Los pigmentos vegetales como la clorofila, carotenos y xantofilas dan color a las plantas al absorber y reflejar la luz. Estos pigmentos se pueden separar usando cromatografía y su espectro de absorción se puede medir con un espectrofotómetro para determinar en qué rango de longitudes de onda absorben mejor la luz.

1. SEPARACION Y ESPECTRO DE
ABSORCION DE PIGMENTOS
VEGETALES

2. Que son los pigmentos
vegetales?
En general, el color que presenta un
determinado tejido u órgano vegetal,
depende del predominio de un
pigmento o de la combinación de
varios de ellos, los “pigmentos” Son
Moléculas capaces de absorber y
reflejar la luz, estos les dan el color
característico a las plantas.

3. Clorofila
Las mas comunes
 Clorofila a: que tiene
un núcleo de magnesio
y un radical del grupo
metilo en el anillo a.
Clorofila b: tiene un
núcleo de magnesio y un
radical del grupo
formilo(aldehido) en el
anillo b. Park s. Novel. physicochemical and enviromental plant
physilogy, fourth edition . Capitulo 5

4. Carotenos
 Absorben la mayoría de
luz azul y verde en el
espectro.
 Están constituidos por
40 átomos de C.
 A la cadena principal se
ligan 8 unidades de
isopreno que se ligan 4
a 4 con dobles enlaces.
Park s. Novel. physicochemical and enviromental plant physilogy, fourth
edition. Capitulo 5

5. Xantofilas
La xantofila o xantófila es una
sustancia química que realiza
acción fotosintética y que
pertenece al grupo de los
carotenoides. Se puede
encontrar en la hojas de las
plantas, pero también en
semillas como la del maíz
presenta una coloración que
varia del amarillo, naranja al
rojo pardo.

6. Cromatografía
La cromatografía es una técnica
de separación física de mezclas,
la cual mediante el uso las
diferentes fuerzas de adsorción
que presentan en los compuestos
y la velocidad con la que son
arrastrados los compuestos sobre
un soporte revela la identidad de
los componentes de una mezcla.
La cromatografía usa el principio
de una fase móvil y una fase
estacionaria.

7. Espectrofotómetro
La palabra espectrofotómetro se
deriva de la palabra latina
spectrum, que significa imagen,
y de la palabra griega phos o
photos, que significa luz. El
principio de su funcionamiento
es usar la luz de una lámpara de
características especiales la cual
es guiada a través de un
dispositivo que selecciona y
separa luz de una determinada
longitud de onda y la hace pasar
por una muestra.

8. Espectro de absorción
Es espectro de absorción
es el rango de energía
lumínica en el que los
pigmentos vegetales logran
un punto máximo para
funcionar el cual se
representa en graficas
comparativas con el
espectro de luz o su rango
de actividad.
Park s. Novel. physicochemical and enviromental plant physilogy, fourth
edition. Capitulo 4

9. Metodología
Extracción y
separación de
pigmentos.
Se tritura la espinaca por 10
seg En un mortero para
pasar a un tubo se ensayo
50ml con tapón
.
• Se tritura para romper la pared
celular de las hojas y poder
separar los pigmentos del resto
de sus componentes .
Añadir 4 ml de
acetona al tubo de
ensayo.
• Para disolver ya que los
pigmentos son insolubles en
agua y sus polaridad es a fin
con los disolventes .
dejar en reposo por
10 min y agregar
4ml de agua
destilada

10. se agregara 3 ml de
éter de petróleo y se
agitara por 5 segundos.
• El éter de petróleo funciona como
separador de los pigmentos
Se dejara reposar hasta que
los solventes se separen y los
pigmentos hayan sido
extraídos en la capa superior
Con una pipeta Pasteur
se sacara la solución
superior verde oscuro
evitando mezclar las
dos capas. Esta será la
muestra utilizada para
correr la cromatografía.
Se tomara una tira de
papel de cromatografía
mida 2 centímetros desde
la parte inferior y se
marcara un pequeño punto
con lápiz
• No usar
lapicero ya que
este afecta el
recorrido de la
cromatografía.

11. Con un tubo capilar se coloca el
extracto sobre el punto marcado
anteriormente sobre el papel de
cromatografía.
Se debe realizar el
montaje de la
cromatografía montando
el papel cromatografico
en un tubo de ensayo
tapado y el disolvente.
•El disolvente hará que los pigmentos
corran a través del papel debido a su
polaridad
•Para que el montaje sea correcto el papel
no debe tocar los bordes del tubo
finalmente Se dejara correr la
cromatografía en la oscuridad o con luz
difusa
• Cuando el papel
tome los colores
respectivos de
los pigmentos
se debe medir y
dejar secar la
cromatografía
para trabajar los
valores de Rf

12. Determinación del
espectro de absorción
de los pigmentos
fotosintéticos
Se recortara las cuatro
bandas principales de
pigmentos de su
cromatografía
• La banda gris oscura aparecerá
entre carotenos y xantofilas
deberá ser desechada
Se colocara en tubos de
ensayo independientes, los
trozos de las bandas de
clorofila a y b y xantofilas en 2
ml acetona y los carotenoides
en 2 ml de éter de petróleo.

13. Se deberá cubrir cada
tubo de ensayo con papel
de aluminio y se deberá
guardar en hielo hasta
que se ejecute el
espectro de absorción.
Se deberá ejecutar un
espectro de absorción de
cada solución de pigmento
usando un
espectrofotómetro.
luego se deberá iniciar las
lecturas a 400 nm y se
deberá leer la absorbancia
cada 20 nm de intervalo hasta
700 nm
Para clorofilas a y b se
deberá reducir el
intervalo a 10 nm entre
640 y 670.

14. Se deberá recalibrar el
instrumento con cada
longitud de onda usando
acetona o éter de
petróleo como blanco de
acuerdo al caso.
Los resultados deben ser
registrados en una tabla, para
comparar los espectros de
absorción de los principales
pigmentos se debe realizar
graficas comparativas de su
rango de absorción.
Las graficas se realizan
con el fin de comparar y
observar los picos de
absorción de laboratorio
con las graficas de
teoría.

15. Bibliografía.
 Park s. Novel (2009).physicochemical
and environmental plant physiology,
fourth edition . Los Angeles, California.
Estados unidos. Academic press.
 Martínez F. G. ( 1995 )elementos de
fisiología vegetal . Edición Mundi- prensa
.