Esta práctica describe el procedimiento para separar los pigmentos fotosintéticos de las espinacas mediante cromatografía en papel. Los estudiantes extraerán los pigmentos usando alcohol etílico y carbonato de calcio, y luego separarán las bandas de pigmentos sobre papel filtro. Calcularán los factores de reparto para la clorofila A, clorofila B y xantofila. Concluirán que la xantofila se desplaza más lejos debido a su mayor solubilidad en el solvente, mientras

1. PRÁCTICA #2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA
CÓDIGO: PR-LB-01
REVISIÓN: 00
FECHA: 20/10/2015
PÁGINA: 1 de 8
ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DEL LITORAL
FACULTAD DE INGENIERÍA MECÁNICA Y CIENCIAS
DE LA PRODUCCIÓN
INGENIERÍA EN ALIMENTOS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
INTEGRANTES:
◌ Diego Guzmán
◌ Dayana Jaramillo
◌ Lindsay Nuñez
PROFESORA:
Ing Janaina Madelein Sánchez
PARALELO: 102
FECHA DE ENTREGA: 09/11/2016
TÉRMINO: II / 2016

2. PRÁCTICA #2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA
CÓDIGO: PR-LB-01
REVISIÓN: 00
FECHA: 20/10/2015
PÁGINA: 2 de 8
ÍNDICE
1. OBJETIVOS……………………………………………………………… 3
2. DEFINICIONES…………………………………………………………. 3
3. FUNDAMENTO TEORICO…………………………………………….. 3
4. EQUIPO, MATERIALES, REACTIVOS……………………………….. 6
5. PROCEDIMIENTO……………………………………………………… 7
6. CALCULOS Y RESULTADOS…………………………………………. 8
7. CONCLUSIONES………………………………………………………... 10
8. RECOMENDACIONES…………………………………………………. 10
9. ANEXOS…………………………………………………………………. 11
10. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………. 12

3. PRÁCTICA #2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA
CÓDIGO: PR-LB-01
REVISIÓN: 00
FECHA: 20/10/2015
PÁGINA: 3 de 8
OBJETIVOS:
◌ Extraer los pigmentos fotosintéticos de diferentes vegetales y separarlos a través
de la técnica de cromatografía en papel.
◌ Aprender los principios principales de la separación cromatográfica.
DEFINICIONES:
◌
FUNDAMENTO TEÓRICO:
En cuanto al análisis de los pigmentos y su propiedad física directa, el color, puede
llevarse a cabo por métodos físicos o químicos. Químicamente implica la extracción del
o los compuestos pigmentantes mediante su solubilización en disolventes polares o no
polares, según su estructura. Después se identifica mediante un barrido espectral con el
que se obtienen las longitudes de onda en las que hay una absorbancia máxima. Los
carotenoides, por ejemplo, absorben la energía radiante alrededor de 440 nm, mientras
que las clorofilas, las antocianinas y la mioglobina lo hacen en longitudes de onda de
655, 510 y 555 nm, respectivamente (Badui, 2006).
La cromatografía es un proceso caracterizado por el paso uniforme de una mezcla fluida
(gas o líquido) mediante otra sustancia relativamente inmovilizada (líquida o sólida) la
cual va a permitir la migración de los componentes de la mezcla, en este caso de la
solución del pigmento que obtendremos, las espinacas.
Los colores de los alimentos se deben a diferentes compuestos, principalmente
orgánicos, algunos de los cuales se producen durante su manejo y procesamiento, como
es el caso del color que se desarrolla debido a las reacciones de Maillard, a la
caramelización o a los pigmentos sintetizados o modificados por procesos de
fermentación. Sin embargo, la mayoría de los alimentos deben su color a las sustancias
pigmentantes que contienen o que se añaden. En la mayoría de los casos, estos
pigmentos también tienen una función biológica; éste es el caso de la clorofila en la
fotosíntesis y de la mioglobina en el almacenamiento del oxígeno en el músculo, entre
otros. Muchos pigmentos también se extraen de su fuente natural y se emplean como
colorantes en la elaboración de un gran número de alimentos.
Los pigmentos son moléculas químicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen
ambas cosas a la vez. El color de un pigmento depende de la absorción selectiva de
ciertas longitudes de onda de la luz y de la reflexión de otras (Badui, 2006).

4. PRÁCTICA #2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA
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EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS:
Equipos Materiales Reactivos Muestra
No aplica Mazo y mortero Carbonato de calcio Espinaca
Embudo Alcohol 98°
Placa petri
Probeta
Papel filtro
Tijeras
Soporte para filtración
PROCEDIMIENTO:
◌ Tomamos las muestras y las cortamos finamente, separando las nerviosidades o
semillas.
◌ Colocar la muestra en un mortero junto con 30 ml de Alcohol Etílico, y
adicionar 0.5 g de Carbonato de calcio para evitar que el extracto se oscurezca.
◌ Triturar sin golpear hasta obtener el líquido para filtración.
◌ Filtrar con un embudo y papel filtro para conseguir una solución clarificada.
◌ Verter una pequeña cantidad de disolución de pigmentos en una placa petri.
◌ Colocar un trozo de papel filtro doblado en ángulo recto, de forma que se sujete
vertical.
◌ Dejar reposar durante 15 minutos hasta que se separen las bandas.
CÁLCULOS:
𝐹𝐴𝐶𝑇𝑂𝑅 𝐷𝐸 𝑅𝐸𝑃𝐴𝑅𝑇𝑂 =
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝑂 𝐷𝐸𝐿 𝑃𝐼𝐺𝑀𝐸𝑁𝑇𝑂
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝑂 𝐷𝐸𝐿 𝐷𝐼𝑆𝑂𝐿𝑉𝐸𝑁𝑇𝐸
RF: Factor de reparto
◌ Factor de reparto de la Clorofila A
𝑅𝐹 𝑑𝑒 𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝐴 =
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝑂 𝐷𝐸𝐿 𝑃𝐼𝐺𝑀𝐸𝑁𝑇𝑂
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝑂 𝐷𝐸𝐿 𝐷𝐼𝑆𝑂𝐿𝑉𝐸𝑁𝑇𝐸

5. PRÁCTICA #2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA
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𝑅𝐹 𝑑𝑒 𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝐴 =
1.3
6.1
= 0.21311
◌ Factor de reparto de la Clorofila B
𝑅𝐹 𝑑𝑒 𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝐵 =
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝑂 𝐷𝐸𝐿 𝑃𝐼𝐺𝑀𝐸𝑁𝑇𝑂
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝑂 𝐷𝐸𝐿 𝐷𝐼𝑆𝑂𝐿𝑉𝐸𝑁𝑇𝐸
𝑅𝐹 𝑑𝑒 𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝐵 =
0.25
6.1
= 0.04890
◌ Factor de reparto de la Xantofila
𝑅𝐹 𝑑𝑒 𝑋𝑎𝑛𝑡𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 =
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝑂 𝐷𝐸𝐿 𝑃𝐼𝐺𝑀𝐸𝑁𝑇𝑂
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝑂 𝐷𝐸𝐿 𝐷𝐼𝑆𝑂𝐿𝑉𝐸𝑁𝑇𝐸
𝑅𝐹 𝑑𝑒 𝑋𝑎𝑛𝑡𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 =
2.4
6.1
= 0.39344
CONCLUSIONES:
• Los pigmentos de la clorofila son insolubles en agua, por lo cual en esta práctica
se usó un solvente orgánico (alcohol etílico) ya que estos sí son solubles debido
a su afinidad química.
• Durante la cromatografía, la fase móvil asciende por el papel por capilaridad; los
pigmentos con mayor afinidad al agua son los que ascenderán más. En el caso de
nuestra experimentación fueron las xantofilas con un factor de reparto de 0,393
mientras que las clorofilas con mayor afinidad por el alcohol se desplazan
lentamente; teniendo la Clorofila a con FR de 0,213 y para la Clorofila b un
resultado de 0,041. El factor de reparto de cada clorofila nos muestra la relación
entre los compuestos con las fases, que lo son la fase estacionaria (papel) y la
móvil (solución del pigmento).
• Cuantitativamente tenemos que las clorofilas que menos se alejan son las que
presentan un valor bajo de factor de reparto ya que la distancia que recorre el
pigmento es poca debido a que al ser menos solubles se desplazan lentamente
caso contrario a lo que sucede con las más solubles que se desplazan a mayor
velocidad y por tanto alcanzan a llegar a una mayor distancia.

6. PRÁCTICA #2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA
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PÁGINA: 6 de 8
• Cualitativamente se observó que la coloración de cada pigmento, varía
dependiendo de la absorción selectiva de la luz según la longitud de onda, la
cual es luego reflejada determinando la coloración. En el papel se puede apreciar
que la xantofila ocupa un área mayor, lo que significa que es el que está presente
en mayor cantidad en la muestra, la clorofila a es de un verde intenso y se
encuentra en menor proporción que la clorofila b de coloración verde.
RECOMENDACIONES:
• Trocear la espinaca en pedazos para que al momento de moler se facilite el
trabajo y se lo realice en un tiempo más corto.
• Pesar cuidadosamente la cantidad de carbonato de calcio ya que esto nos servirá
para alcalinizar el medio que antes fue acidificado, al hacer esto evitamos que la
muestra se oscurezca.
• Estar pendiente que el papel dentro de la caja Petri siempre permanezca de
forma vertical sino no podremos concluir ni cualitativamente ni
cuantitativamente sobre la muestra.
• Usar muestras frescas ya que de esta forma tendremos mayor contenido de
clorofila ya que aún no estará en proceso de envejecimiento y la producción de
estos pigmentos (clorofila) disminuya y se hagan visibles otros pigmentos como
los carotenos.

7. PRÁCTICA #2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA
CÓDIGO: PR-LB-01
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FECHA: 20/10/2015
PÁGINA: 7 de 8
ANEXOS
Ilustración 1. Pesado de 0.5 g de Carbonato
de Calcio
Ilustración 2. Muestra (Espinaca) y Alcohol
en el mortero
Ilustración 3. Filtración de
la muestra
Ilustración 4. Filtrad en Caja Petri donde se coloca el papel
filtro
Ilustración 5. Resultados en Papel
Filtro

8. PRÁCTICA #2
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA
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Bibliografía
◌ Badui, S. (2006). Quimica de los alimentos. Pearson.
◌ Browm T., L. E. (2004). Quimica La Ciencia Central. Mexico: Pearson
Education. s.p., C. (s.f.).