El documento describe la glicosilación diferencial de las flagelinas polares y laterales en Aeromonas hydrophila AH-3. Resumiendo: 1) Las flagelinas polares están glicosiladas con un oligosacárido de antígeno O:34, mientras que las laterales están acetiladas; 2) Varios genes como flmB, neuB y maf están involucrados en la glicosilación; 3) La glicosilación es necesaria para la motilidad y virulencia de A. hydrophila.

1. Differential glycosilation of polar and lateral flagellins in
Aeromonas hydrophila AH-3
Differential glycosilation of polar and lateral flagellins in
Aeromonas hydrophila AH-3

2. CARACTERÍSTICAS TAXONÓMICAS
Bacilos Gram-negativos
Anaerobios facultativos.
Oxidasa/ Catalasa positivos.
Habitualmente motiles.
57-64% G+C
HABITAT
Ubicuas de medios acuáticos.
Frecuentes en suelo, alimentos y
animales.
CARACTERÍSTICAS DE LAS AEROMONAS MESÓFILASCARACTERÍSTICAS DE LAS AEROMONAS MESÓFILAS
PATOGENESIS
Infecciones en animales poiquilotermos.
Perdidas en acuicultura
Infecciones en animales homeotermos.
- Gastrointestinales.
- Extraintestinales.
(septicemia e infección de heridas).
A. veronii bv sobria, A. hydrophila y A. caviae.

3. Exotoxinas.
Endotoxina (LPS).
Complejos tóxicos extracelulares(LPS-CPS-Protein).
Sistemas de secreción de tipo III y IV..
Lesiones en tejidos y
diseminación
Lipopolisacarido (LPS).
Porinas.
Cápsula (CPS).
Lámina S.
Superar las defensas del
huésped
Sistemas de captura de hierro de alta afinidad.
Sideroforos.
Receptores unidos a membrana.
Multiplicación en tejidos
FACTORES DE VIRULENCIA PROCESO INFECCIOSO
Fimbria.
Flagelo.
Adhesinas no filamentosas (CROMPs y LPS).
Entrada en el huesped
FACTORES DE VIRULENCIA DE LAS AEROMONAS MESÓFILASFACTORES DE VIRULENCIA DE LAS AEROMONAS MESÓFILAS

4. FAGELACIÓN POLAR Y LATERAL EN Aeromonas hydrophila AH-3FAGELACIÓN POLAR Y LATERAL EN Aeromonas hydrophila AH-3
FLAGELACIÓN LATERAL
FLAGELACIÓN POLAR

5. FLAGELACIÓN POLAR EN Aeromonas hydrophila AH-3FLAGELACIÓN POLAR EN Aeromonas hydrophila AH-3

6. FLAGELACIÓN LATERAL EN Aeromonas hydrophila AH-3FLAGELACIÓN LATERAL EN Aeromonas hydrophila AH-3

7. GLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS DE A. hydrophila AH-3GLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS DE A. hydrophila AH-3
A
AH-3:flrA
Medio Líquido Medio Semisólido
FlaA
MGLYINTNVSSLNAQRNLMNTNKSLDTSYTRLASGLRINSAKDDAAGLQIAN
RLTSQINGLDQGNRNANDGISVAQTAEGAMDEVTSMLQRMRTLAQQSANG
SNNTDDRTALQQEYSQLMTEIDRVAKDTTFGGQNLLKGGYVGSFQVGADA
SQTITFRMTTAFTISGMASATSGSATVATTTSGEPYSITKTAGTPVSSTKHVD
HYCGKAPPSRAMANLDYMIKVVDSKRAELGAVQNRFDSTIRNQANVSENV
SAARSRIRDADFATETANLTKQNILQQAASTILSQANQRPQSALSLLQG
MW estimado:
32,4 KDa
FlaB
MAMYINTNTSSLNAQRNLMNTNKSLDTSYTRLASGLRINTAKDDAAGLQISN
RLTSQVNGLDQGNRNANDGISVAQTAEGAMDEVTSMLQRMRTLAQQSAN
GSNNTDDRTALQQEFDQLTTEINRISSDTSFGGQKLLDGNYKGSFQVGADA
GQTITFKMTSAFTISGIASSTKGSATVATSASGEPYTVTKGTTAVTSTSVSSIK
AASSAQLAMANLDFMIKAVDSKRAELGAVQNRFDSTIRNQSNVSENLSAAR
SRIRDADFATETANLTKQNILQQAASSILAQANQRPQSALSLLG
MW estimado:
31,8 KDa
LafA
MGLSIHTNFASMTTQNQLNSTNKMLGTAMQRLGTGLRINSAADDAAGLQIA
TRLQAQSNGQKVGMRNAQDAISMIQTAESAMDEMTNITQRMKDLATQAAN
GTNSTKDLDAMDAEFKELGKELGNIRDNTTFGGTSLLKTGGKFQATGGVTF
QIGASVDEKLVFDASTKVTSVNTAISTASAAALTTGAAAQITAMDSMLEKIGE
ARSAFGANINRLEHTVNNLSNMKENTDMANGRIMDADFAQESTNMTKNQML
MQAGMSVLSNSNQMTGMVTGLLR
MW estimado:
29,5 KDa

8. GLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS POLARESGLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS POLARES
MS/MS de péptidos de flagelina polares de A. hydrophila AH-3
1679 Da = 376 Da- Hex- Hex-HexNAc-HexNAc-HexNAc-102 Da
S. Logan and S.M. Twine
Antígeno O:34
MS/MS de flagelina polar (FlaB) intacta
2
3 4 5
6

9. GLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS POLARESGLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS POLARES
S. Logan and S.M. Twine
MS/MS de flagelina lateral intacta
3
21
0
MS/MS de péptidos de flagelina lateral de A. hydrophila AH-3
Caracterización estructural del glicano mediante MS
C15H25N2O9
C13H21N2O7
C6H10O5
Pse5Ac7Ac
acetilado

10. A. hydrophila ATCC 7966T
A. caviae Sch3N
A. caviae Sch3N
GENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINASGENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINAS
A. hydrophila AH-3
UDP-GlcNAc
FlmA
FlmB
FlmD
NeuB
Pse5Ac7Ac
NeuA
CMP-Pse5Ac7Ac
AH-3∆flmBAH-3∆neuB
Medio Líquido
Medio Semisólido
AH-3∆maf-1
Medio Líquido
Medio Semisólido
Medio Líquido
Medio Semisólido
Medio Líquido
Medio Semisólido
AH-3∆maf-2

11. FRACCIÓN INSOLUBLE (I)
FRACCIÓN SOLUBLE (S)
AH-3 maf-1 maf-2 flrA flaA flaH flmB
flaB
Inmunodetección de flagelinas polares
50-
38-
FLAGELO POLAR
AH-3 maf-2
S I
50-
38-
FRACCIONES AH-3
Inmunodetección de flagelina lateral
FRACCIÓN INSOLUBLE (I)
FRACCIÓN SOLUBLE (S)
AH-3 maf-5 lafA flmA
GENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINASGENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINAS
Medio Líquido Medio Semisólido
AH-3∆maf-5

12. UDPGalNAc 4-epimerasa (Gne)
UDP-GalNAc UDPGlcNAc
Antígeno O:34 AH-3 AH-3∆wecP AH-3::gne
WbaP S. enterica LT2
WecP A. hydrophila AH-3
WecA E. coli VW187
1: AH3
2: AH3∆wecP
3: 2 + wecP AH-3
4: 2 + wbaP LT2
5: 2 + wecA VW187
1 2 3 4 5
Flagelo Polar Purificado
Anti-Flag. Polar
SDS-PAGE
AH-3 gne wecP rmlB
66
45
30
AH-3 gne wecP rmlB
Espectro de masas
GENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINASGENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINAS

13. MIEMBROS DEL GRUPOMIEMBROS DEL GRUPO
Dra. Susana Merino (Titular de Universidad)
Dr. Juan Tomás Magaña (Catedrático de Universidad)
Dra. Susana Merino (Titular de Universidad)
Dr. Juan Tomás Magaña (Catedrático de Universidad)
Investigadores Postdoctorales
Dra. Eleonora Aquilini (Contratado)
Dr. Markus Wilhelms (Contratado)
Investigadores Postdoctorales
Dra. Eleonora Aquilini (Contratado)
Dr. Markus Wilhelms (Contratado)
Investigadores Predoctorales
Ivania Loreto Cortes (Becaria AECI)
Raquel Molero (Becaria FI)
Victor Gonzalez Motos
Investigadores Predoctorales
Ivania Loreto Cortes (Becaria AECI)
Raquel Molero (Becaria FI)
Victor Gonzalez Motos
Técnico de Laboratorio
Mª Teresa Polo
Técnico de Laboratorio
Mª Teresa Polo