Este documento describe un experimento de laboratorio para separar pigmentos vegetales como la clorofila y carotenoides mediante cromatografía en papel. Los estudiantes extrajeron pigmentos de espinacas y zanahorias usando éter etílico y los separaron en una tira de papel cromatográfico utilizando metanol como eluyente. Observaciones posteriores mostraron bandas de color verde, amarillo y naranja que indican la presencia de clorofila, xantofilas y carotenos.

1. PRACTICA No 2
Separación de pigmentos vegetales mediante cromatografía en papel.
6° “E”
Laboratorio Clínico “Bioquímica”
INTEGRANTES:
MORENO PEREZ ANA MARIELA
MORENO GUTIERREZ ARIADNA
RODRIGUEZ BALBUENA MARIANA
VARGAS DAMIAN KARLA MAYTE
ZUÑIGA RAMÍREZ MOISES EMMANUEL

2. CETIS 62
PRÁCTICA No. 2
Separación de pigmentos vegetales
mediante cromatografía en papel
OBJETIVO: Extraer diferentes pigmentos, de productos
vegetales, así como la identificación de estos.
MATERIALES
 Mortero
 Tijeras
 Espinacas u hojas verdes
 Embudo con papel de filtro
 Tubos de ensayo en gradilla
 Éter etílico
 Alcohol metílico puro (cuidado, sus vapores son muy
tóxicos)
 Capsula de Petri o vaso de precipitados
 Capilar o micropipeta (cuentagotas en su defecto)
 Tira de papel cromatográfico WathmAN

3. INTRODUCCIÓN
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a
(verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo) y xantofilas (amarillo anaranjado)
en diferentes proporciones.
FUNDAMENTO
La importancia de este trabajo es ver la capacidad de los pigmentos usando el proceso
de cromatografía. Los pigmentos son moléculas que producen color.
Tipos de pigmentos:
Existen varios tipos de pigmentos vegetales que pueden ser encontrados en la clorofila
de las células de estas. Cada una de ellas tienen un color especifico y estas también
absorben cierta cantidad que les da el color. Como en el caso de la xantofila, clorofila A,
clorofila B y caroteno.
Caroteno: El caroteno es el pigmento que da la coloración amarilla clara. Estos ceden la
energía captando a la clorofila. Son moléculas de fotoproteccion.
Xantofila: La xantofila es el pigmento que da la coloración amarillenta como en el caso
de las hojas secas. Estas son compuestos que presentan características fotosintéticas y
son más resistentes a la oxidación.
Clorofila- A: La clorofila-A es el pigmento que da la coloración verde intensa como en el
caso de las plantas. Se encuentran en los cloroplastos y estás presentan características
fotosintéticas.
Clorofila-B: La clorofila-B es el pigmento que da la coloración verde que caracteriza a
los plastos de algas verdes y sus predecesores terrenales. Todos los organismos que
contienen estos plastos son verdes.

4. TECNICA
1. Colocar en un mortero trozos de hojas de espinacas lavadas, quitando las
nervaduras más gruesas, junto con 10 o 15 cc de éter etílico.
2. Triturar sin golpear hasta que el líquido adquiera una coloración verde intensa
(utilizar campana de gases a lo largo de toda la práctica).
3. Filtrar en un embudo con papel de filtro y recoger en un tubo de ensayo (es
suficiente con 2 o3 cc. de solución de pigmentos).
4. Colocar en la tapadera de una caja de Petri metanol absoluto hasta una altura de
0.5 a 1cm.
5. Cortar una tira de papel de filtro de unos 8 cm de anchura y unos 10 a 15 cm de
altura.
6. Poner con el capilar en el papel de cromatografía entre 5 y 10 gotas de solución
de pigmentos, espaciadas en el tiempo con el fin de que vaya secándose el éter
etílico y aumente la cantidad de pigmentos. Las gotas se pondrán siempre en el
mismo punto (se puede marcar con un lápiz), situado a unos 2 cm por encima del
borde inferior del papel.
7. Doblar el papel cromatográfico a lo largo y colocarlo en la placa de petri con la
mancha de pigmento a 1 cm de la superficie del eluyente. Podemos sustituir la
placa petri por un vaso de precipitados y fijar el papel cromatográfico con una
pinza a un soporte horizontal colocado en el borde del vaso (por ejemplo, una
varilla de vidrio).
8. Espera unos 30 minutos y observar.
9. Repite el mismo procedimiento con otro vegetal.

5. RESULTADOS.
En los resultados obtenidos los pigmentos que se observaron
fueron muy notables, ya que el de la zanahoria se tono de
color naranja, lo cual da a saber que son carotenos, eso
significa que son moléculas de fotoprotección y que cede
energía captando a la clorofila, por otra parte también se tono
de color amarillento lo cual implica que son compuestos que
presentan características fotosintéticas y son más resistentes
a la oxidación.
En los resultados de las espinacas la tonalidad de los pigmentos fueron de
color amarillento y verdoso, el color amarillento da a saber que son
xantofilas, como en el caso anterior son compuestos que presentan
diferentes características fotosintéticas y son más resistentes a la oxidación.
Después de cierto tiempo obtuvo la tonalidad verdosa, lo cual significa que
de las espinacas se deriva la clorofila B, y da a saber que caracteriza a los
plastos de algas verdes y sus predecesores terrenales. Cada uno de los
organismos que contienen estos plastos es verde.

6. OBSERVACIONES:
Lo primero que hicimos fue triturar las espinacas y la zanahoria en un mortero le
aplicamos 15 cc de éter etílico, lo estuvimos triturando hasta obtener un líquido verde de
las espinacas y un líquido naranja de la zanahoria. Después de eso lo que hicimos fue
filtrar en liquido en un embudo y recolectamos el líquido en un tubo de ensayo y luego
mesclamos los líquidos del tubo de ensayo después de eso en la tira de papel
cromatográfico colocamos tres cotitas de la solución que recolectamos en el tubo de
ensayo después de eso en un cristalizador colocamos 0.5 de altura del cristalizador le
proporcionaron etanol absoluto, colocamos con el capilar 3 gotitas de la solución de
pigmentos después de eso colocamos la tira de papel cromatográfico en el soporte y
después la solución del etanol absoluto se colocó debajo de la tira y la tira fue
absorbiendo el etanol y después dejamos que pasara el 30 min. Para ver que era lo que
pasaba y conforme pasaba el tiempo la solución se fueron observando los pigmentos uno
de ellos fue de color, amarillo, naranja, y verde y el de la zanahoria fueron amarillo y
naranja.

7. CUESTIONARIO
1. La solubilidad en alcohol de los pigmentos es, de mayor a menor:
carotenos, clorofila a, clorofila b y xantofila. Indicar que pigmento
corresponde a cada banda.
Caroteno: El caroteno es el pigmento que da la coloración amarilla clara. Estos
ceden la energía captando a la clorofila. Son moléculas de fotoproteccion.
Clorofila- A: La clorofila-A es el pigmento que da la coloración verde intensa como
en el caso de las plantas. Se encuentran en los cloroplastos y estás presentan
características fotosintéticas.
Clorofila-B: La clorofila-B es el pigmento que da la coloración verde que
caracteriza a los plastos de algas verdes y sus predecesores terrenales. Todos los
organismos que contienen estos plastos son verdes.
Xantofila: La xantofila es el pigmento que da la coloración amarillenta como en el
caso de las hojas secas. Estas son compuestos que presentan características
fotosintéticas y son más resistentes a la oxidación.
2. ¿Por qué empleamos éter etílico para extraer la clorofila?
Porque la clorofila no es soluble en agua y si en solventes orgánicos, y por
lo tanto se utiliza el éter porque es un solvente económico y no interactúa
con la clorofila
3. ¿Qué pigmentos son los más abundantes?
Clorofila a, clorofila B, los carotenos y las xantofilas.
Cada uno de ellos presenta distinto color y solubilidad.
4. Por encima de las clorofilas aparece más de una banda ¿Qué significado
tiene?
Porque el pigmento es más abundante en la clorofila.
5. Explica el proceso de separación por cromatografía en papel.

8. Es la técnica de separación de sustancias químicas, La muestra se
deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la solución y
evaporando el disolvente.
6. Explica que es el beta-caroteno. Cuáles son los beneficios de su consumo.
Es uno de los pigmentos de un grupo de pigmentos rojos, anaranjados y
amarillos llamados carotenoides.
disminuir los síntomas de asma producida por el ejercicio; para prevenir
ciertos cánceres, las enfermedades del corazón, las cataratas, y la
degeneración macular senil (DMS); y para el tratamiento del SIDA, el
alcoholismo, la enfermedad de Alzheimer, la depresión, la epilepsia, el dolor
de cabeza, el reflujo, la presión arterial alta, la infertilidad, la enfermedad de
Parkinson, la artritis reumática, la esquizofrenia y trastornos a la piel que
incluyen soriasis y vitiligo.
El beta-caroteno también se utiliza en las mujeres desnutridas para
disminuir las probabilidades de muerte y ceguera nocturna durante el
embarazo, así como para la diarrea y fiebre después de dar a luz.
Conclusiones
En esta práctica numero dos nuestra conclusión fue que entre todos los
caracteres más externos de los vegetales, el más notable y característico es
probablemente el color .El color no es únicamente un carácter llamativo de la
vegetación, sino que, además, algunos de los pigmentos que lo condicionan están
estrechamente ligados a las actividades fisiológicas del propio vegetal. También
nos dimos cuenta al concluir la práctica que estos pigmentos se encuentran en el
interior de la células vegetales específicamente en una organela
llamada cloroplasto. Los cloroplastos son simplemente plástidos que contienen
pigmentos clorofílicos. Los compuestos clorofílicos están ligados químicamente
con las estructuras internas del cloroplasto (membrana tilacoides) y se hallan
retenidos en estado coloidal.