Este documento evalúa la replicación del virus de la hepatitis B y el análisis proteómico de la línea celular HepG2.2.15 después de la disminución de la proteína HBx. Las células con siRNA mostraron una disminución en la producción de AgHBs y AgHBe y en la replicación del ADN en comparación con las células sin siRNA. Se identificaron 12 proteínas con alteraciones en su expresión, incluidas proteínas como la calreticulina y HSP70, que pueden jugar un papel cr

1. Evaluation of hepatitis B viral replication andproteomic analysis of HepG2.2.15 cell lineafterknockdown of HBx Hai-Yang Xie, JunCheng, Chun-Yang Xing, Jin-Jin Wang, Rong Su, Xu-YongWei, LinZhou and Shu-SenZheng Estudiantes Tercer Semestre Facultad de Medicina UPB-2011 Medellín-Colombia Por: Alejandro Eusse García María Paulina Henao Zuluaga

5. Proteins are vital parts of living organisms, as they are the main components of the physiological metabolic pathways of cells

7. Is an appropriate tool to identify the molecular events of the viral replication cycle as well as the secretion of HBV particles into the intracellular environmentin vitro.Relation HepG2.2.15 cells after RNA interference of HBxby small interfering RNA (siRNA) and identify 12 proteins with altered expression that may play critical roles in HBx-relatedHBV replication.

10. General Objective Evaluatetherelation of HBxproteinwiththeHepatitis B virus replication in the HepG2.2.15 cell line.

11. Materiales y Métodos Cultivo celular Proceso mediante el cual las células, ya sean procariotas, eucariotas o vegetales, pueden cultivarse en condiciones controladas. Objetivo: En el estudio se realizo el cultivo para poder estudiar en el laboratorio estas células plasmáticas.

12. Materiales y Métodos TransfecciónsiRNA ARN pequeño de interferencia. Interviene en el mecanismo denominado interferencia de ARN donde el siRNA interfiere con la expresión de un gen específico, reduciéndola. Suprimen la expresión de los genes diana mediante el corte del ARN mensajero (ARNm) complementario en dos mitades, a través de la interacción de la hebra antisentido del siRNA con el complejo RISC (RNA-inducedsilencingcomplex). Las dos mitades del ARNm son posteriormente degradadas por la maquinaria celular, lo que conlleva la supresión de la expresión del gen. Objetivo: evaluar los genes relacionados con el virus de la hepatitis.

13. Materiales y Métodos Análisis de AgHBs y AgHBe HBsAg Este análisis se usa para detectar la presencia del virus. Un resultado “positivo” o “reactivo” en el análisis de HBsAg indica que la persona está infectada con el virus de la hepatitis B, lo cual puede significar una infección “aguda” o “crónica”. HBeAg Proteína soluble de la nucleocápside. Puede encontrarse en suero porque tras su síntesis se asocia a un péptido señalizador que lo fija al retículo endoplásmicoliso.

15. Materiales y Métodos PCR Cuantitativa Actualmente se usa el bromuro de etídio (BrEt), q se une estequiomátricamente a ácidos nucleícosy su intensidad es proporcional a la cantidad de ácidos que se une. Pero a pesar de esto aún hay dificultad en la cuantificación de estos. Por esto hay un método simple de análisis de imagen que realiza una precisa cuantificación de bandas de ácidos nucleícosdesarrollados en gel de agarosa.

16. Materiales y métodos 2-DELas células de cada muestra fueron cosechadas y lavadastres veces con PBS, se re suspendieron en 1 ml de solución amortiguadora de lisisy luego se lisan por ultrasonidos de 4 × 10segundos y se incubaron en hielo durante 1 hora. después decentrifugación a 23 000 g durante 30 minutos, el sobrenadantefue cosechado.

17. Materiales y métodos Sds-page Es una técnica ampliamente utilizada en bioquímica, genética, biología molecular y ciencia forense para separar las proteínas de acuerdo a su movilidad electroforética (en función de la longitud de la cadena polipeptídica, masa molecular, modificaciones postraduccionales y otros factores).Es el método de electroforesis empleado con mayor profusión para analizar proteínas. Objetivo: analizar las proteínas que están en relación con el virus de la hepatitis B. gracias al empleo de técnicas de electroforesis.

18. Materiales y métodos El Western blot Es una técnica analítica usada para detectar proteínas específicas en una muestra determinada (una mezcla compleja de proteínas, como un extracto tisular). Mediante una electroforesis en gel se separan las proteínas atendiendo al criterio que se desee: peso molecular, estructura, hidrofobicidad, etc.

19. Resultados La regulación baja de HBxinhibe la producción y expresión de los AgHBe y AgHBs

22. Discussion

23. Discussion

24. Conclusions Is very important to do more research on the mechanism of HBV replication, because that may suggest a new way of treating or preventing a disease that affects millions of people around the world.

25. Conclusions Read scientific articles continually helps us maintain our current knowledge on many diseases, because every day we learn something new in the future will serve us in our career as doctors.

26. Conclusions The use of different techniques applied to the field of molecular biology are a source of esencial information that not only provides valuable information to detect and classify any disease, but provides guidelines and directs us to a focus of study to finally understand why are some diseases that threaten human life.

27. Conclusions The understanding of the various molecular processes such as replication, transcription and translation of DNA, and familiarity to the specific terms of molecular biology allow us comprendre advances and studies that are performed daily, around the world.

28. Mapa ConceptualAlejandro Eusse García

29. Mapa ConceptualMaría Paulina Henao Zuluaga