONTRA EL SISTEMA HLA (EN ENDOTELIO CONTRA CEL DEL ENDOTELIO) ANTI MICA. NO SE DETECTAN POR PERO SI POR LUMINEX
  • 26. PRUEBA CRUZADA  POR CITOMETRIA DE FLUJO (CF XM)  SE USAN AC ANTI IGG CONJUGADOS A FLUOROCROMO  VENTAJA: DETECTA AC A TITULOS BAJOS Y AC QUE NO ACTIVAN EL COMPLEMENTO  DESVENTAJA: MENOS ESPECIFICO  AC DETECTADOS POR ESTE METODO SON MUY NOCIVOS (RECHAZOS MAS FRECUENTES Y GRAVES)  ACONSEJABLE REALIZARLA EN PACIENTES QUE PERDIERON INJERTO DE FORMA PRECOZ Y EN PACIENTES SENSIBILIZADOS PREVIO AL TRASPLANTE
  • 27. PRUEBA CRUZADA VIRTUAL (VXM)  CONOCER HLA DEL DONANTE Y AC EN EL SUERO DEL RECEPTOR  SI EL DONANTE TIENE AG PROHIBIDO PREVISIBLEMENTE PRUEBA CRUZADA SERA POSITIVA = PRUEBA CRUZADA VIRTUAL POSITIVA  EVITANDO USAR CDC O CITOMETRIA  VENTAJAS: • GANAR TIEMPO Y VER SI EL ORGANO ES VALIDO PARA UN RECEPTOR EN OTRA CIUDAD. • AÑADE MAYOR PRECISION AL CROSSMATCH • INDICADA EN PACIENTES SENSIBILIZADOS • MEJOR ELECCION PAREJA D-R (MAYOR ESPECIFICIDAD) • MENOR TIEMPO DE ISQUEMIA FRIA  DESVENTAJAS: • REQUIERE UNA TIPIFICACION EXACTA Y COMPLETA DEL HLA DEL DONANATE Y TIPIFICACION EXACTA DE TODOS LOS AC ANTI HLA DEL RECEPTOR (COSTOS) • POSIBILIDAD DE NEGAR UN ORGANO A UN PACIENTE QUE PODRIA SER TRASPLANTADO CON EXITO • XM CDC (-) SE CORRESPONDE CON MUY ALTA FRECUENCIA A VXM (-) PERO SI XM (+) Y VXM (-) ???
  • 28. SELECCION DE ANTICUERPOS BASADA EN EPITOPOS: LOS AC SOLO RECONOCEN CIERTAS REGIONES INMUNOGENICAS EN TODA LA MOLECULA DEL HLA (EPITOPOS): TRIPLETS O EPLETS, Y SE UNEN POR REGIONES DETERMINANTES DE COMPLEMENTARIDAD (CDR)  PARATOPO … EL SIGUIENTE PASO TENER UNA LISTA COMPLETA DE ESOS EPITOPOS PARA USARLOS EN LA COMPATIBILIDAD
  • 29. CONCLUSIONES  CUANTIFICAR Y MINIMIZAR LA PERDIDA DEL INJERTO A CORTO Y LARGO PLAZO  LOS RESULTADOS NO SOLO EVITAN TRASPLANTES DE ALTO RIESGO, SINO QUE ADEMAS AYUDAN EN LA ELECCION DE UN TRATAMIENTO ADECUADO DE ACUERDO A CADA NIVEL DE RIESGO  PARA DETERMINAR LOS ALOANTICUERPOS EXISTEN DIFERENTES METODOS CON DIFERENTE SENSIBILIDAD Y DIFERENTE VALOR PRONOSTICO, UNOS DETERMINAN EL RIESGO DE RECHAZO HIPERAGUDO, OTROS EL RIESGO DE PERDIDA DE INJERTO EN RETRASPLANTES
  • 30. BIBLIOGRAFIA  Molina J, Navas A, Aguera. Avances en inmunologia del trasplante renal. NefroPlus 2018;10(2):11-19.  Tait BD, Hudson F, Cantwell L, Brewin G, Holdworth R, Bennett G, Jose M. Review article: Luminex technology for HLA antibody detection in organ transplantation. Nephrology 2009; 14: 247-254.  Lim WH, Wong G, Heidt S, Claas FHJ. Novel aspects of epitope matching and practical application in kidney transplantation. Kidney Int. 2018;93:314-24.  Terasaki PI, Ozawa M, Castro R. Four-year follow-up of a prospective trial of HLA and MICA antibodies on kidney graft survival. Am J Transplant 2007; 7: 408-415.