Este documento describe la inmunohistoquimica, que implica la localización de antígenos en los tejidos usando anticuerpos como reactivos específicos. Explica que existen diferentes modalidades como la inmunofluorescencia, inmunoenzimática e inmunomicroscopía electrónica dependiendo del marcador utilizado. También cubre factores importantes como la especificidad del anticuerpo, preparación del tejido y recuperación de la antigenicidad para lograr una detección certera de la reacción antígeno-anticuerpo.

1. INMUNOHISTOQUIMICA INTRODUCCION GENERAL Dr. José Luis Molina Osorio

2. INMUNOHISTOQUIMICA LOCALIZACION DE ANTIGENOS EN LOS TEJIDOS USANDO LOS ANTICUERPOS COMO REACTIVOS ESPECIFICOS [ VISUALIZACION DE LA REACCION ANTIGENO – ANTICUERPO]

3. Histo Cito

6. LA VISUALIZACION Y LOCALIZACION DE UNA REACCION POSITIVA IMPLICA EL MARCAJE (SEŇALIZACION) DEL ANTICUERPO REACTIVO CON UNA SEŇAL DETECTABLE

8. Como la Inmunocitoquímicaimplicauna reacción Ag – Ac, con posibilidades de identificar y discriminar entre muchos antígenos, tienegranventajasobrelas técnicastradicionales de tinción con base química - enzimática. Cubre un espectro mucho mayor de elementoscelulares y tisularesque pueden ser evidenciados a nivel celular y tisular.

9. El arte de la inmunohistoquimica comenzó en la década 40 - 50 cuandoCoons y col.marcaron anticuerposespecíficos con Fluoresceínaparadetectar antígenos en los tejidos

11. MODALIDADES EN LAS REACCIONES INMUNOCITOQUIMICAS

12. SEGUN EL TRAZADOR UTILIZADO:

13. Sustancias Fluorescentes REACCIONES DE INMUNOFLUORESCENCIA Enzima –> Sustrato: REACCIONES INMUNOENZIMATICAS Partículas Electrondensas: REACCIONES DE INMUNOMICROSCOPIAELECTRONICA Isotópos Radiactivos REACCIONES RADIOINMUNOQUIMICAS

14. REACCIONES DE INMUNOFLUORESCENCIA MARCADOR UTILIZADO Sustancias Fluorescentes --- Fluorocromos EQUIPO DE VISUALIZACION Microscopio para Fluorescencia

15. Pancreas Ac. Anti Celulas beta Patologia Renal Glomerulo con Deposito de IgA

16. REACCIONES INMUNOHISTOQUIMICASREACCIONES INMUNOENZIMATICAS MARCADOR UTILIZADO Enzima Sustrato  Precipitado coloreado EQUIPO DE VISUALIZACION Microscopio Optico

17. Linf. Citotoxicos ( T CD8 ) En tejido cardiaco con reaccion de rechazo Enzima: Peroxidasa Sustrato: Diaminobencidina

19. LOCALIZACION DEL ANTIGENO

20. REACCIONES DE INMUNOMICROSCOPIA ELECTRONICA MARCADOR UTILIZADO Sustancias Electrondensas EQUIPO DE VISUALIZACION Microscopio Electrónico

22. SEGUN PASOS DE REACCION DIRECTOS INTERACCION DEL ANTICUERPO “PRIMARIO MARCADO CON EL SUSTRATO ANTIGENICO

24. INDIRECTOS TRES PASOS DOS PASOS ANTICUERPOS “SECUNDARIOS” MARCADOS SON AGREGADOS DESPUES DE LA REACCION INICIAL DEL ANTICUERPO PRIMARIO NO MARCADO

25. A ESTOS DOS TIPOS DE REACCIONES BASICAS SE AGREGA UN NUMERO CRECIENTE DE MODALIDADES TECNOLOGICAS EN LAS CUALES SE UTILIZAN OTRAS SUSTANCIAS ADEMAS DE LOS ANTICUERPOS QUE PERMITEN CON AYUDA DE LA SEÑAL MARCADORA IDENTIFICAR LA REACCION ESPECIFICA DEL ANTICUERPO PRIMARIO CON EL Ag.

28. COMPLEJOS SOLUBLES ENZIMA-ANTIENZIMA EL ELEMENTO ENZIMATICO DE LA REACCION ESTA COMO UN COMPLEJO MOLECULAR [ Enz. (Ag.) ~ Ac ] AŇADIDO DESPUES DEL Ac. SECUNDARIO

30. CON BASE EN LA REACCION AG – AC EL PROPOSITO FUNDAMENTAL DE LA METODOLOGIA INMUNOHISTOQUIMICA Crear condiciones optimas para la union Especifica 2. Detectar certeramente la unión de los reactivos y su localización

31. UN OBJETIVO BASICO A CUMPLIR CON LAS DIFERENTES TECNICAS USADAS ES LOGRAR LA MAYOR SENSIBILIDAD POSIBLE DEL ANTICUERPO ELEGIDO SIN DISMINUIR SU ESPECIFICIDAD SELECCION Y PREPARACION ADECUADA DEL ANTICUERPO PREPARACION Y TRATAMIENTO DEL SUSTRATO TISULAR Ó CITOLÓGICO

32. Especificidad ANTICUERPO de la Reacción Especificidad del Método: Ausencia de señal, por otro mecanismo que no sea la reacción Ag. -- Ac. Investigada Especificidad de Anticuerpo: El Ac. específico (primario) sólo debe tener reactividad con el Ag. a ser localizado

33. Factores del Sustrato Antigénico LA METODOLOGÍA DEBE GARANTIZAR * inmunoreactividad = antigenicidad * morfología (localización) relevante Factores:> Selección del Tejido > Proceso de Fijación > Inclusión / Corte > Bloqueo de Autoseñal

34. LOS DIFERENTES PASOS TÉCNICOS PUEDEN LLEVAR AL “ ENMASCARAMIENTO “ Y / Ó DISMINUCIÓN DE LA ANTIGENICIDAD RECUPERACION ANTIGÉNICA