Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
Twitter.com/@bryanpriegop
Los leucocitos o glóbulos blancos son células que intervienen en la respuesta inmunológica celular de nuestro cuerpo con el fin de protegernos de determinaos factores entre ellos cuerpos extraños, virus, bacterias y parásitos. tambien pueden verse implicados en desordenes moleculares que terminan en una respuesta exagerada de las mismas.
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
Twitter.com/@bryanpriegop
Los leucocitos o glóbulos blancos son células que intervienen en la respuesta inmunológica celular de nuestro cuerpo con el fin de protegernos de determinaos factores entre ellos cuerpos extraños, virus, bacterias y parásitos. tambien pueden verse implicados en desordenes moleculares que terminan en una respuesta exagerada de las mismas.
Clase de técnicas moleculares utilizadas en citogenética humana. Material para la carrera de grado de Bioquímica - Facultad de Farmacia y Bioquímica - Universidad de Buenos Aires.
La biotecnología es una aplicación que hoy en la actualidad se usa en muchos ámbitos, pero es un tema muy debatido en la biotecnología en embriones, etc. De igual manera el uso de la biotecnología se ha hecho grande y muy necesario para ciertas profesiones como policías, médicos, tecnólogos, fisioterapeutas.
1. Bioq. Hor acio Lucer o
Jefe del Labor ator io
de Biología Molecular
IMR-UNNE
2. CITOGENETICA MOLECULAR
1977 INICIO DE LA ERA DE LA CITOGENETICA MOLECULAR
CON ESTE TIPO DE ESTUDIOS SE PUEDE LOGRAR IDENTIFICAR DEFECTOS
SUBMICROSCOPICOS DEL ADN .
LA TECNOLOGIA DE “HIBRIDACION IN SITU FLUORESCENTE COMBINA LAS
TECNICAS DE CITOGENETICA CONVENCIONALES CON TECNICAS MOLECULARES Y
ESTA BASADA EN LA DETECCION DE SECUENCIAS ESPECIFICAS DE ACIDOS
NUCLEICOS TANTO EN CROMOSOMAS COMO EN NUCLEOS INTERFASICOS
FISH:
I-METODO DIRECTO:UTILIZANDO NUCLEOTIDOS MARCADOS CON SUBTANCIAS
FLUORESCENTES PUEDE OBSERVARSE LA SEÑAL INMEDIATAMENTE DESPUES DEL
FISH AL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
II-METODOS INDIRECTOS:SE UTILIZAN SONDAS UNIDAS A MOLECULAS COMO
LA BIOTINA O DIGOXIGENINA MARCADAS CON SONDAS FLUORESCENTES QUE
PERMITEN SU OBSERVACION AL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
HAY UNA AMPLIA VARIEDAD DE SONDAS COMERCIALES Y TAMBIEN PUEDEN
FABRICARSE CON LA TECNICA “NICK TRANSLATION”
3.
4. TIPOS DE SONDAS DE FISH
• SECUENCIAS EN EL GENOMA :
• I-SONDAS DE SECUENCIA UNICA:para la deteccion de
regiones especificas Pj regiones subtelomericas microdelecciones
• II-SONDAS CENTROMERICAS:son sondas alfa satelite que
permiten la deteccion de secuencias altamente repetitivas de las
regiones pericentromericas
• III-SONDAS PARA REGIONES ESPECIFICAS:detecta
secuencias altamente repetitivas localizadas en determinadas
regiones de los cromosomas P j. Yq12
• IV SONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMAS
COMPLETOS (WCP):detectan secuencias de eucromatina en
determinados brazos o cromosomas completos
5. ESTUDIOS FISH
• SOSPECHA DE SINDROME DE MICRODELECION
• RETRASO MENTAL
• PAREJAS CON ABORTOS DE REPETICION
• CROMOSOMAS MARCADORES
• CARACTERIZACION DE REESTRUCTURACIONES
CROMOSOMICAS
• DIAGNOSTICO PRENATAL DE LAS ANEUPLOIDIAS
MAS FRECUENTES
• DIAGNOSTICO DE DIFERENTES ANEUPOLIDIAS EN
ABORTOS ESPONTANEOS
7. LSI BCR/ABL ES Dual
Color Translocation Probe
hybridized to a nucleus
showing one green (native
BCR), one large orange
(native ABL), one smaller
orange (ES) and one fused
orange/green (20IGIF)
signal pattern.
8.
9.
10.
11.
12. Tecnología de citogenética molecular que permite el
estudio y visualización de los 23 pares de cromosomas en
forma simultánea. Sondas marcadas fluorescentemente
son hechas para cada cromosoma al marcar DNA
específico de cada cromosoma con diferentes fluoróforos.
Debido a que hay un limitado número de fluoróforos
espectralmente distintos, un método de etiquetado
combinatorio es usado para generar muchos colores
diferentes. La diferencias espectrales generadas por el
etiquetado combinatorio son capturadas y analizadas
usando un interferómetro agregado a un microscopio de
fluorescencia. El programa de procesamiento de
imágenes entonces asigna un pseudocolor a cada
combinación espectralmente diferente, permitiendo la
visualización de cromosomas coloreados.
Se usa cuando el bandeo con Giemsa u otras técnicas no
son lo suficientemente precisas. no son suficientemente
seguras
13. CUANDO SE PRODUCE UNA DELECION
SUBMICROSCOPICA Y SOLO PUDE
DETECTARSE CON TECNICAS DE
CITOGENETICA MOLECULAR( FISH) Y/O
CON TECNICAS DE GENETICA
MOLECULAR
14.
15. CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS DEL
SÍNDROME DE MICRODELECIÓN 22q11
• Cardiopatía congénita 75%
• anomalías del paladar 69%
• Dismorfia facial (>80%): hendiduras palpebrales
estrechas, nariz alargada con raíz ancha y punta
bulbosa, hipoplasia de alas nasales, filtrum largo,
boca pequeña, orejas displásicas y de implantación
baja
• Déficit inmunológico 77%
• Hipocalcemia neonatal 50%