Este documento describe un estudio que busca identificar proteínas clave en la progresión de la infección por el virus de la hepatitis B (HBV), desde etapas leves a graves. Los investigadores encontraron un aumento significativo de la alfa 1 antitripsina (AAT) en pacientes con hepatitis B crónica grave en comparación con aquellos con formas leves o agudas, utilizando electroforesis bidimensional y otras técnicas. Concluyen que la AAT puede ser un biomarcador importante para el diagnóstico de la hepatitis B.

1. Alpha-1 antitrypsin is a potential biomarker for hepatitis B Xu-fei Tan, Shan-shan Wu, Shu-ping Li, Zhi Chen and Feng Chen Alexander Aguilar Arias Yulissa Victoria Bertel Serna Biología Molecular Universidad Pontificia Bolivariana Facultad Medicina 2011

2. INTRODUCTION HEPATITIS B Liver disease caused by hepatitis virus Belonging to the family Hepadnaviridae Hepatocellular necrosis or inflammation

3. It may be acute or chronic Can result in: liver cirrhosis, liver cancer, liver failure and even death One of the most common infections worldwide

4. POSSIBLE CAUSES TO HEPATITIS B Sex without condom use Infected needles Toothbrush or razor from an infected person Blood transfusions Spread the baby's mother at the time of birth or breast-milk

5. ALPHA-1 ANTITRIPSIN Serum protease inhibitor Consists of 394 amino acids and three carbohydrate side chains. Produced by hepatocytes Principal defense in the lung against elastase

6. Its concentration varies between 120 – 220 mg/dl measured by nephelometry I s distributed 40% serum and 60% in the extravascular space Electrophoresis is not very accurate so it is analyzed by electrofocusing

7. AAT RELATIONSHIP WITH HEPATITIS The liver secretes 34 mg/kg/24 hours In inflammatory processes, tumor and infection can be increased from 3 to 5 times

8. GENERAL AIM To identify the major proteins in the progression of HBV infection from mild stage to severe stage

9. MATERIALES Y MÉTODOS Información de los pacientes 31 pacientes con hepatitis B crónica. 10 convaleciente de hepatitis B aguda (AHB). 18 relacionados con el carcinoma hepato-celular (HCC). 12 donantes de sangre sanos (controles normales) se inscribieron en este estudio.

10. Aprobado por el comité de ética local. Todos los pacientes fueron HBA positivo. Los pacientes con daños hepáticos crónicos y otras enfermedades fueron excluidos: Hepatitis C Hepatitis D VIH-1positivas y VIH-2 negativo

11. 2-DE Análisis de mezclas complejas de proteínas extraídas: Células Tejidos Muestras biológicas. Este análisis se da por dos etapas: La primera dimensión-es el isoelectroenfoque (IEF), que separa las proteínas según su punto isoeléctrico. La segunda dimensión-es de poliacrilamida-SDS electroforesis en gel (SDS- PAGE), que separa las proteínas de acuerdo a sus pesos moleculares.

12. Figure 1 2-DE images of serum proteins from patients with mild (A) and severe (B) chronic hepatitis. The significantly higher expressed protein with 44kD (C) was further analysed by PMF

13. MALDI-TOF-MS Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization -Time-Of-Flight. Técnica de ionización suave utilizada en espectrometría de masas. Permite el análisis de biomoléculas y moléculas orgánicas grandes que tienden a hacerse frágiles y fragmentarse cuando son ionizadas por métodos más convencionales.

14. Caracterización general implica: Análisis de la masa molecular utilizando cromatografía de permeabilidad en gel, dispersión de la luz y entre otros La secuencia de unidades de repetición utilizando espectroscopia de RMN Valoración de la utilización de análisis de endgroup, espectroscopia de RMN, o espectroscopia FT-IR Examen de pureza utilizando espectroscopia de RMN, análisis elemental y espectroscopia FT-IR.

15. Figure 3 The high expression of ATT in severe hepatitis B patients (Ca: hepatic carcinoma; S: severe hepatitis B; M: mild hepatitis B; A: acute hepatitis; N: normal).

16. Western Blotting Variación de la transferencia Southern. Técnica analítica usada para detectar proteínas específicas en una muestra determinada. Los pasos a seguir para las proteínas: Electroforesis por la técnica de SDS-PAGE poliacrilamida gel electroforesis. Transfiere a un filtro, que se incuba con un anticuerpo. El anticuerpo es detectado de varias maneras.

18. Immunohistoquímica Identificación de un tejido (in situ) por medio de una interacción especifica entre un antígeno y un anticuerpo (marcado). La célula es coloreada para demostrar la presencia y localización celular de una molécula.

19. Figure 5 AAT expression in different cell lines. Six types of cells indicated were lysed and equal amount of proteins were subjected to SDS-PAGE. The fractionized proteins were blotted with anti-AAT and anti-Actin antibodies.

20. RESULTADOS Electroforesis de dos dimensiones (2-DE) Huellas dactilares de péptidos de masas Técnicas de microarrays Incremento significativo de la alfa 1 antitripsina

21. FIGURA 1

22. FIGURA 3

23. FIGURA 5

24. DISCUSSION J. Kenonen et al Firstly introduced microarray technology in biomedical research. He QY, Chiu Many studies focus on biomarker identification for HBV infection. Poon TC However, the methodology used in these studies only detect proteins in the serum. Rimm DL Combined 2-DE with high-throughput tissue microarray technology to study proteins that may be involved with HBV.

25. CONCLUSIONS ALEX AGUILAR ARIAS Plasma proteins are important markers for many diseases, so it is very important to know a tests to determine the concentration of these proteins Alpha-1-antitrypsin is an important biomarker for the diagnosis of hepatitis B YULISSA BERTEL SERNA Due to the different studies that exist for HBV can study various aspects to study it If there is a good protein separation procedure can bring disadvantages and errors in the study of HBV

26. MAPA CONCEPTUAL ALEX AGUILAR

27. MAPA CONCEPTUAL YULISSA BERTEL