Este protocolo describe los pasos para identificar y diagnosticar el lupus eritematoso sistémico (LES) mediante la detección de anticuerpos antinucleares (ANA) en una muestra de suero a través de la inmunofluorescencia indirecta. Se especifican los procedimientos de preparación de la muestra y los reactivos, la incubación con el control positivo y negativo y la muestra del paciente, el lavado, la adición del conjugado fluorescente, la observación bajo microscopio de fluorescencia e interpretación de los resultados. El patrón

1. PROTOCOLO DE LABORATORIO PARA LA IDENTIFICACIÓN
Y DIAGNÓSTICO DE LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO
NOMBRE________________________
FECHA_________CEDULA_________
Muestra: Suero
Marcar tubo de muestra con los
datos correspondientes del paciente.
IDENTIFICACIÓN
Solicitud médica: determinación
de anticuerpos antinucleares
(ANA)
Procedimiento:
Inmunofluorescencia Indirecta.
Área de Inmunología
Recepción de la muestra
Kit: NOVA Lite® HEp-2 ANA
Kits/Substrate Slides Para
Diagnóstico In Vitro
Llevar todos reactivos y muestras
a la temperatura ambiente
(20-26°C) y agitar.
Maque y coloque el portaobjetos
con substrato en una cámara
húmeda adecuada.
Añada 20-25 uL de control positivo y
negativo sin diluir en los pocillos 1 y
2 respectivamente. Añada 20-25 uL
de la muestra del paciente diluida a
los pocillos restantes.
Incubar durante 30 minutos en
una cámara húmeda.
Con una pipeta lavar suavemente el
suero con el tampón de PBS II diluido,
con el fin de que no dañar el substrato.
Expulse ( con un golpe seco y
fuerte) el exceso de tampón PBS II
Cubra inmediatamente cada pocillo con
una gota de conjugado fluorescente.
Incubar durante 30 minutos en
una cámara húmeda.
Repetir el lavado con el tampón
de PBS II diluido.
Elimine el exceso de tampón PBS II y ponga en contacto
del borde inferior del portaobjetos con el borde del
cubreobjetos. Deje caer suavemente el portaobjetos
sobre el cubreobjetos de forma que el medio de montaje
fluya hacia el borde superior del portaobjetos sin que se
formen burbujas de aire ni se queden atrapadas.

2. Observar a través de un
microscopio de fluorescencia.
Interpretación de Resultados
NegativoPositivo
La tinción específica es igual o
inferior al Control Negativo.
La tinción específica es
superior al Control Negativo
Determine el patrón de tinción de cada
muestra y pondere su intensidad de
acuerdo con los siguientes criterios:
Reporte: Negativo para anticuerpos
antinucleares – ANA en la muestra
analizada.
4+ Fluorescencia verde manzana brillante .
3+ Fluorescencia verde manzana claro.
2+ Fluorescencia positiva claramente visible.
1+ La menor fluorescencia específica que permite
diferenciar claramente una nuclear y/u citoplasmática
estructura celular de la fluorescencia de fondo.
Anticuerpos: anti DNA, anti ENA
(Sm, RNP, Ro, La) antifosfolípidos -
positivos.
LES si > 4 criterios ACR
DIAGNÓSTICO
LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO
Anemia
Proteinuria
Leucopenia
Hematuria
Trombocitopenia
Cilindros celulares
Elaborado por: Juliana Alejandra Aguirre Rodríguez – Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca – Facultad de Ciencias Básicas – Bacteriología y Laboratorio Clínico.
Foto: ANA moteado y homogéneo, DNA positivo 100x y 40x. (Biocientífica S.A.)