Esta práctica utiliza la transformación bacteriana para introducir un plásmido pGLO en E. coli, lo que permite que las bacterias expresen la proteína fluorescente GFP. El protocolo involucra la transformación de E. coli con el plásmido pGLO, la selección de bacterias transformadas en placas con antibióticos, y la observación de colonias fluorescentes en una placa con arabinosa para inducir la expresión de GFP. El objetivo es crear bacterias fluorescentes mediante la incorporación del gen GFP en su ADN a través de

1. PRÁCTICA DE MICROBIOLOGÍA
TRANSFORMACIÓN BACTERIANA
“GFP”
COLMENERO, E. , MARTÍN, C.M, MARTÍN, M.C
MUPES 2015/16

2. Metodología de la práctica
• Flipped Classroom: se realiza siguiendo
el modelo de clase invertida.
• Primero se realiza la práctica con los
alumnos y al día siguiente se observan los
resultados y se explica la teoría asociada
y el objetivo de la práctica.

3. Material necesario Placa de cultivo sembrada con
E.Coli
 Un par de asas de siembra
 Un par de turundas
 Un vaso con hielo y una esponja
para colocar los micro tubos
 Un vaso cubierto por papel de
cocina para verter los desechos
 Dos microtubos con solución de
transformación (CaCl2)
 Dos microtubos con el caldo LB
 Un micro tubo con el plásmido
pGLO
 3 placas de cultivo con: agar ,
agar + ampicilina y agar+
arabinosa +ampicilina

4. Protocolo
• Resuspender las bacterias en solución de
transformación. ( Empleando el asa de
siembra AZUL a partir de la placa con
colonias aisladas de E.Coli HB101, coger
2-3 colonias para cada tubo marcado con
“+” y “-” que contiene 250 µl de solución de
transformación)
• Mantener los tubos en hielo
• Añadir plásmido pGLO a las bacterias
resuspendidas en el tubo “+”. (Con ayuda
del asa de siembra amarilla y de la
solución del plásmido proporcionado por el
profesor)
• Poner los tubos en hielo durante 10´-15´

5. Protocolo
• 5. Choque térmico a 42ºC durante 50´´ y
retornar al hielo durante 2´.
• 6. Añadir LB e incubar a 37º. Añadir 250µl de LB
líquido desde los tubos marcados como “LB” e
incubar a 37º durante 10´´ con agitación.
• 7. Sembrar las placas empleando las 2 turundas
y sembrar desde cada tubo marcado con “+” y
“-” a las placas LB, LBA, LBAA e incubar a 37º
O/N.
• 8. Al día siguiente observar los resultados

6. Resultados observados
• Se observan las 3 placas que sembramos
con el “+” y el “-” en el agar que contenía
caldo LB, LB y ampicilina y LB con
ampicilina y arabinosa
• En la placa marcada en negro que contenia
LB han proliferado libremente colonias de
la bacteria por toda la placa.
• En la placa marcada en rojo que contenía
LB y ampicilina como antibiotico solo han
crecido colonias aisladas en la parte “+”
debido a la barrera de selección que
permite solo que crezcan aquellas bacterias
que han incorporado el pGLO y su
resistencia a la ampicilina.

7. Resultados observados
• En la placa marcada en
azul que contenía LB con
ampicilina y arabinosa se
observan algunas colonias
aisladas en la parte “+”.
• Estas colonias presentan
fluorescencia verde al
iluminarlas con una fuente
de luz UV debido a la
expresión del ADN del
plásmido inducida por la
arabinosa.

8. Objetivo de la práctica
• Transformación genética
de la bacteria E.Coli en
una bacteria fluorescente
al incorporar en su ADN
un gen que codifica para
una proteína fluorescente
de color verde (GFP)
utilizando como
transmisor del gen un
plásmido pGLO.

9. Teoría que queremos trabajar con
la práctica
• Bacterias
• Plásmidos
• ADN
• OMG
• Transformación bacteriana