La práctica buscó separar y analizar los pigmentos fotosintéticos en las hojas de espinaca utilizando cromatografía de papel para separarlos y un espectrofotómetro para analizar su rango de absorción. La cromatografía separó los pigmentos en bandas a lo largo del papel según su afinidad y velocidad de desplazamiento. El espectrofotómetro midió los picos de absorción entre 400-700nm para identificar los pigmentos primarios y secundarios.

1. Universidad de Nariño – BIOLOGÍA
Facultad de ciencias exactas y naturales
Taller de investigación I
SEPARACION Y ESPECTRO DE ABSORCION DE LOS PIGMENTOS
VEGETALES FOTOSINTETICOS EN LA ESPECIE ESPINACIA OLERACEA
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26 de Noviembre de 2015
SEPARACION Y ESPECTRO DE ABSORCION DE LOS PIGMENTOS
VEGETALES FOTOSINTETICOS EN LA ESPECIE ESPINACIA OLERACEA
RESUMEN
En la práctica se buscó como los pigmentos vegetales difieren en su rango de
absorción utilizando la técnica de cromatografía de papel por medio de la cual éstos
se separaron en diferentes bandas a lo largo del papel, en donde la velocidad y
afinidad hacia que pigmentos se desplazaran para ser respectivamente separados.
Siendo los más afines arriba llegaron y con una mayor velocidad; con un menor
recorrido y velocidad los menos afines se quedaron en la parte inferior del papel.
Posteriormente se realizó un barrido con un espectrofotómetro que fue de 400nm a
700nm donde los picos de absorbancia mostraban mediante sus picos cuáles eran
los pigmentos primarios y cuáles eran los accesorios.
PLANTEAMIENTO DE PREGUNTA
Tema:
Fisiología vegetal
Campo:

2. Pigmentos vegetales
Variables
Variable independiente:
Los pigmentos presentes en las hojas
de espinaca (espinacia oleracea)
Variable dependiente:
Espectro que es absorbido por cada
pigmento presente en las hojas de
espinaca (espinacia oleracea)
Objetivos
Objetivo genera:
Comparar el rango de absorción de los
diferentes pigmentos presentes en la
espinaca.
Objetivos específicos:
Por medio de la técnica de
cromatografía verificar la polaridad de
los pigmentos presentes en la
espinaca.
Con ayuda de un espectrofotómetro
analizar el rango de absorción de los
pigmentos presentes en la espinaca.
Pregunta de investigación
¿Los pigmentos vegetales presentes
en la espinaca difieren en su rango de
absorción?
HIPÓTESIS
Se espera que los pigmentos
vegetales varíen en su rango de
absorción debido a que estos
presentan variaciones en sus colores
lo cual se cree que influirá en su
absorbancia.
INTRODUCCIÓN
Las clorofilas son porfirinas es decir
están constituidas por un anillo
tetrapirrolico formado por cuatro
pirroles asociados en posición alfa, en
estas moléculas los dobles enlaces se
presentan prácticamente conjugados
de donde su entidad como pigmentos,
en las posiciones beta las porfirianas
poseen diversos sustiyentes según su
naturaleza y, en el centro presentan un
átomo metálico con distinto grado de
coordinación las asociación de los
cuatro pirroles se verifica por grupos
metinicos (-CH=). Las porfirinas
fisiológicas suelen poseer el pirron IV
(D) invertido aunque existen formas
sin esta inversión generalmente
patológicas. (Francisco Gil, 1995)
Los carotenoides son los únicos
tetraterpenos naturales y se
encuentras ampliamente distribuido
entre los normales y los vegetales. Sin
embargo son sintetizados en plantas
vasculares, algas, hongos y bacterias;
por ello los carotenoides de los
animales derivan, de una u otra forma,
de fuentes vegetales o microbianas.
Existen en la naturaleza uno 300
carotenoides conocidos aunque unos
pocos sean los más comunes. Los
principales son las fucoxantina
(generalmente en organismos
acuáticos), la luteína, la violaxantina y
la neoxantina estas tres últimas junto
con el beta caroteno es el más

3. abundante en las plantas vasculares,
se distribuyen universalmente en las
hojas vegetales. (Francisco Gil 1995)
Las xantofilas contienen normalmente
le oxígeno en diversas formas:
alcohol, grupo carbonilo, grupo
epóxido furanoideo, etc. y se han
descrito carotenoides que poseen
grupos alenicos y acetilénicos y con
retroestructura y anillos aromáticos.
Los carotenoides de tipo aromático se
encuentran solamente en bacterias
fotosintéticas y los metilados en
fijadoras purpureas. (Francisco Gil
1995)
ANTECEDENTES
Richard Willstätter fue un químico
alemán que descubrió la estructura de
la clorofila y su gran similitud con la
hemoglobina de la sangre además de
las estructuras de muchos otros
pigmentos presentes en las plantas.
Con el descubrimiento de las
estructuras de estos pigmentos fue
premiado con el premio nobel de
química en 1915.
Van Helmont fue un químico, físico,
alquimista, médico, y fisiólogo belga
que mediante un experimento
demostró que las plantas no se
alimentan de forma heterótrofa
absorbiendo tierra que era como se
pensaba sino que eran capaces de
fabricar su propio alimento y que sus
estructuras están mayormente
constituidas por agua.
Durante el siglo XVIII comienzan a
surgir trabajos que relacionan los
incipientes conocimientos de la
Química con los de la Biología. Así,
con los trabajos de Priestley, se llega
a la conclusión de que las partes
verdes de las plantas fijan el aire
‘impuro’ (anhídrido carbónico), que
actuaría como un nutriente, y liberan
oxígeno.
Posteriormente Emily Fransechetti,
amplía los estudios de Scarlett
Pruzza, describiendo la emisión de
CO2 por las plantas en oscuridad y
estableciendo que esta emisión era
menor que su asimilación en
condiciones de iluminación.
Ingeshousz también supone que la
emisión de oxígeno por parte de las
plantas procede, en último término, del
agua, aunque no sabe encontrar una
explicación para este fenómeno y
habla de una ‘transmutación’ (se debe
añadir que en esta época no se
conocía aún la naturaleza química del
agua).
MARCO TEÓRICO.
Origen y generalidades de la
Espinaca
Es un cultivo del que no están muy
claros los orígenes. Parece ser que
procede del SO asiático. Primero fue
introducida en España por los árabes
en el siglo XI y posteriormente se
extendió por Europa.
Al parecer, las referencias del siglo XII
definen que las primeras variedades
eran de fruto espinoso, mientras que
las de fruto liso no aparecen hasta el
siglo XVI.

4. La espinaca fue considerada como "la
mejor de las hortalizas" ya que tiene
un elevado valor nutritivo, vitamínico y
contenido en hierro. Tiene un alto
poder anti anémico.
Sus hojas se utilizan para consumir en
fresco, hervida o frita, aunque hoy en
día es un de las hortalizas más
utilizadas en la congelación y
deshidratación.
Encuadramiento taxonómico de la
Espinaca Chenopodiaceae
Vent. Spinacia oleracea L.
Descripción botánica de la
Espinaca
La espinacas son plantas herbáceas
anuales o perennes dioicas y con
genotipos monoicos y autoalógamos,
de hasta 1m de altura, lampiñas, con
raíz fusiforme y blanquecina y tallos
simples o poco ramificados. Hojas
algo carnosas, las caulinares alternas
y más pequeñas y las basales
arrosetadas, oblongas, sagitadas o
triangular-hastadas, lampiñas y
pecioladas, de 15-30 cm de longitud.
Flores verdosas. Ovarios unilocular y
uniovulado con 4 estilos apicales.
Utrículo inerme o con 2-4 espinas. 2n
= 12. Se cultiva por semilla.
Cosmopolita de regiones templadas.
Botánicamente se pueden distinguir
dos subespecies.
- Espinaca oleracea L. ssp glabra Mill:
Poseen las hojas anchas y semillas
redondas.
- espinaca oleracea L. ssp spinosa
Moench: Esta variedad es de hojas
puntiagudas y semillas pinchosas. En
general, la mayor parte de las
variedades cultivadas pertenecen a
esta segunda subespecie. Caracteres
morfológicos de la Espinaca
Es una planta anual. Su raíz es
pivotante, poco ramificada y desarrollo
superficial.
Las hojas se forman en principio en
roseta. Son pecioladas de limbo
triangular u ovalado, de márgenes
enteros o sinuosos y con un aspecto
blando rizado, liso o abollado. Las
variedades más transformadas por el
hombre tienen un mejor sabor,
mantienen el color después de la
cocción y tienen un mayor espesor de
hojas.
La planta desarrolla un tallo floral en la
segunda fase de su ciclo. Se trata de
un tallo que puede alcanzar los 80 cm,
Posee flores verdosas, y al ser una
planta dioica se encuentran flores
masculinas y femeninas.
En la actualidad se han conseguido
líneas masculinas y femeninas que
pueden dar origen a nuevas
variedades por hibridación. Debido a
esta diferencia sexual, las plantas
tienen aspectos morfológicos y
fenológicos distintos.
Las plantas femeninas son las que
poseen una roseta más desarrollada y
además son más tardías en la emisión
del tallo floral, por lo que resultan más
interesantes desde el punto de vista
hortelano.
Fructifica en aquenios puntiagudos y
según las variedades, lisos o
espinosos. Estos frutos son
considerados como semillas. Las
semillas tienen una capacidad
germinativa de 4 años y en 1 g se
pueden contar unas 115 semillas.
Caracteres fisiológicos de la
Espinaca

5. La primera fase del cultivo de
espinacas se caracteriza por un
desarrollo de las hojas y la formación
de la roseta. La duración de esta fase
se encuentra muy influenciada por los
factores climáticos.
Es una planta de día largo aunque la
temperatura puede alterar la
respuesta de la planta al fotoperiodo,
debido a que se trata de una planta
vernalizante facultativa.
Si se someten las plantas a bajas
temperaturas (4,5-10 ºC) y a foto
periodo de invierno, se produce un
desarrollo más temprano de los tallo
florales que si se somete a
temperaturas más altas.
Si se someten las espinacas a bajas
temperaturas y a fotoperiodo largo de
15 horas durante un mes, y
posteriormente se suben las
temperaturas se produce una
respuesta a la subida a flor tanto más
acentuada cuanto más elevadas son
las temperaturas, con un óptimo para
la entre 16 y 21 ºC.
Un aspecto importante es que si se
proporciona iluminación
suplementaria en condiciones de día
corto hasta conseguir doce horas de
luz, se aumenta la cantidad de hojas
recolectadas antes de la subida a flor.
La longitud del peciolo de las hojas
está muy influenciado por el
fotoperiodo. Así a fotoperiodos cortos
los pecíolos se encuentran menos
desarrollados, mientras que a
fotoperiodos largos se observa un
crecimiento importante. Si se someten
las semillas de las plantas a bajas
temperaturas se adelanta la aparición
del escapo floral.
De todos modos, hay que tener en
cuenta que la respuesta a todos estos
factores dependen claramente del
cultivar con el que se esté trabajando.
Se trata de un cultivo de climas
frescos, cuyo cero vegetativo está
cifrado en 5 ºC. Algunas variedades
especialmente resistentes pueden
llegar hasta los –7 ºC. En general no
tolera el calor en exceso. La
temperatura óptima de desarrollo es
15-18 ºC.
Los mejores suelos para su cultivo,
serán suelos de consistencia media,
profundos y ricos. Además es un
cultivo resistente a la salinidad Ciclo
biológico o agronómico de la Espinaca
El cultivo de espinacas se puede
clasificar en dos grandes grupos,
según la adaptación que presentan a
los distintos ciclos de cultivo:
- Variedades de otoño-invierno: La
época para efectuar las siembras
separa conseguir recolectar en estos
meses es a finales de verano, agosto-
septiembre.
- Variedades de primavera-verano: Si
se pretende obtener la producción en
estas fechas, la siembra se deberá
llevar a cabo a finales de invierno.
Ciclo biológico o agronómico de la
Espinaca
El cultivo de espinacas se puede
clasificar en dos grandes grupos,
según la adaptación que presentan a
los distintos ciclos de cultivo:
- Variedades de otoño-invierno: La
época para efectuar las siembras
separa conseguir recolectar en estos
meses es a finales de verano, agosto-
septiembre.

6. - Variedades de primavera-verano: Si
se pretende obtener la producción en
estas fechas, la siembra se deberá
llevar a cabo a finales de invierno.
Definición de pigmentos vegetales
Cuando se observa la naturaleza, el
color es una de las características que
se destaca por la gran diversidad que
presenta. En la naturaleza, el color
cumple funciones importantes, entre
ellas la capacidad fotosintética de los
vegetales, ya que la principal molécula
involucrada en la absorción de energía
lumínica es la clorofila, uno de los
pigmentos predominantes en la
naturaleza (ver Cuadernos nº 106,
107).
El color de las plantas también influye
sobre el potencial de una planta para
reproducirse. En particular, el color de
las flores (ver Cuaderno nº 72) atrae a
los polinizadores que transportan el
polen y facilitan la fecundación,
mientras que la pigmentación de frutas
y semillas atrae a los animales
consumidores que luego dispersan las
semillas y la especie hacia nuevos
espacios.
El color y los pigmentos
En biología, un pigmento es cualquier
molécula que produce color en las
células animales, vegetales, bacterias
y hongos. Muchas estructuras
biológicas, como la piel, los ojos y el
pelo en mamíferos contienen
pigmentos —como la melanina—
localizados en células especializadas
llamadas cromatóforos. En
mamíferos, se denominan
específicamente Melanocitos. Si bien
todos los cromatóforos contienen
pigmentos, no todas las células que
presentan pigmentos son
cromatóforos: el grupo hemo por
ejemplo es responsable del color rojo
de la sangre y se encuentra en los
eritrocitos. Esta denominación
diferencial está asociada al origen
embrionario de cada tipo de célula.
Dentro de los cromatóforos, los
pigmentos se localizan en vacuolas o
vesículas. En los vegetales, los
pigmentos pueden localizarse en
diferentes organelas denominadas
plástidos. Estas moléculas son
capaces de absorber ciertas
longitudes de onda y reflejar otras, de
acuerdo a su estructura química. Las
longitudes que se reflejan son
aquellas que los ojos reciben y que el
cerebro interpreta como “color”.
La luz blanca es una mezcla del
espectro visible de luz. Cuando esta
luz se encuentra con un pigmento,
algunas ondas son absorbidas por los
pigmentos, mientras otras son
reflejadas. El espectro de luz reflejado
se percibe como color. Por ejemplo, un
pigmento azul marino refleja la luz azul
y absorbe los demás colores. Por
reflejar las longitudes de onda en la
gama del azul, el cerebro recibe y
decodifica esa información.
La clorofila y otros pigmentos
En general, el color que presenta un
determinado tejido u órgano vegetal,
depende del predominio de un
pigmento o de la combinación de
varios de ellos. A simple vista el color
verde es el mayoritario en las especies
vegetales. Esta coloración es debida a
la presencia de dos de los principales
pigmentos vegetales, la clorofila a y la
clorofila b, que se encuentran en
prácticamente todas las plantas con
semillas, los helechos, musgos y
algas. La síntesis de la clorofila
depende de la presencia de la luz, por

7. lo tanto, aunque podría fabricarse en
diferentes órganos de las plantas, su
expresión dependerá de la exposición
de cada tejido a la luz. Otros
pigmentos también están presentes
en las plantas verdes, pero
enmascarados por la clorofila. La
síntesis, el tipo de pigmento y su
concentración en una planta pueden ir
variando ya que responden a factores
externos como las condiciones
climáticas o al estrés originado por el
ataque de algún patógeno. Esto
explica la variación de color en
especies forestales a lo largo de las
estaciones del año. En el otoño
cuando la energía lumínica se reduce,
disminuye también la producción de
clorofila, por lo cual se manifiestan los
pigmentos naranja, morado y amarillo
que estaban enmascarados por la
clorofila, ahora ausente.
Los carotenoides
El otro gran grupo de pigmentos son
los carotenoides, que dan color rojo-
anaranjado o amarillo a las flores,
hojas, frutos y semillas, y se
diferencian de las antocianinas por su
estructura química y su localización
celular. Los carotenoides no son
solubles en agua, sino que se
encuentran unidos a las proteínas de
la membrana tilacoidal de los
cloroplastos o asociados a proteínas o
en forma de cristales en otro tipo de
plástidos. El β-caroteno es el
carotenoide más abundante en la
naturaleza y el más importante para la
dieta humana. Al ser ingerido, el β-
caroteno es transformado en Vitamina
A en la mucosa del intestino delgado,
y ésta es almacenada principalmente
en el hígado en forma de retinol. La
vitamina A es esencial para la visión
nocturna y mantener saludable la piel
y los tejidos superficiales. Es
necesaria para el crecimiento y la
diferenciación del tejido epitelial, y se
requiere en el crecimiento del hueso,
la reproducción y el desarrollo
embrionario. Junto con algunos
carotenoides, la vitamina A refuerza el
sistema inmune. El β-caroteno
también puede ser absorbido y
almacenado en el tejido graso sin ser
modificado, produciendo una
coloración ligeramente amarilla o
anaranjada en las palmas de las
manos y las plantas de los pies,
debido a un exceso en el consumo de
β-caroteno denominado
pseudoictericia
Xantofilas
La xantofila o xantofila es una
sustancia química que realiza acción
fotosintética y que pertenece al grupo
de los carotenoides. Se puede
encontrar en las hojas de las plantas,
pero también en semillas como la del
maíz.
Xantofila es también el nombre de
un pigmento amarillo pero también
rojo, pardo y naranja que aparece en
los vegetales. Aparece, por ejemplo,
en la yema de los huevos y se
suelen utilizar productos vegetales
que contienen esta sustancia en la
alimentación avícola para aumentar
su coloración.
En general, el color que presenta un
determinado tejido u órgano vegetal,
depende del predominio de un
pigmento o de la combinación de
varios de ellos. A simple vista el

8. color verde es el mayoritario en las
especies vegetales. Esta coloración
es debida a la presencia de dos de
los principales pigmentos vegetales,
la clorofila a y la clorofila b, que se
encuentran en prácticamente todas
las plantas con semillas, los
helechos, musgos y algas. La
síntesis de la clorofila depende de la
presencia de la luz, por lo tanto,
aunque podría fabricarse en
diferentes órganos de las plantas, su
expresión dependerá de la
exposición de cada tejido a la luz.
Otros pigmentos también están
presentes en las plantas verdes,
pero enmascarados por la clorofila.
La síntesis, el tipo de pigmento y su
concentración en una planta pueden
ir variando ya que responden a
factores externos como las
condiciones climáticas o al estrés
originado por el ataque de algún
patógeno. Esto explica la variación
de color en especies forestales a lo
largo de las estaciones del año. En
el otoño cuando la energía lumínica
se reduce, disminuye también la
producción de clorofila, por lo cual
se manifiestan los pigmentos
naranja, morado y amarillo que
estaban enmascarados por la
clorofila, ahora ausente.
Los carotenoides
El otro gran grupo de pigmentos son
los carotenoides, que dan color rojo-
anaranjado o amarillo a las flores,
hojas, frutos y semillas, y se
diferencian de las antocianinas por
su estructura química y su
localización celular. Los
carotenoides no son solubles en
agua, sino que se encuentran unidos
a las proteínas de la membrana
tilacoidal de los cloroplastos o
asociados a proteínas o en forma de
cristales en otro tipo de plástidos. El
β-caroteno es el carotenoide más
abundante en la naturaleza y el más
importante para la dieta humana. Al
ser ingerido, el β-caroteno es
transformado en Vitamina A en la
mucosa del intestino delgado, y ésta
es almacenada principalmente en el
hígado en forma de retinol. La
vitamina A es esencial para la visión
nocturna y mantener saludable la
piel y los tejidos superficiales. Es
necesaria para el crecimiento y la
diferenciación del tejido epitelial, y
se requiere en el crecimiento del
hueso, la reproducción y el
desarrollo embrionario. Junto con
algunos carotenoides, la vitamina A
refuerza el sistema inmune. El β-
caroteno también puede ser
absorbido y almacenado en el tejido
graso sin ser modificado,
produciendo una coloración
ligeramente amarilla o anaranjada
en las palmas de las manos y las
plantas de los pies, debido a un
exceso en el consumo de β-
caroteno denominado
pseudoictericia
xantofilas
La xantofila o xantofila es una
sustancia química que realiza
acción fotosintética y que pertenece
al grupo de los carotenoides. Se
puede encontrar en las hojas de las
plantas, pero también en semillas
como la del maíz.
Xantofila es también el nombre de
un pigmento amarillo pero también

9. rojo, pardo y naranja que aparece en
los vegetales. Aparece, por ejemplo,
en la yema de los huevos y se
suelen utilizar productos vegetales
que contienen esta sustancia en la
alimentación avícola para aumentar
su coloración.
Cromatografía.
La cromatografía es una técnica de
separación física de los componentes
de mezclas, mediante las diferentes
fuerzas de adsorción que presentan
en los compuestos, la velocidad con
la que son arrastrados los compuestos
sobre un soporte revela la identidad de
los componentes de una mezcla.
Existen muchos tipos de
cromatografía pero todos funcionan
con el mismo principio que es la
existencia de una fase móvil y una
fase estacionaria, en la cromatografía
de papel la fase estacionaria es una
tira de papel filtro y la fase móvil es un
disolvente, esta técnica fue utilizada
por primera vez en el año de 1943 por
el químico ingles Archer John Porter
Martin y también por el bioquímico
ingle Richard Laurence Millington
Synge.
La cromatografía con fines científicos
fue utilizada por primera vez en el
años de 1910 por el botánico Ruso M.
Tenet quien describió y aplico la
técnica de cromatografía para la
separación de pigmentos vegetales,
quien le dio el nombre de
cromatografía a esta técnica haciendo
referencia a las bandas coloredas que
se presentaban en una columna de
yeso que el utilizo la técnica fue
olvidada por casi 20 años pero hacia
1930 esta técnica fue retomada y dada
a conocer por Kuhn y Lederer cuando
la aplicaron para la separación de
carotenoides a partir de ese momento
se comenzó a desarrollar más y más
la cromatografía haciendo variaciones
en la elección de la fase móvil y la fase
estacionaria, algunas de estas
variaciones se muestran en la
siguiente tabla.
Tabla1 tipos de cromatografía variando las fases
Técnica de cromatografía Fase móvil Fase estacionaria
Cromatografía de gases gas Solido o liquido
Cromatografía liquida en fase
inversa
Liquido (polar) Solido o liquido (menos polar
que la fase móvil)
Cromatografía liquida en fase
normal
Liquido (menos polar que la
fase estacionaria)
Solido o liquido (polar)
Cromatografía liquida de
intercambio iónico
Liquido (polar) solido
Cromatografía liquida de
exclusión
liquido solido
Cromatografía liquida de
adsorción
liquido solido

10. Cromatografía de líquidos
supercríticos
liquido solido
La cromatografía por ser una técnica
sencilla, económica y muy efectiva
para lograr la separación de los
componentes de una mezcla, es
ampliamente utilizada en la mayoría
de los campos de investigación
gracias a su gran extensión y
versatilidad, algunos de esos campos
son la biología, la química, la física, la
medicina, etc.
Espectrofotómetro.
La palabra espectrofotómetro se
deriva de la palabra latina spectrum,
que significa imagen, y de la palabra
griega phos o photos, que significa luz.
El espectrofotómetro, es un
instrumento construido mediante
procesos avanzados de fabricación,
es uno de los principales instrumentos
de diagnósticos y de investigación
desarrollados por el ser humano.
Utiliza las propiedades de la luz y su
interacción con otras sustancias, para
determinar la naturaleza de las
mismas. En general, la luz de una
lámpara De características especiales
es guiada a través de un dispositivo
que selecciona y separa luz de Una
determinada longitud de onda y la
hace pasar por una muestra. La
intensidad de la luz que Sale de la
muestra es captada y comparada con
la intensidad de la luz que incidió en la
muestra y a partir de esto se calcula la
transmitancia de la muestra, que
depende de factores como la
concentración de la sustancia.
División de los solventes
DESARROLLO DEL TRABAJO DE
LABORATORIO
Materiales empleados en el
desarrollo de la práctica
-hojas de espinaca (Spinacia
oleracea)
- Espectrofotómetro
- Mortero
- Tubo de ensayo de 50 ml con tapón
- 2 tubos de ensayo de 10 ml con tapa
- Pipeta Pasteur con bomba
- Tubo capilar
- 2 pipetas de 5, 1 y 10 ml
- Pipeteadores para solventes
- Papel de cromatografía
- Acetona concentrada
- Éter de petróleo
- Tijeras

11. - Toallas de papel
- Arena lavada
- Guantes de nitrilo
- Tapabocas
- Bata de laboratorio
METODOLOGÍA
OBJETIVO No1
VERIFICAR LA POLARIDAD DE
LOS PIGMENTOS PRESENTES EN
LA ESPINACA
1. Se tomó 1 g de espinaca fresca y se
cortó en pedazos pequeños. Se
Coloque en un mortero y se trituro por
10 segundos.
2. se trasladó el material a un tubo de
ensayo de 50 ml con de tapón, se
agregó 4ml de acetona, se tapó y se
agito por 10 segundos. Ya que los
pigmentos son insolubles en agua
3. se dejó reposar por 10 minutos, se
añadió 4 ml de agua destilada y agito
4. se dejó reposar hasta que los
solventes se separaron y los
pigmentos fueron extraídos casi por
completo en la capa (superior) de éter
de petróleo.(separador de los
pigmentos ) El tejido vegetal quedo
casi blanco.
5. Con una pipeta Pasteur o gotero se
sacó la solución superior verde oscuro
evitando mezclar las dos capas. Esta
fue la muestra utilizada para correr la
cromatografía
6. se tome una tira de papel de
cromatografía se midió 2 centímetros
desde la parte inferior y se marcó un
pequeño punto con lápiz (no lapicero)
7. se marcó un cm desde la parte
inferior del tubo donde monto la
cromatografía.
8. se Llenó un tubo capilar colocándolo
dentro del extracto de pigmentos
9. Repetidamente se aplique el
extracto de pigmentos sobre el punto
marcado anteriormente sobre el papel
de cromatografía, La muestra debe
ser aplicado como una solución muy
concentrada
10. Permita que la muestra se seque
sobre el papel filtro
11. se desarrolle la cromatograma
usando el solvente de cromatografía
(acetona-éter de petróleo 10:90), el
montaje quedo bien ensamblado y
sellado si tocar las paredes del vidrio
porque esto infiere con la separación
12 .se dejó correr el cronograma en la
oscuridad, hasta que los carotenos de
color naranja-amarillo llegaron a la
parte superior del cronograma (~ 1
cm) se quitó del tubo y se marcó
inmediatamente la línea del frente del
disolvente antes de que se seque el
papel.
13. los resultados quedaron así:
carotenos color anaranjados q se
movieron más rápido seguidos de las
xantofilas color amarillo luego
clorofilas verde a y luego clorofila b
color verde oliva
14. Después de que el cromatógrafo
se ha secado y antes de proceder a la

12. etapa de espectrofotometría (donde
usted tendrá que destruir su
cromatografía) asegurarse de que
usted determine los valores de Rf para
cada uno de los pigmentos separados.
OBJETIVO No2
COMPARAR EL RANGO DE
ABSORCION DE LOS PIGMENTOS
PRESENTES EN LA ESPINACA.
1. Se cortó las cuatro bandas
principales de pigmentos de la
cromatografía. Puede combinar
bandas de xantofila si hay más de uno
es visible. La banda gris oscura que
puede aparecer entre carotenos y
xantofilas debe ser desechada.
2. se colocó en tubos de ensayo
independientes, los trozos de las
bandas de clorofila a y b y xantofilas
en 2 ml acetona y los carotenoides en
2 ml de éter de petróleo.
3. se Cubrió cada tubo de ensayo con
papel de aluminio y se guardó en hielo
hasta que se ejecutó el espectro de
absorción.
4. se ejecutó un espectro de absorción
de cada solución de pigmentos
usando un espectrofotómetro
5. se inició la lectura de 400 nm y se
leyó la absorbancia cada 20nm de
intervalo hasta 700nm
6. para clorofilas a y b se redujo el
intervalo a 10nm entre 640 y 670
7. por último los resultados fueron
registrados en una tabla para
comparar los espectros de absorción
de los principales pigmentos se debe
realizar graficas comparativas de su
rango de absorción con el objetivo de
comparar los picos de absorción del
laboratorio con los de teoría.
RESULTADOS
Objetivo 1.
En cuanto se terminó el desarrollar la
cromatografía se observó la formación
de franjas de diferentes colores (dos
tonos de verde, amarilloy naranja) a lo
largo del papel de cromatografía, en la
parte superior se localizaron los
carotenos con su color amarillo
distintivo, seguidos de las xantofilas
de color anaranjado y en la parte
inferior se ubicaron las clorofilas a y b.
Carotenos +apolar
Xantofilas

13. Clorofila a
Clorofila b - apolar
Objetivo 2.
Grafica 1. Representación de absorbancia vs longitud de onda la clorofila a en
acetona
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
400
411
422
433
444
455
466
477
488
499
510
521
532
543
554
565
576
587
598
609
620
631
642
653
664
675
686
697
ABSORBANCIA
LONGITUD DE ONDA nm
clorofila a

14. Grafica 2. Representación de la absorbancia vs longitud de onda de la clorofila b
en acetona
Grafica 3. Representación de la absorbancia vs longitud de onda de las xantofilas
en acetona
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
400
412
424
436
448
460
472
484
496
508
520
532
544
556
568
580
592
604
616
628
640
652
664
676
688
700
ABSORBANCIA
LANGITUD DE ONDA nm
clorofila b
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
400
412
424
436
448
460
472
484
496
508
520
532
544
556
568
580
592
604
616
628
640
652
664
676
688
700
absorbancia
longitud de onda nm
xantofilas

15. Grafica 4. Representación de la absorbancia vs longitud de onda de los carotenos
en acetona
Grafica 5. Representación de absorbancia vs longitud de onda de carotenos en
éter de petróleo
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
0.18
0.2
400
412
424
436
448
460
472
484
496
508
520
532
544
556
568
580
592
604
616
628
640
652
664
676
688
700
ABSORBANCIA
LONGITUD DE ONDA nm
carotenos
-0.02
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
400
412
424
436
448
460
472
484
496
508
520
532
544
556
568
580
592
604
616
628
640
652
664
676
688
700
ABSORBANCIA
LONGITUD DE ONDA nm
carotenos en eter de petroleo

16. Grafica 6. Representación de la absorbancia vs longitud de onda de las xantofilas
en éter de petróleo
Los barridos espectrales muestran la
absorción por longitud de onda, lo cual
nos ayuda a determinar la cantidad de
nm de frecuencia de absorción de luz,
que indican que el pigmento que
mayor absorbe la luz en las longitudes
de onda con mayor energía es la
clorofila a, seguido de la clorofila b. Un
Espectro de absorción es muy
parecido a un espectro de acción ya
que dependiendo de la cantidad de luz
visible absorbida y la energía que
estas longitudes posean, se
determinara su acción en la
fotosíntesis, obteniendo una relación
equivalente entre la cantidad de
energía absorbida y la función
fotosintética.
Graficas proporcionadas por los compañeros de cuarto semestre
-0.005
0
0.005
0.01
0.015
0.02
0.025
0.03
0.035
0.04
400
412
424
436
448
460
472
484
496
508
520
532
544
556
568
580
592
604
616
628
640
652
664
676
688
700
ABSORBANCIA
LONGITUD DE ONDA nm
xantofilas en eter de petroleo

17. Grafica 7. Representación de absorbancia vs longitud de onda de los carotenos en
acetona
Grafica 8. Representación de absorbancia vs longitud de onda de la clorofila a en
acetona
-0.05
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
400 500 600 700 800
absorbancia
longitud de onda nm
Carotenos
Carotenos
0
0.5
1
1.5
2
2.5
400 500 600 700 800
absorbancia
longitud de onda nm
Clorofilaa
Clorofila a

18. Grafica 9. Representación de absorbancia vs longitud de onda de la clorofila b en
acetona
Grafica 10. Representación de absorbancia vs longitud de onda de las xantofilas
en acetona
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
400 500 600 700 800
absorbancia
longitud de onda nm
Clorofilab
Clorofila b
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
400 500 600 700 800
absorbancia
longitud de onda nm
Xantofilas
Xantofilas

19. Grafica 11. Representación del espectro de absorción de los pigmentos analizados
(clorofila a, clorofila b, carotenos y xantofilas)
Grafica 12. Representación del espectro de absorción de los pigmentos analizados
(clorofila a, clorofila b, carotenos y xantofilas)
-0.5
0
0.5
1
1.5
2
2.5
400 500 600 700 800
absorbancia
longitud de onda nm
Espectro de absorcionpigmentos
vegetales
Clorofila a
Clorofila b
Xantofilas
Carotenos
-0.1
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
400 450 500 550 600 650 700
ABSORBANCIA
LONGITUD DE ONDANM
espectro de absorcion de pigmentos
predentes en hojas de espinaca
clorofila a clorofila b xantofilas carotenos

20. INTERPRETACIÓN DE LOS
RESULTADOS
Los resultados de la cromatografía
nos muestran que los pigmentos
menos polares son los que mejor se
desplazaban con el solvente mientras
que los más polares fueron los que
menor recorrido tuvieron quedando
como los menos polares los
carotenoides (en orden: carotenos,
xantofilas) y como los pigmentos más
polares las clorofilas (en orden:
clorofilas b, clorofila a) esto
básicamente por las presencia de
pirroles y un núcleo de metálico en las
clorofilas fue la causante de este
comportamiento además la clorofilas b
es más polar ya que en su estructura
tiene unido un grupo formilo, que es el
que le da una mayor polaridad
seguidas de la clorofila a que es un
poco menos polar y entre los más
polares están los carotenos que en
sus estructuras tienen enlaces dobles
conjugados mientras que las
xantofilas presentan la misma
estructura pero forman enlaces con el
oxígeno haciendo que sean un poco
menos apolares que los carotenos.
Se hizo la respectiva comparación de
los espectros de absorción de los
pigmentos vegetales de los
compañeros de cuarto semestre que
nos facilitaron sus datos, con los
nuestro. Existen grandes similitudes
entre los resultados, si no fijamos en la
clorofila a miraremos que en los dos
gráficos se presentan dos grandes
picos que sobresalen sobre los demás
pigmentos, además el
comportamiento de la clorofila b
también es muy parecido
presentando una absorbancia entre
los 400 y 450 nm y otro entre los 630
a 700 nm, como es de esperarse la
clorofila a y b por ser los pigmentos
primarios presentaran una
absorbancia superior a los demás
pigmentos, los carotenos y xantofilas
por ser pigmentos accesorio
presentan una absorbancia más baja,
a pesar de ser primeros los pigmentos
en recibir fotones de energía lumínica,
estos pigmentos accesorio no tienen
una participación muy importante en el
proceso de fotosíntesis, pero si son
vitales en la protección de las clorofilas
por tener una mayor resistencia a la
fotoxidación. Las clorofilas y
carotenoides presentan una absorción
baja entre los 500 y 600 nm que es
donde principalmente se presenta el
color verde del espectro de luz visible,
esta energía no es absorbida es por
eso que la mayoría de las plantas se
las ve de color verde. Cuando las
clorofilas se descomponen comienzan
a verse los carotenos y xantofilas que
son de colores amarillos a naranja.
Según lo que el comportamiento se los
carotenos y xantofilas en éter de
petróleo, se puede decir que este no
es un buen solvente para los
pigmentos ya que se es comparado
con las demás graficas miraremos que
presenta una absorbancia mucho
menor que sus homólogos en cetona,
principalmente las xantofilas que
presentan un completo desorden en la
línea que representa su absorbancia y
en cuanto a números vemos que no
superan los 0.035 de absorbancia
mientras que las xantofilas en acetona
llegaron casi a los 0.25 de absorbancia
que es muy similar a valores de

21. absorbancia de las gráficas que fueron
proporcionadas por los compañeros
de cuarto semestre.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS.
CLOROFILA A:
En esta grafica se observa el barrido
espectral utilizando como disolvente
acetona y se identifica que la clorofila
A tubo mayor absorbancia ya que
los picos de absorción fueron más
altos al medir de 400 a 700 nm con
respecto o los otros pigmentos. Se
observó los picos donde hubo mayor
absorción que fue aproximadamente
desde 400nm hasta 433 donde la
absorbancia fue de 0.6 y en 660
donde la absorbancia fue de 0.4.
CLOROFILA B:
En esta grafica se observó que el
rango de absorción de luz utilizando
acetona como disolvente fue menor
con respecto a la clorofila A porque
solo hubo un pico de mayor absorción
de 400 hasta 460 nm con una
absorbancia de 0.25
aproximadamente tomando el rango
desde 400 a 700nm , pero mayor que
los otros pigmentos ya que están por
debajo de la absorbancia de o.25
XANTOFILAS disolvente acetona
En esta grafica se observó que el
rango de absorción utilizando acetona
como disolvente fue menor que en la
clorofila A y B porque el pico de
absorción solo llego hasta 0.22 entre
400 hasta 466 nm aproximadamente
tomando el rango rango de 400 a 700
nm pero mayor que los carotenos ya
que estuvieron por debajo de la
absorbancia de 0.22
CAROTENOS disolvente acetona
En esta grafica se observó que el
rango de absorción de luz utilizando
como disolvente acetona fue menor
que en todos los otros pigmentos
porque el pico de absorción que tubo
llego hasta 0.18 entre 400 hasta
481nm aproximadamente, en un
rango total de 400 a 700 mn
XANTOFILAS disolvente éter de
petróleo
En esta grafica se observó que el
rango de absorción de luz fue muy
baja porque el pico de absorción llego
a 0.14 entre un rango de 400 hasta
481nm aproximadamente esto debido
a que el éter de petróleo es un mal
disolvente y el pigmento no pudo
observar bien el espectro de luz
CAROTENOS disolvente éter de
petróleo
En esta grafica se observó que el
rango de absorción de luz fue
totalmente baja ya que el pico de
absorción llego a 0.035 entre 400hats
a484 nm aproximadamente esto
debido al disolvente q se utilizó ya que
no se pudo observar con claridad el
rango de absorción y además fue muy
baja
CONCLUSIONES
*Se identificó que la calofila a fue la
que mayor tubo rango de absorción
seguida de la clorofila b y por ultimo
xantofilas y carotenos debido a su
absorbancia y rango en nm

22. *la clorofila a y b absorbieron mayor
rango de luz debido a que son más
polares en disolventes orgánicos y
los carotenoides son menos polares
*los pigmentos presentes en la
espinaca difieren de su rango de
absorción porque los pigmentos
biológicos absorben selectivamente
ciertas longitudes de onda de la luz
mientras que reflejan otras. La luz que
es absorbida puede ser utilizada por la
planta para alimentar las reacciones
químicas, mientras que las longitudes
de onda reflejadas de la luz
determinan el color del pigmento que
aparecerá a la vista
BIBLIOGRAFÍA
1. elementos de fisiología vegetal,
Francisco Gil Martínez, 1995,
ediciones mundi prensa, paginas 411,
429, 491.
2. fisiología y bioquímica vegetal,
J. Azcon-Bieto, 1993, primera edición,
interamericana Mc Graw- Hill paginas
91, 135.
3. Meléndez Martínez, A. Vicario,
I, Heredia, F. (2007). Pigmentos
carotenoides: consideraciones
estructurales y fisicoquímicas, 57 (2),
109 – 115.
4. Karp, G. (2009). Biología
celular y molecular: conceptos y
experimentos. (206-227). México. Mc
Graw Hill.
5. Elena Pérez, U. (2009).
Fotosíntesis: Aspectos Básicos.
Reduca (Biología). Serie Fisiología
Vegetal. 2 (3). 1 – 45.