Seminario de Examen de Grado Biología Molecular e Ingeniería Genética Facultad de Medicina y Hospital Univeritario, U.A.N.L.

1. SEMINARIO DE EXAMEN DE GRADO
ADENOCARCINOMA COLORRECTAL:
ANÁLISIS DE CORRELACIÓN ENTRE LA
CONCENTRACIÓN DE CÉLULAS MADRE DE TUMOR
ABCB1+/KRT18+/BNIP3+, FARMACORRESISTENCIA
Y RESPUESTA CLÍNICA A FOLFOX-6.
PRESENTA:
M.C.P. ORLANDO DANIEL SOLIS CORONADO
Como requisito para obtener el Grado de MAESTRÍA EN CIENCIAS
con orientación en BIOLOGÍA MOLECULAR E INGENIERÍA GENÉTICA.

2. DR. C. SALVADOR LUIS SAID Y FERNÁNDEZ
Director de tesis
DR. C. HERMINIA GPE. MARTÍNEZ RODRÍGUEZ
Co-Director de tesis
DR. C. ADOLFO SOTO DOMÍNGUEZ
Miembro de la comisión de tesis

3. COLABORADORES
Proyecto aprobado por el Fondo Sectorial para la Investigación Básica SEP/CONACyT; Reg: CB-2012-01-178641
Proyecto aprobado por el Comité de Ética en Investigación, Fac. de Medicina, UANL: Reg: BI18-0001
DR. med. OSCAR VIDAL GUTIÉRREZ
DR. JUAN FRANCISCO GONZÁLEZ GUERRERO
DR. ABSALON ESPINOZA VELAZCO
DRA. IRMA SANDRA GARCÍA GONZÁLEZ
DR. RAFAEL MENDOZA BAUTISTA
DR. CARLOS EDUARDO BAÑUELOS HERNÁNDEZ
MPSS. ALEJANDRA MAYELA MARTÍNEZ GARZA
MPSS. ANA KAREN LUNA MARROQUÍN
DR. C. ELSA NANCY GARZA TREVIÑO
DR. med. PAULINA DELGADO GONZÁLEZ
DR. C. KAME ALBERTO GALÁN HUERTA
DR. C. HUMBERTO RODRÍGUEZ ROCHA
DR. C. ROBERTO MONTES DE OCA LUNA
DR. med. ORALIA BARBOZA QUINTANA
DR. med. JUAN PABLO FLORES GUTIÉRREZ
DR. med. RAQUEL GARZA GUAJARDO

5. CÁNCER COLORECTAL
(1) Ausiello, D. A., & Goldman, L. Cecil Tratado de medicina interna. (2013).
(2) Domarus, Rozman, C., & Farreras Valenti, P. Medicina interna (2016).
(3) Keum & Giovannucci. Pathology and Epidemiology of Cancer. (2017). pp. 391-407.
(4) Siegel, et.al. CA: a cancer journal for clinicians, (2017). 67(3), 177-193.
(5) GLOBOCAN, World Health Organization (2012)
10% de las neoplasias
malignas (1,2)
Manifestaciones en
5ta y 8va década
de la vida (1,3)
Enfermedad
multifactorial (1,4)
Tipos (1,2):
Esporádico (85%)
Hereditario (15%)
Patologías GI mas
frecuentes (1).
Problema de
salud publica (2)

6. Cirugía** 5-Fluorouracilo Oxaliplatino Leucovorina
Adenocarcinoma
(90%)
Carcinoma
epidermoide y
otros (10%)
(1) Rubin, Strayer, & Rubin, D. (2012). Rubin: Patología; fundamentos clinicopatológicos en medicina.
(2) Hamilton, S. R., & Aaltonen, L. A. (2000). Pathology and genetics of tumours of the digestive system. World Vol. 14.
(3) Medina-Franco, H. Oncología Clínica para médicos no oncólogos (2012) p.238-246.
(4) Todaro M et al; Gastroenterology. (2010). 138:2151–2162

7. Epitelio normal
Hiperproliferación
de epitelio
Adenoma displásico
de bajo grado
Adenoma displásico
de alto grado y
carcinoma “in situ”
Carcinoma invasor y
metastásico
Genes
mutados APC
Vía de
señalización
afectada
Wnt- β
catenina
Efectos
biológicos
Proliferación
celular
K-ras
EGFR
Proliferación
y supervivencia
DCC
TGF-β
Supresión de apoptosis y
perdida de inh. de
crecimiento
p53
CDK4/6, CE2, MMP,
ICAM’s
Proliferación
y TEM
(1) Fearon, E. R. Annual Review of Pathology:
Mechanisms of Disease, (2011), 6, 479-507.
(2) Colangelo, T. et.al. Biochimica et Biophysica Acta
(BBA)-Reviews on Cancer (2016).
(3) Terzi (et.al). Inflammation and colon
cancer. Gastroenterology, (2016). 138(6), 2101-2114.

8. (1) Garza-Treviño, Said-Fernández & Martínez-Rodríguez. Cancer cell international. (2015). 15(1), 2.
(2) Zubair, H. (et.al.). Stem Cells in Toxicology and Medicine, (2016). 375.
(3) Aponte, P. M., & Caicedo, A.. Stem Cells International, (2017).
Quimio-resistencia
Metástasis
Iniciación tumoral
Crecimiento tumoral
Recurrencia tumoral

9. Autorenovación
(1-2)
Evasión de
respuesta
antitumoral (2)
Diferenciación
(1-3)
Expresión de
proteínas de
resistencia a
fármacos (2)
Expresión de
marcadores de
superficie (1-2)
Capacidad
tumorigénica
(2)
Resistencia a
apoptosis (2-3)
(1) Garza-Treviño, Said-Fernández & Martínez-Rodríguez. Cancer cell international. (2015). 15(1), 2.
(2) Zubair, H. (et.al.). Stem Cells in Toxicology and Medicine, (2016). 375.
(3) Aponte, P. M., & Caicedo, A.. Stem Cells International, (2017).

10. CD44
CD24
CD26

11. (1) Rodríguez González, M. S. Potencial terapéutico de medicamentos antineoplásicos alternativos sobre la línea COLO 320 y cultivos primarios de adenocarcinoma colorrectal. (Tesis Maestría UANL, 2012).
(2) Garza-Treviño, EN. Análisis del transcriptoma de células madre de adenocarcinoma colorrectal resistentes a 5-fluorouracilo, oxaliplatino y leucovorina. (Tesis Doctorado UANL, 2017).
(3) Delgado-Gonzalez P. Estudio sociodemografico y clínico del CCR en Nuevo León y análisis de la sensibilidad a medicamento de primera línea en cultivos primarios de tumores colorrectales. (Tesis Doctorado UANL, 2016).
GARZA-TREVIÑO E. (2016)(2)
 Aislamiento y caract. CMT-ACCR.
 Correlación CMT CD44+/CD24+ en
cortes histológicos de ACCR y la
resistencia a 5-FUOL.
 Genes sobrexpresados en CMT de
ACCR resistentes a 5-FUOL.
BNIP3
KRT18
ABCB1
 Implementó y validó el método
ATP-CRA para su uso en este
proyecto.
RODRÍGUEZ –GONZÁLEZ M. (2012)(1)
GARZA-TREVIÑO E. y
DELGADO-GONZÁLEZ P.
(2010-2016)(2,3)
 Biobanco de muestras criopreservadas de ACCR.
 Base de datos con información sociodemográfica, clínica y
resultados de ensayos de quimiosensibilidad de los
pacientes donadores de muestra de ACCR.

12. KRT 18 ABCB1
BNIP3

13. El cáncer colorrectal es una de las neoplasias más frecuentes en nuestra población. El tratamiento
consiste en resección quirúrgica y quimioterapia. En nuestro medio uno de los mas usados es
FOLFOX-6, donde el 50% de los pacientes que lo reciben no responden a la quimioterapia y el
50% restante lo hacen de manera heterogénea.
En nuestro grupo hemos observado que las CMT de ACCR son las principales responsables de la
fármaco-resistencia y en la mayoría de las muestras las CMT sobre-expresan los genes
relacionados con resistencia a 5-FUOL.
Actualmente, los métodos para determinar la sensibilidad a estos fármacos se basan en la
respuesta clínica y la sensibilidad in vitro de las células tumorales a la exposición de estos
tratamientos. Por ello, como una alternativa, en este trabajo se evaluó la expresión de los
marcadores de CMT (CD44,CD24 y CD26) y los productos proteicos de los genes de resistencia
(ABCB1, KRT18, BNIP3) directamente en cortes histológicos de ACCR, con el fin de proponerlos
como marcadores pronósticos de la respuesta al esquema de quimioterapia FOLFOX-6.

14. En cortes histológicos de ACCR’s el área ocupada por CMT y células ABCB1+,
KRT18+, BNIP3+, o sus combinaciones correlaciona con:
• Metástasis
• Sobrevida a dos años
• Pobre pronóstico
• La sensibilidad a 5-FUOL
• PMC
• Índice de Karnofsky

15. Investigar si, en cortes histológicos de ACCR’s existe correlación entre el
área ocupada por CMT y células ABCB1+, KRT18+, BNIP3+ o sus
combinaciones con las siguientes variables clínicas:
 Sensibilidad in vitro a 5-FUOL.
 El índice de Karnofsky
 Metástasis
 Sobrevida a dos años

16. Aislar y caracterizar CMT a partir de ACCR y su posterior diferenciación a
células epiteliales.
Determinar si existe correlación entre el área ocupada por CMT CD44+, CD24+,
CD26+ o sus combinaciones en los cortes histológicos de ACCR con las
variables clínicas de los pacientes.
Determinar si existe correlación entre el área ocupada por células ABCB1+,
KRT18+, BNIP3+, o sus combinaciones en los cortes histológicos de ACCR con
las variables clínicas de los pacientes.
1
2
3

17. Selección de casos
de base de datos
Seleccionar tejido en
parafina de casos
seleccionados
Obtención de cortes
histológicos
Inmunohistoquímica/
Inmunofluorescencia
doble marcaje
Escaneo digital de
preparaciones histológicas
Análisis morfológico
y morfo-métrico
Análisis
estadístico
Aislados
CMT
Cultivo celular
15 días
Medio CMT
Fijación
ACCR
Sens.
Rest.
Sanos

18. De Angellis et.al., Italia, 2015
• Logran aislamiento y expansión de CMT de ACCR
• Esferoides expresaron CD133 y CD44
Logramos aislar, expandir y caracterizar CMT de ACCR; las cuales fueron capaces de diferenciarse a células epiteliales y de
expresar marcadores de CMT (CD24, CD26 y CD44) y de resistencia a 5-FUOL (KRT18, ABCB1, BNIP3).
1
Aislamiento
• Baja adherencia
• Factores de crecimiento
• Medio libre de suero
• Morfología esférica
• Formulación esferoides
• Confluencia 80% / viabilidad
90%
Árnadóttir, et.al. 2017 y Jeppesen, et.al, 2018
Kasseb, etl.al., 2016
• Reportan colonosferas y esferoides de CCyC usando medio
libre de suero, en un tiempo similar a nuestro estudio
Interés en la
biología y genética
de las CMT
No existencia de
marcadores
específicos
Desarrollo de
estrategias para su
identificación
Pronóstico
Tratamientos dirigidos
Respuesta a tratamiento

19. • Expresión de marcadores de
CMT en aislados de CMT de
ACCR
2
Olejniczak, et.al. 2018
• Colonosferas de líneas celulares
• Baja proporción de células CD44+
Sun Choi, et.al. 2017
• Mamosferas derivadas de tejidos y
líneas celulares de cancer de mama.
• Expresión de CD44+/CD24-
Generación de cultivos puros
CD44+/CD24+ se apoyan en
estudio de Vermeulen, etl.al, 2008
Permitirá estudio de mecanismos de FR
y evaluar su funcionalidad o estrategias
de bloqueo en nuestro laboratorio.
CK-18
• Expresión de marcadores de
resistencia a 5-FUOL en
aislados de CMT de ACCR.
3
Ryback, et.al. 2011
• Expresión de CK18/CD44/CD24 en
esferoides de línea DU145 de cancer de
próstata.
Grillet, et.al. 2017
• Expresión de CK18 en CTC de
pacientes con ACCR.
ABCB1
Jeppensen, et.al. 2017
• Esferoides de ACCR: Baja proporción.
Butller, et.al. 2017
• Línea celular SW-480 de ACCR:
Expresión significativa
BNIP3
Ningún reporte que indique su
expresión en CMT de ACCR

20. Estos marcadores
no distinguen
entre CMN y CMT
La doble positividad a CD44/CD26
se asocio con variables clínicas
desfavorables para el paciente, no
así para CD24/CD26.
• Todos los cortes de ACCR contenían
CMT, las cuales expresaron
diferencialmente CD24, CD26 y CD44.
4
La expresión de células ABCB1+/CK18+,
ABCB1/BNIP3+, así como ABCB1+ aisladas
correlaciono y/o se asocio con variables
clínicas desfavorables para el paciente.
Landreville y cols,
2011
Vaidyanathan y cols, 2014 Woelfle y cols, 2004
Wang y cols, 2011
5
Batería de marcadores de
farmacorresistencia a 5-FUOL
Herramienta útil para el pronóstico y respuesta al
tratamiento FOLFOX-6 de los pacientes con ACCR.

21. • El marcaje con anticuerpos específicos de cortes histológicos de tumores primarios de ACCR
son útiles para utilizarlos como indicadores de la evolución del cáncer.
• Los marcadores de CMT no son buenos indicadores de quimio-resistencia, metástasis o
pronóstico de la evolución del CCR, pero sí los productos de los genes de resistencia
(ABCB1, CK18 y BNIP3), por lo que se acepta nuestra hipótesis.

22. 1. “SIMILITUD EN EL PORCENTAJE DE CÉLULAS MADRE DE TUMOR CK18+ RESISTENTES Y SENSIBLES A 5-FLUOROURACILO,
OXALIPLATINO Y LEUCOVORINA EN BIOPSIAS DE ADENOCARCINOMA COLORRECTAL”.
Presentación oral, X Congreso Internacional de Cuerpos Académicos y Grupos de Investigación.
Marzo de 2018 en Monterrey, Nuevo León, México.
2. “HALLAZGOS CLÍNICO-PATOLÓGICOS DEL ADENOCARCINOMA COLORRECTAL EN UNA POBLACIÓN SENSIBLE Y RESISTENTE A 5-
FLUOROURACILO, OXALIPLATINO Y LEUCOVORINA”.
Presentación en cartel, X Congreso Internacional de Cuerpos Académicos y Grupos de Investigación.
Marzo de 2018 en Monterrey, Nuevo León, México.
3. “ANÁLISIS DE EXPRESIÓN DE MARCADORES CD44 Y CK18 EN CÉLULAS MADRE DE ADENOCARCINOMA COLORRECTAL
RESISTENTES Y SENSIBLES A FOLFOX-6”.
Presentación en cartel, V Simposio Nacional de Ciencias Farmacéuticas y Biomedicina.
Abril de 2018 en Monterrey, Nuevo León, México.
4. “FIBROBLASTOS ASOCIADOS A TUMOR Y SU RELACIÓN CON LA QUIMIOSENSIBILIDAD A FOLFOX-6 EN BIOPSIAS DE
ADENOCARCINOMA COLORRECTAL”.
Presentación en cartel, V Congreso Internacional de Biotecnología y Genómica.
Junio de 2018 en Monterrey, Nuevo León, México.
5. “EXPRESIÓN DE MARCADORES DE FARMACORRESISTENCIA A FOLFOX-6 EN CÉLULAS MADRE DE ADENOCARCINOMA
COLORRECTAL: SIGNIFICANCIA CLÍNICO-PATOLÓGICA”.
Presentación en cartel, XLV Congreso de la Academia Nacional de Medicina.
Octubre de 2018 en Monterrey, Nuevo León, México.

23. OBJETIVO Ago - Dic Ene Feb Mar Abr May Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic Ene Feb Mar % Avance
1 100
2 100
3 100
Escritura de tesis 100
Disetacion
2019
2018
2017

24. SEMINARIO DE EXAMEN DE GRADO
ADENOCARCINOMA COLORRECTAL:
ANÁLISIS DE CORRELACIÓN ENTRE LA
CONCENTRACIÓN DE CÉLULAS MADRE DE TUMOR
ABCB1+/KRT18+/BNIP3+, FARMACORRESISTENCIA
Y RESPUESTA CLÍNICA A FOLFOX-6.
PRESENTÓ:
M.C.P. ORLANDO DANIEL SOLIS CORONADO
Como requisito para obtener el Grado de MAESTRÍA EN CIENCIAS
con orientación en BIOLOGÍA MOLECULAR E INGENIERÍA GENÉTICA.